Q：jetPRIME^®是(shì)哪種類型的化合物(wù)
？

A：jetPRIME^®是由Polyplus-transfection^®公司(sī)合(hé)成(chéng)的zhuan利產品(pǐn)，一(yī)種新型的基於陽離子(zǐ)聚(jù)合(hé)物(wù)的(dí)分(fēn)子。

Q：使用jetPRIME^®進行(háng)轉(zhuǎn)染時，質粒是如何導(dǎo)入的(dí)
？

A：jetPRIME^®和DNA形成(chéng)帶正電荷的復合(hé)物(wù)。這些(xiē)復(fù)合物通(tōng)過內(nèi)吞(tūn)作(zuò)用進(jìn)入(rù)細(xì)胞。隨(suí)後經質子海綿(mián)作用，內涵(hán)體在細胞(bāo)質(zhì)中釋放DNA。當(dāng)有(yǒu)絲分(fēn)裂過程(chéng)中核膜(mó)消失時(shí)，質粒大多到(dào)達(dá)細胞(bāo)核。

Q：我的細(xì)胞比(bǐ)較脆(cuì)弱，無血清時(shí)不(bù)能生長。我(wǒ)可以嘗試在有(yǒu)血(xiě)清的(dí)條件(jiàn)下進行轉染(rǎn)嗎(má)
？

A：與許(xǔ)多(duō)其(qí)他(tā)轉染(rǎn)試(shì)劑相反(fǎn)，在有(yǒu)血(xiě)清(qīng)的(dí)環(huán)境下(xià)，jetPRIME^®的(dí)效(xiào)率更(gēng)高(gāo)。因此(cǐ)，轉染(rǎn)復合(hé)物(wù)可以(yǐ)直接加到(dào)含血(xiě)清(qīng)培(péi)養(yǎng)基(jī)的細(xì)胞中(zhōng)。

無血(xiě)清(qīng)培(péi)養(yǎng)基：Opti-MEM培養基（thermo）

Lipo2000,轉(zhuǎn)染時需要(yào)更換培養(yǎng)為Opti-MEM;需要(yào)用(yòng)Opti-MEM復合(hé)物,轉染(rǎn)6小時後需(xū)要(yào)換液。對(duì)細胞(bāo)毒(dú)性大。

Lipo3000, 轉(zhuǎn)染時(shí)需要更換(huàn)培養為(wéi)Opti-MEM;需(xū)要用(yòng)Opti-MEM復(fù)合物(wù),轉(zhuǎn)染6小時後無需換液。跟(gēn)lipo2000相比，毒(dú)性小(xiǎo)。

抗生素(sù)問題：

jetPRIME^®的(dí)轉染(rǎn)效(xiào)率不受抗(kàng)生(shēng)素的影響(xiǎng)。jetPRIME的常規(guī)批次質(zhì)檢都(dū)是在含(hán)血(xiě)清和(hé)抗(kàng)生(shēng)素(sù)的(dí)培養基(jī)中進(jìn)行(háng)的(dí)。

細胞密度(dù)問題：

細(xì)胞(bāo)密度和傳(chuán)代次數(shù)將(jiāng)影響(xiǎng)轉染效率。推(tuī)薦(jiàn)細胞融(róng)合度(dù)在60%-80%。對於(yú)使用jetPRIME的轉染優化條(tiáo)件，請(qǐng)參(cān)考jetPRIME^®轉染(rǎn)說明書中(zhōng)的(dí)Table 1，根據不同(tóng)培養板推(tuī)薦(jiàn)的細胞(bāo)數(shù)。此外，如果細(xì)胞已(yǐ)經(jīng)培(péi)養很長時間（超(chāo)過20代），建議從液氮中取新(xīn)的細胞(bāo)重新培(péi)養(yǎng)。

比值(zhí)問題(tí)：

Q：DNA/jetPRIME^®的(dí)比(bǐ)值是什(shí)麼(mó)意思
？

A：該比(bǐ)值指的(dí)是每微(wēi)克（ug）DNA相對(duì)應的(dí)jetPRIME微升(shēng)數（uL）。例(lì)如，DNA/jetPRIME^®比值為1：2意思是每ug DNA加(jiā)2uLjetPRIME.

