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技術(shù)文章
更(gēng)新時(shí)間：2023-06-29
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本(běn)說(shuō)明(míng)書以DNA轉染為例進行說明：
第0天：細胞(bāo)接種
→根(gēn)據(jù)下表在(zài)V mL細胞生長培養基(jī)中接種細胞(bāo)
培養皿(mǐn) | 細胞(bāo)數量 | V=轉染過(guò)程中培養(yǎng)基(jī)的體積 |
96孔 | 7500 - 25000 | 0.125 mL |
24孔 | 40000 - 100000 | 0.5 mL |
12孔 | 80000 - 200000 | 1 mL |
6孔/35mm | 150000 - 400000 | 2 mL |
60mm/25cm2燒(shāo)瓶 | 200000 - 850000 | 5 mL |
100mm/75cm2燒瓶(píng) | 1 x 106 - 4 x 106 | 10 mL |
*備(bèi)注：對(duì)於(yú)特定(dìng)的(dí)細(xì)胞(bāo)類型或(huò)懸浮(fú)細胞，請(qǐng)參考完整(zhěng)的方案(àn)。
第1天：使(shǐ)用jetOPTIMUS®試(shì)劑(jì)進(jìn)行轉染(rǎn)
→僅使用(yòng)jetOPTMUS®緩衝液
→以60-80%融合(hé)率(shuài)轉染細胞(bāo)
培養(yǎng)皿(mǐn) | W=jetOPTIMUS®緩衝液(yè)的(dí)體(tǐ)積(jī) | X=添(tiān)加的(dí)DNA量 | Y=jetOPTIMUS®體積(jī) |
96孔 | 12.5 µL | 0.13 µg | 0.13-0.19 µL |
24孔(kǒng) | 50 µL | 0.5 µg | 0.5-0.75 µL |
12孔(kǒng) | 100 µl | 1 µg | 1-1.5 µL |
6孔/35mm | 200 µl | 2 µg | 2-3 µL |
60mm/25cm2燒瓶(píng) | 500 µl | 4 µg | 4-6 µL |
100mm/75cm2燒瓶 | 1000 µl | 10 µg | 10-15 µL |
第2-3天：測(cè)量基(jī)因表達(dá)
protocol優(yōu)化(huà)：
（1）測試不同的DNA量：X，0.5 X和(hé)1.5 X。
（2）測(cè)試(shì)不同的DNA/jetOPTIMUS®比例，1:1至(zhì)1:1.5。
（3）有(yǒu)關(guān)細胞特異性協議，請(qǐng)聯(lián)係(xì)益元利康(kāng)客服獲取。
培(péi)養皿(mǐn) | W=jetOPTIMUS®緩衝液的體(tǐ)積 | X=添加的DNA量(liáng) | Y=jetOPTIMUS®體(tǐ)積(jī) |
96孔 | 12.5 µL | 0.10-0.20 µg | 0.10-0.30 µL |
24孔 | 50 µL | 0.25-0.75 µg | 0.25-1 µL |
12孔(kǒng) | 100 µl | 0.5-1.5 µg | 0.5-2.25 µL |
6孔(kǒng)/35mm | 200 µl | 1-3 µg | 1-4.5 µL |
60mm/25cm2燒瓶(píng) | 500 µl | 2-6 µg | 2-9 µL |
100mm/75cm2燒瓶 | 1000 µl | 5-15 µg | 5-22 µL |
提高敏感(gǎn)細胞細胞(bāo)活(huó)力的(dí)提示：
（1）轉(zhuǎn)染(rǎn)後(hòu)4小(xiǎo)時更(gēng)換(huàn)培養基。
（2）將DNA量(liáng)減少到0.5倍，同時保(bǎo)持之前(qián)使用(yòng)的(dí)DNA/jetOPTIMUS®比例。
（3）在較(jiào)早(zǎo)的時(shí)間(jiān)點(diǎn)（例如(rú)轉(zhuǎn)染(rǎn)後24小(xiǎo)時(shí)而不是(shì)48小時(shí)）分析轉染(rǎn)。
（4）在(zài)敏(mǐn)感細(xì)胞的還原(yuán)血清培養基(jī)中進行轉染。
（5）檢(jiǎn)查(chá)靶基因是否影(yǐng)響細胞活(huó)力。
（6）確(què)保細(xì)胞在轉染前(qián)已傳(chuán)代兩次以上且(qiě)少(shǎo)於(yú)20次。
（7）丟棄過(guò)度培(péi)養的細胞(bāo)。
良好(hǎo)的DNA轉(zhuǎn)染實踐：
（1）適(shì)當(dāng)儲存jetOPTIMUS®（5±3°C）。
（2）定(dìng)期(qī)檢(jiǎn)查(chá)支(zhī)原體汙(wū)染情(qíng)況(kuàng)。
（3）使用(yòng)報告(gào)基(jī)因(yīn)來(lái)建(jiàn)立和(hé)優化(huà)轉染條件。
（4）血(xiě)清質量(liáng)可能(néng)嚴(yán)重影(yǐng)響(xiǎng)轉染(rǎn)效(xiào)率(shuài)。購(gòu)買(mǎi)新(xīn)一批血(xiě)清時(shí)或(huò)胰(yí)蛋(dàn)白酶檢查(chá)細(xì)胞活力以及(jí)轉染(rǎn)效(xiào)率(shuài)。
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生(shēng)物(wù)學(xué)，細胞生物學(xué)等多個方(fāng)向，專注於生命科學試劑，耗材，細胞(bāo)，儀(yí)器等產(chǎn)品銷售，經營的(dí)品(pǐn)牌(pái)主(zhǔ)要有：ThermoFisher，
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