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更新時間(jiān):2023-06-28
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polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®是(shì)一種(zhǒng)功(gōng)能*,用途(tú)廣泛的(dí)DNA和siRNA轉染試(shì)劑(jì),用於日常(cháng)實驗(yàn),可(kě)產生高效(xiào)可靠的(dí)科(kē)學(xué)結果(guǒ)。jetPRIME®確保在各(gè)種粘附(fù)細胞中具有高(gāo)的DNA轉(zhuǎn)染(rǎn)效(xiào)率和優異(yì)的基(jī)因(yīn)沉默。jetPRIME®也是DNA/siRNA共(gòng)轉染(rǎn)或(huò)幾種(zhǒng)質(zhì)粒共遞送的理想(xiǎng)選(xuǎn)擇(zé)。此外,jetPRIME®試劑對(duì)細(xì)胞非(fēi)常溫和(hé),因為它(tā)在轉(zhuǎn)染過(guò)程中需要(yào)少量的試劑(jì)和(hé)核酸。
方(fāng)向(xiàng)多(duō)樣,主要的應用(yòng)方(fāng)向(xiàng)如下:
一,質粒(lì)轉染(rǎn)
jetPRIME®導致(zhì)不(bù)同來(lái)源的轉(zhuǎn)染粘附細胞係(xì)以及(jí)原(yuán)代(dài)細胞的百分比非常高,如(rú)下表(biǎo):
細(xì)胞(bāo)類型(xíng) | 細胞係(xì) | 描述 | 轉染(rǎn)效率(shuài) |
上(shàng)皮細(xì)胞 | B16-F10 | 小(xiǎo)鼠黑(hēi)色(sè)素瘤 | 70-80% |
BNL-CI2 | 小(xiǎo)鼠(shǔ)正常胚胎肝細胞 | 50-60% | |
CaCO2 | 人(rén)結腸(cháng)癌上(shàng)皮 | 20% | |
CHO-K1 | 中(zhōng)國倉鼠卵巢 | 70% | |
HCT-116 | 人(rén)結(jié)腸(cháng)癌 | 70% | |
Hela | 人宮(gōng)頸上皮(pí)樣癌 | 70-90% | |
Hepg2 | 人肝癌(ái) | 50-70% | |
Huh-7 | 人肝癌 | 30-50% | |
MCF-7 | 人(rén)乳腺腺癌 | 50% | |
MCF-10A | 人乳腺腺癌 | 40-50% | |
MDCK | 犬腎上皮 | 20% | |
PC-3 | 人(rén)類前(qián)列(liè)腺(xiàn)癌(ái) | 70% | |
Vero | 非洲(zhōu)綠猴腎 | 50% | |
成纖維細胞 | COS-7 | 非洲(zhōu)綠猴腎 | 60-80% |
HEK-293 | 人(rén)胚腎成(chéng)纖維(wéi)細胞(bāo) | 80-90% | |
MRC-5 | 人胚肺成纖(xiān)維(wéi)細(xì)胞 | 50% | |
NIH-373 | 小(xiǎo)鼠胚胎成纖(xiān)維細(xì)胞 | 50-70% | |
成髓細(xì)胞 | Raw 264.7 | 小鼠單核(hé)巨噬細(xì)胞(bāo) | 40-50% |
成肌細胞 | C2C12 | 鼠(shǔ)成肌細(xì)胞 | 70-90% |
神(shén)經(jīng)元(yuán) | SH-SY5Y | 人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤(liú) | 70-80% |
原(yuán)發性肝細(xì)胞 | 人(rén)原(yuán)代肝細胞 | 20-30% | |
原發性(xìng)黑色素(sù)細胞 | 人原代黑素細(xì)胞 | 40-50% | |
表1:使用jetPRIME®的(dí)各種細(xì)胞(bāo)類型的(dí)轉(zhuǎn)染(rǎn)效(xiào)率。轉染(rǎn)後24小(xiǎo)時通(tōng)過(guò)FACS分(fēn)析測(cè)定(dìng)GFP陽性細(xì)胞的(dí)百(bǎi)分(fēn)比。