優(yōu)化的(dí)問(wèn)題(tí)：

優(yōu)化的第一步是(shì)將DNA的量增加1.5倍。推薦增加DNA/jetPRIME^®比值(zhí)(每(měi)ug的(dí)DNA，2-3uLjetPRIME^®), 另(lìng)一(yī)種方法(fǎ)是(shì)緩慢(màn)離(lí)心培養板(bǎn)（5min，210g）

擴(kuò)大(dà)的(dí)問(wèn)題：

一般來說(shuō)，DNA的(dí)量(liáng)應(yīng)該和(hé)總細(xì)胞數成比例。參考jetPRIMEprotocol中的推(tuī)薦(jiàn)，根據(jù)不同(tóng)規格的培(péi)養皿(mǐn)，所(suǒ)需要的(dí)DNA和jetPRIME的量(liáng)（Table 2）

細胞(bāo)特異(yì)性問題：

Q：對(duì)於所有(yǒu)細胞可以使(shǐ)用(yòng)同樣(yàng)的條件嗎
？

A：已優(yōu)化的操作(zuò)步(bù)驟可(kě)用於(yú)多種細(xì)胞(bāo)，例如A549, MCF7,U2OS, NIH-3T3, B16-F10, Caco-2等(děng)。更(gēng)多(duō)細胞(bāo)的優(yōu)化(huà)條件，請(qǐng)咨(zī)詢客(kè)服!

HEK-293和HeLa細胞(bāo)問(wèn)題：

Q：HEK-293和HeLa細(xì)胞：是否(fǒu)可(kě)以(yǐ)提(tí)供使用(yòng)jetPRIME轉染HEK-293和HeLa細胞(bāo)的具體建(jiàn)議
？

A：jetPRIME對(duì)於DNA轉染(rǎn)HEK-293 和HeLa細胞都是(shì)非(fēi)常高效的。因此，推薦減(jiǎn)少(shǎo)DNA的量(liáng)（例如6孔板，每(měi)孔1ug-0.5ug），使用1：2的(dí)DNA和(hé)jetPRIME比(bǐ)例。

懸(xuán)浮(fú)細胞(bāo)問題：

Q：jetPRIME^®推薦(jiàn)用於懸浮(fú)細(xì)胞的(dí)DNA轉(zhuǎn)染嗎(má)
？

A：懸(xuán)浮(fú)細胞，例如(rú)T和(hé)B淋巴(bā)細(xì)胞是(shì)眾suo周知的難轉染DNA細(xì)胞，無論哪種化(huà)學方法(fǎ)的(dí)試劑都很難有(yǒu)較好的轉染效(xiào)率。因(yīn)此，通(tōng)常推(tuī)薦(jiàn)電轉或(huò)者病毒轉染核(hé)酸到(dào)懸(xuán)浮細胞(bāo)。

植物(wù)細胞問(wèn)題(tí)：

Q：jetPRIME^®是(shì)否測試過(guò)可以用於(yú)植物細(xì)胞的(dí)轉染(rǎn)
？

A：植(zhí)物(wù)細胞(bāo)富(fù)含纖維素的(dí)膜(mó)阻止了jetPRIME/DNA復(fù)合(hé)物進入(rù)細胞(bāo)。甚至在(zài)脫(tuō)去(qù)纖維素的原生質體階段(duàn)，復(fù)合(hé)物也無(wú)法(fǎ)穿透(tòu)進入細(xì)胞(bāo)質(zhì)。

HUVEC(人臍靜(jìng)脈(mài)內(nèi)皮細(xì)胞(bāo))問(wèn)題(tí)：

Q：jetPRIME^®對(duì)HUVEC的DNA轉染是否有(yǒu)效(xiào)
？

A：對(duì)於HUVEC細胞(bāo)，推(tuī)薦(jiàn)使用(yòng)jetPEI^®-HUVEC，專為該(gāi)細(xì)胞(bāo)的DNA轉(zhuǎn)染(rǎn)設(shè)計的特(tè)異性(xìng)轉染試劑(jì)。可以用(yòng)jetOPTIMUS替代(dài)。

