酵(jiào)母顯示載體 pYDS1

mAb001

pYDS1是(shì)單(dān)體scFv的酵(jiào)母(mǔ)顯示(shì)載體顯(xiǎn)示在酵母菌株(zhū)EBY100表麵上。AGA1是酵母細胞表麵蛋(dàn)白(bái)和 AGA2通過(guò)2個二(èr)硫鍵偶聯到AGA1。通(tōng)過融合(hé)到(dào) C 端(duān) AGA2通(tōng)過鉸(jiǎo)鏈(liàn)，scFv顯示(shì)在(zài)酵(jiào)母表麵上。N 處的(dí)標誌標簽 scFv C 終點(diǎn)站(zhàn)的(dí)終(zhōng)點站和 V5 標簽的設計(jì)是為了方(fāng)便通過流(liú)式細胞術檢測scFv表達和(hé)抗(kàng)原結合(hé)。（G4S）3 柔(róu)性接頭被(bèi)設(shè)計為VL和VH之間(jiān)的(dí)內接(jiē)頭。這(zhè)個(gè)向量(liáng)設計用(yòng)於VL和VH的逐步克(kè)隆以及VH的(dí)所有酶位(wèi)點和(hé)VL克隆不(bù)出(chū)現在VH和VL種(zhǒng)係(xì)基因和(hé)翻譯的氨(ān)基酸(suān)有利(lì)於(yú)形(xíng)成(chéng)柔(róu)性接(jiē)頭。

酵母分泌表達載體pYS1

mAb004

通過磁性和流式(shì)分選(xuǎn)富(fù)集(jí)抗原特異(yì)性酵母顯示群體後，可(kě)以(yǐ)使(shǐ)用流式細胞術鑒(jiàn)定高(gāo)親和力(lì)的(dí)單(dān)個scFc克隆(lóng)。然而(ér)，這(zhè)既費時又(yòu)費(fèi)力(lì)，以後需(xū)要(yào)將顯(xiǎn)示(shì)器scFvs轉化(huà)為可(kě)溶性(xìng)形(xíng)式，以進(jìn)行(háng)親(qīn)和力(lì)和(hé)其他(tā)表征。 如(rú)果將(jiāng)顯示scFv轉換為(wéi)可(kě)溶(róng)性(xìng)scFv，然(rán)後(hòu)使(shǐ)用高通(tōng)量ELISA來(lái)鑒定(dìng)單(dān)個(gè)克隆，則(zé)會更有(yǒu)效。載(zǎi)體pYS1和(hé)pYS2是(shì)pYDS1，pYDS1.1和(hé)pYDS2的對應(yīng)物，設計用於可(kě)溶性scFv表(biǎo)達。隻需(xū)使用 PCR 從富集的(dí)顯示(shì)酵母群體中擴增 scFv 基因，並使(shǐ)用綫(xiàn)性(xìng)化(huà)載(zǎi)體(tǐ) pYS1，pYS1.1 或(huò) pYS2 共轉化(huà)為 YVH10 酵(jiào)母(mǔ)菌(jūn)株(zhū)，挑選(xuǎn)單(dān)個克(kè)隆，在(zài) 96 個深孔(kǒng)板(bǎn)中(zhōng)培養和誘導，含(hán)有上清液的 scFv 即可進行 ELISA 鑒定。陽性(xìng)克(kè)隆可以(yǐ)從96孔原(yuán)液(yè)中(zhōng)擴增(zēng)，用於大規模(mó)scFv純化，以進一(yī)步表征。載體 pYS1 與(yǔ) pYDS1 和(hé) pYDS1.1 配對用於單體(tǐ) scFv 表(biǎo)達，pYS2 與(yǔ) pYDS2 配(pèi)對用(yòng)於(yú)調光(guāng)器 scFv 表達(dá)。

噬(shì)菌體展(zhǎn)示(shì)載體

 pDCK1

mAb006

載(zǎi)體pDCK1和(hé)pDCL1分別包(bāo)含一個IgG1的CH1常(cháng)數(shù)區(qū)域，以(yǐ)及一個(gè)κ常數(shù)和一(yī)個(gè)λ常數區，隻(zhī)需將VL/VK和VH克(kè)隆到(dào)載(zǎi)體中即可(kě)顯示(shì)Fab。所有恒(héng)定(dìng)區域都針(zhēn)對大腸杆菌表達進行了密(mì)碼(mǎ)子優化，並且所(suǒ)有設計(jì)用於有(yǒu)效消化(huà)和連(lián)接的酶位(wèi)點均(jūn)未(wèi)出(chū)現在(zài)抗體V基因(yīn)中(zhōng)。 長(cháng)材料序列專為VK/VL和VH克隆酶而設計，可實(shí)現(xiàn)高(gāo)效的酶消(xiāo)化(huà)。這(zhè)兩(liǎng)種(zhǒng)載(zǎi)體(tǐ)也(yě)可(kě)用(yòng)於(yú)使用(yòng)Xba I / Not I消(xiāo)化構建(jiàn)噬菌體(tǐ)展(zhǎn)示(shì)scFv文庫(kù)。

哺乳動(dòng)物細胞表達載(zǎi)體(tǐ)pMAM1

mAb013

載(zǎi)體 pMAM1 設計(jì)用(yòng)於(yú)哺乳(rǔ)動物(wù)細(xì)胞(bāo)（如(rú) CHO 或 HEK293 細胞）中的高效(xiào)分泌蛋白(bái)表達。蛋(dàn)白質(zhì)表(biǎo)達(dá)由有效的(dí)CMV啟動(dòng)子驅(qū)動，由一(yī)種(zhǒng)VH3信(xìn)號肽領(lǐng)導，該(gāi)肽是B淋(lín)巴細胞(bāo)中(zhōng)大多數(shù)抗體(tǐ)分泌(mì)的(dí)天(tiān)然產物(wù)，然後(hòu)是(shì)His8標簽以方便蛋(dàn)白(bái)質純化(huà)。多克隆(lóng)位點(diǎn)中(zhōng)的酶(méi)專為方便高效的(dí)基因克(kè)隆(lóng)而設(shè)計。 重組蛋白可(kě)以(yǐ)直接從(cóng)上清液中純(chún)化。如果使(shǐ)用(yòng)無血清哺(bǔ)乳動物(wù)細(xì)胞表達(dá)係(xì)統，一(yī)步鎳樹脂(zhī)純化產(chǎn)生高純度蛋白(bái)質(zhì)。新基(jī)因(yīn)表(biǎo)達(dá)盒允許(xǔ)通(tōng)過(guò)G418選擇建(jiàn)立穩定(dìng)的表達細胞(bāo)係。