質(zhì)粒是常(cháng)見(jiàn)於細菌中(zhōng)的環(huán)狀DNA小分子。質(zhì)粒與染色(sè)體DNA分開(kāi)存(cún)在(zài)和復製,在(zài)細菌(jūn)中,質(zhì)粒通常(cháng)攜帶有利(lì)於細(xì)菌生存(cún)的基(jī)因。質(zhì)粒(lì)可以被(bèi)有(yǒu)意地引(yǐn)入所(suǒ)需(xū)的(dí)細胞中(zhōng),並用於(yú)在特(tè)定細胞係中過表達(dá)感(gǎn)興趣的基因(yīn)。這(zhè)一(yī)過(guò)程被(bèi)稱(chēng)為(wéi)DNA轉染,是研(yán)究感(gǎn)興(xīng)趣的基因(yīn)功能或(huò)蛋白(bái)質(zhì)的(dí)常用(yòng)方(fāng)法。
二,基因(yīn)編(biān)輯
CRISPR/Cas9係(xì)統(tǒng)在哺(bǔ)乳動(dòng)物細胞中(zhōng)的(dí)使用(yòng)最近已(yǐ)經(jīng)成為在特定(dìng)基(jī)因(yīn)座(zuò)修飾細(xì)胞(bāo)基(jī)因組的一(yī)種非常(cháng)方便(biàn)的(dí)方(fāng)法。它涉及將(a)編(biān)碼Cas9的(dí)一個(gè)或多個(gè)質粒,特(tè)異性(xìng)gRNA和最(zuì)終要插入的序(xù)列,或(b)一(yī)個(gè)或(huò)兩個質粒(lì)和(hé)RNA分子(zǐ)(gRNA)的混(hùn)合物(wù)瞬時轉染到(dào)哺(bǔ)乳動物(wù)細(xì)胞(bāo)中(zhōng)。
三,siRNA轉染(rǎn)
jetPRIME®可(kě)使多種細胞(bāo)係的內(nèi)源性基因表(biǎo)達降低(dī)90%以(yǐ)上。例如(rú),jetPRIME®介導的用靶向HeLa細(xì)胞(bāo)中內源性(xìng)層粘連蛋(dàn)白A/C的(dí)10nM siRNA雙鏈體轉(zhuǎn)染(rǎn)HeLa細(xì)胞,將(jiāng)層(céng)粘(nián)連蛋(dàn)白/C基(jī)因表(biǎo)達顯著降低到(dào)幾(jī)乎無法檢測(cè)的水平。

圖(tú)1:使用jetPRIME®的(dí)內(nèi)源(yuán)性層(céng)粘連(lián)蛋白A/C沉(chén)默。用(yòng)10nM的21-mer層粘(nián)連(lián)蛋(dàn)白A/C siRNA轉(zhuǎn)染(rǎn)HeLa細胞(bāo)。48小(xiǎo)時(shí)後(hòu),使用抗層粘(nián)連(lián)蛋(dàn)白A/C的(dí)抗體(tǐ)通過(guò)免疫(yì)熒(yíng)光(guāng)顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)評估(gū)層粘連蛋(dàn)白(bái)/C沉(chén)默(mò)。
四,不同核酸(suān)的共(gòng)轉染
jetPRIME®非常(cháng)適合(hé)DNA和siRNA/miRNA共轉染實驗或幾(jī)種DNA質粒(lì)的共遞送,用jetPRIME®進(jìn)行了DNA和(hé)siRNA遞(dì)
送,並在(zài)各種毒性極低(dī)的細胞係(xì)中觀(guān)察到高效的基(jī)因(yīn)沉默(mò)。使用10nM的(dí)siRNA,在貼(tiē)壁細胞中實(shí)現了超過90%的沉(chén)默(mò)(圖(tú)2)。

圖(tú)2:使(shǐ)用jetPRIME®進行(háng)DNA和(hé)siRNA共(gòng)轉染後,幾種(zhǒng)細胞係(xì)中(zhōng)的(dí)外源性螢(yíng)光(guāng)素酶(méi)沉默。在(zài)6孔(kǒng)板(bǎn)中用(yòng)每孔(kǒng)400ng p4CMV Luc和(hé)10nM熒光素(sù)酶siRNA進行(háng)實驗。
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