用(yòng)於(yú)WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC實(shí)驗的抗(kàng)體有哪些(xiē)區(qū)別？今天(tiān)我們一起(qǐ)學習一(yī)下(xià)吧！

WB（western blot，蛋(dàn)白質印(yìn)跡(jì)）：是(shì)生(shēng)命科學(xué)領域(yù)實(shí)驗(yàn)中(zhōng)一(yī)種非常常(cháng)見的分(fēn)子(zǐ)生物(wù)學實驗技術，其(qí)原理是先利(lì)用(yòng)SDS-PAGE將蛋白(bái)質(zhì)進行(háng)分(fēn)離(lí)，接著將(jiāng)蛋白(bái)質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上(shàng)，然後再利(lì)用(yòng)抗體進(jìn)行(háng)蛋(dàn)白質檢測(cè)
。通過分析條(tiáo)帶大小和顯(xiǎn)色信號獲(huò)得(dé)目(mù)標(biāo)蛋白質在(zài)細(xì)胞或(huò)組(zǔ)織(zhī)樣(yàng)本(běn)中(zhōng)的表達(dá)情況(kuàng)
。在(zài)實(shí)驗(yàn)過程(chéng)中由於蛋白質(zhì)在電泳(yǒng)前(qián)進(jìn)行了(liǎo)加(jiā)熱變性(xìng)，破壞(huài)了保(bǎo)持蛋白(bái)質二級和三級結構的氫鍵(jiàn)，從而使得(dé)蛋白質(zhì)發生了綫性化，需要(yào)使用(yòng)識(shí)別綫性(xìng)抗(kàng)原表(biǎo)位的抗體
。因(yīn)此(cǐ)WB抗(kàng)體一般選用人工合成(chéng)多肽(tài)作(zuò)為抗(kàng)原(yuán)製備出來(lái)的抗體
。

IHC(immunohistochemical，免疫(yì)組化)：是(shì)通(tōng)過抗(kàng)原抗體特(tè)異(yì)性免疫反應(yīng)和(hé)化學(xué)/熒光(guāng)呈色(sè)反(fǎn)應，利用標(biāo)記(jì)抗(kàng)體(tǐ)對(duì)細胞或(huò)組織內的抗原進(jìn)行(háng)研究(jiū)的(dí)技術
。在(zài)進行(háng)免(miǎn)疫組(zǔ)化(huà)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需(xū)要將(jiāng)組(zǔ)織(zhī)或者細胞進行固定(dìng)，以(yǐ)維持細胞(bāo)的形態結構和天然(rán)狀態下的一致，確保組織(zhī)細胞(bāo)抗原(yuán)特(tè)異(yì)性的(dí)穩定
。但化學物質的固定會(huì)使(shǐ)蛋白(bái)質變性(xìng)，與天然狀態下的(dí)蛋(dàn)白質結(jié)構(gòu)會(huì)存在有一(yī)定(dìng)的(dí)區(qū)別，而(ér)又(yòu)不(bù)同於(yú)WB中加(jiā)熱變性(xìng)變(biàn)成綫(xiàn)性的(dí)結(jié)構
。

免疫(yì)組(zǔ)化抗體識(shí)別的是未經加熱變性處理的(dí)抗原表位(wèi)，有的屬(shǔ)於構象(xiàng)型，有的屬於(yú)綫(xiàn)性的(dí)，構象型表(biǎo)位由(yóu)於受蛋白空間結構(gòu)限製，加(jiā)熱(rè)變性會消(xiāo)失(shī)，而綫性表位不(bù)受蛋白變(biàn)性(xìng)的(dí)影響(xiǎng)，天然(rán)蛋白和(hé)變性(xìng)後(hòu)的蛋白都(dū)含有
。因(yīn)此(cǐ)在做IHC/IF實驗(yàn)中，最(zuì)合(hé)適(shì)是用(yòng)重組蛋(dàn)白(bái)作(zuò)為(wéi)抗原製備(bèi)出(chū)來的抗體，除(chú)此之外也(yě)可以(yǐ)是人(rén)工(gōng)合成(chéng)多(duō)肽作(zuò)為抗(kàng)原製備出來的(dí)抗體(tǐ)
。如(rú)果(guǒ)所(suǒ)用的抗體識別的(dí)是綫(xiàn)性(xìng)表位(wèi)(例如識別蛋(dàn)白上連(lián)續(xù)的(dí)幾個氨(ān)基(jī)酸(suān))那(nà)麼(mó)這(zhè)種(zhǒng)抗(kàng)體則可(kě)以(yǐ)同(tóng)時(shí)用於IHC和(hé)WB，而如(rú)果抗體識(shí)別的(dí)是(shì)構象表位，則隻(zhī)能用於IHC
。

