第(dì)0天：細(xì)胞接種(zhǒng)

→根(gēn)據下表(biǎo)在V mL細胞(bāo)生(shēng)長培(péi)養基中(zhōng)培養種子細(xì)胞(bāo)

每個孔，盤子(zǐ)或燒(shāo)瓶(píng)的(dí)數(shù)量

*對(duì)於特(tè)定(dìng)的細(xì)胞(bāo)類型或懸(xuán)浮(fú)細(xì)胞(bāo)，請參考完(wán)整的方案。

第(dì)1天：轉(zhuǎn)染

→在(zài)血清(qīng)存(cún)在(zài)的情況(kuàng)下進行轉(zhuǎn)染(rǎn)

→僅使用(yòng)jetPRIME®緩衝液(yè)

→以60-80%的融(róng)合(hé)率轉(zhuǎn)染(rǎn)細(xì)胞

每個孔，盤子(zǐ)或燒(shāo)瓶(píng)的數(shù)量

第(dì)2-3天(tiān)：測量(liáng)基因(yīn)表(biǎo)達(dá)

優化方向：

(1)測試不同的(dí)DNA量：X，0.5X和1.5X。

(2)測(cè)試不(bù)同的DNA/jetPRIME®比(bǐ)例(lì)，1:2至1:3。

每個(gè)孔，盤(pán)子(zǐ)或(huò)燒瓶(píng)的(dí)數(shù)量

對(duì)於HEK-293和(hé)HeLa細胞，可以(yǐ)將DNA量(liáng)減(jiǎn)少(shǎo)到(dào)0.5倍，並使(shǐ)用1:2 DNA/jetPRIME®比(bǐ)例(lì)。

提高敏感細胞細(xì)胞(bāo)活力(lì)的技(jì)巧(qiǎo)：

（1）轉染後4小時更換培養(yǎng)基。

（2）將DNA量(liáng)減少(shǎo)到0.5倍，同時保(bǎo)持之(zhī)前(qián)使用的DNA/jetPRIME®比例(lì)。

（3）在較(jiào)早的(dí)時(shí)間(jiān)點（例如轉(zhuǎn)染後24小時而不(bù)是48小時）分(fēn)析轉染。

（4）檢查靶基因是否影響細胞(bāo)活力。

良好(hǎo)的(dí)DNA轉染實踐(jiàn)：

（1）適(shì)當儲存(cún)jetPRIME®（5±3°C）。

（2）確保(bǎo)細(xì)胞(bāo)在(zài)轉(zhuǎn)染(rǎn)前傳(chuán)代(dài)兩次(cì)以上且少於20次。

（3）丟棄過(guò)度流暢的細(xì)胞。

（4）定期(qī)檢查支(zhī)原(yuán)體(tǐ)汙(wū)染情況(kuàng)。

（5）使(shǐ)用報告(gào)基因來建立(lì)和優化轉染(rǎn)條件。

（6）血清質量可能會(huì)嚴重影響(xiǎng)轉(zhuǎn)染(rǎn)效率(shuài)。購買(mǎi)新(xīn)一批血(xiě)清時(shí)或胰蛋白(bái)酶檢查(chá)細(xì)胞活力以及(jí)轉染(rǎn)效率。