IP(Immunoprecipitation，免(miǎn)疫沉澱)：是通過抗原抗體(tǐ)特(tè)異(yì)性反(fǎn)應來純(chún)化(huà)富集樣(yàng)品中的(dí)目的(dí)蛋白(bái)的一種(zhǒng)方(fāng)法
。一般情況下(xià)是(shì)使(shǐ)目的蛋白與其對(duì)應的(dí)抗體(tǐ)(protein A/G)形(xíng)成免疫復合(hé)物沉澱(diàn)而(ér)被(bèi)收集
。根據檢測(cè)目(mù)標(biāo)的不同可以(yǐ)將(jiāng)IP技(jì)術(shù)分(fēn)為以下(xià)3種：CHIP
，RIP
，Co-lP
。CHIP是(shì)利(lì)用IP技術富(fù)集(jí)蛋白(bái)後(hòu)檢(jiǎn)測與其結合的DNA的量(liáng)；RIP是(shì)檢測與其結合的RNA的量(liáng)；Co-IP則(zé)是檢(jiǎn)測與其結合的(dí)蛋白質(zhì)的量
。

免疫沉(chén)澱是(shì)用(yòng)抗體(tǐ)去(qù)識(shí)別結(jié)合(hé)自(zì)然狀(zhuàng)態下(xià)的蛋(dàn)白質，因(yīn)此做(zuò)IP實(shí)驗(yàn)時(shí)抗(kàng)體(tǐ)最好選(xuǎn)擇由(yóu)天然(rán)蛋(dàn)白作為抗原製備(bèi)出(chū)來(lái)的抗體，當然也(yě)可以(yǐ)選(xuǎn)擇(zé)由重組蛋白作為抗原製(zhì)備的抗(kàng)體(tǐ)，注(zhù)意(yì)最(zuì)好不(bù)要(yào)選(xuǎn)擇(zé)由(yóu)人工(gōng)合(hé)成(chéng)多(duō)肽作(zuò)為抗原(yuán)製備的抗體，因為(wéi)這種抗體識別的位(wèi)點有(yǒu)可能包裹(guǒ)在蛋白內(nèi)部而無法識別
。

FC(flowcytometry，流(liú)式細胞(bāo)術)：是以IF為(wéi)基(jī)礎發(fā)展起來的一種專(zhuān)門(mén)的細胞分析(xī)技術，主(zhǔ)要用於(yú)細(xì)胞的分(fēn)選(xuǎn)
。流(liú)式細胞(bāo)中分(fēn)為兩種(zhǒng)，一種是將(jiāng)細胞(bāo)固(gù)定之後的流(liú)式(shì)，在(zài)選用(yòng)抗(kàng)體(tǐ)時保持(chí)與IF/IHC 一致(zhì)即可(kě)；另外一種是(shì)活(huó)細胞的流式，這種(zhǒng)流(liú)式最好采用(yòng)由重(zhòng)組(zǔ)蛋白作為(wéi)抗原(yuán)製備(bèi)出來的(dí)抗體或(huò)者采用(yòng)由(yóu)天(tiān)然(rán)蛋(dàn)白作為(wéi)抗原製(zhì)備(bèi)的抗體
。

在做流(liú)式細胞(bāo)實(shí)驗(yàn)中由兩(liǎng)種標(biāo)記方法(fǎ)，直(zhí)接標記法(fǎ)和間(jiān)接(jiē)標(biāo)記法
。使(shǐ)用(yòng)直(zhí)接標記(jì)法時應選(xuǎn)擇帶有熒光(guāng)標記的一抗(kàng)；如(rú)果(guǒ)研究(jiū)的蛋白沒有(yǒu)直接標(biāo)記的(dí)一抗，則需使用間接(jiē)標記法(fǎ)，在使(shǐ)用(yòng)間接標記法的過(guò)程(chéng)中需注(zhù)意要(yào)同時(shí)使用可(kě)識(shí)別(bié)靶(bǎ)標抗原一(yī)抗(kàng)和偶聯(lián)熒光(guāng)染(rǎn)色(sè)的(dí)二抗(kàng)
。

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