原代(dài)神經元問題(tí)：

Q：對於(yú)原(yuán)代培(péi)養的(dí)神經(jīng)元(yuán)，可(kě)以(yǐ)使用jetPRIME^®嗎
？

A：神經元(yuán)很(hěn)難轉(zhuǎn)染，主要是因(yīn)為(wéi)其(qí)在(zài)培(péi)養(yǎng)的過程中(zhōng)不分裂(liè)。然而(ér)，jetPEI^®已(yǐ)被(bèi)成功用於神經元的體外轉染。

巨(jù)噬(shì)細胞問題(tí)：

Q：對(duì)於DNA轉染巨(jù)噬(shì)細(xì)胞，jetPRIME的(dí)轉(zhuǎn)染效(xiào)率如何(hé)?

A：jetPRIME已成(chéng)功用於Raw264.7的(dí)轉染(rǎn)。按(àn)照standard condition,可以獲得50%的轉(zhuǎn)染效率(shuài)；對於原(yuán)代(dài)巨噬細胞或單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞衍生的巨噬(shì)細胞的DNA轉染(rǎn)，應(yīng)選(xuǎn)擇jetPEI-macrophage。可以用jetOPTIMUS替(tì)代

質粒(lì)共轉(zhuǎn)染問題(tí)：

Q：當(dāng)我(wǒ)想(xiǎng)在一(yī)個實驗(yàn)中進(jìn)行多個(gè)質(zhì)粒(lì)的共轉(zhuǎn)染(rǎn)時，我該如何操作
？

A：對於(yú)多個質(zhì)粒的轉染，每孔DNA的(dí)總量不應超過說(shuō)明書中(zhōng)標明的(dí)DNA量(liáng)。每(měi)個質粒的比例根據質粒的(dí)大小，結構(gòu)和期(qī)望(wàng)的每(měi)個質(zhì)粒(lì)的表達(dá)水平來應(yīng)用。在(zài)每(měi)孔(kǒng)中(zhōng)，每個(gè)質粒至少(shǎo)應占(zhān)總(zǒng)DNA量的10%。

復合物(wù)問(wèn)題：

Q：jetPRIME^®/DNA復(fù)合物可以(yǐ)穩(wěn)定多(duō)長時(shí)間
？

A：復合(hé)物形成的(dí)15-30分(fēn)鐘內(nèi)是(shì)獲得最佳轉染(rǎn)效(xiào)率(shuài)的(dí)時間(jiān)。因此，對於需(xū)要(yào)較長(cháng)孵(fū)育(yù)時(shí)間的高通量篩選(xuǎn)，推(tuī)薦使用(yòng)jetPEI進行(háng)HTS, 因為jetPEI^®/DNA復合物可(kě)以(yǐ)穩定長(cháng)達4小(xiǎo)時。

病毒包裝(zhuāng)問題：

Q：jetPRIME^®是否適用於(yú)病毒包裝
？

A：jetPRIME^®可以用在(zài)傳(chuán)統(tǒng)培養基中(zhōng)進行(háng)病(bìng)毒(dú)包裝。實際上，在(zài)用於(yú)病毒包(bāo)裝(zhuāng)的常(cháng)規細(xì)胞中，使(shǐ)用jetPRIME^®的轉染效率可達90%，例(lì)如HEK-293及其(qí)衍(yǎn)生株，CHO, VERO,WOP和BHK細(xì)胞(bāo)，因(yīn)此會產生(shēng)高病毒滴度（Dewannieux,M., Vernochet, C., Bartoscho, B., Cosset, F.L., Heidmann, T (2011).The mouseIAPE endogenous retrovirus can infect cells through any of the fiveGPI-anchored Ephrin A proteins., PLoS Pthog 7, e1002）.

細(xì)胞活性問(wèn)題(tí)：

Q：如何提高脆弱(ruò)細(xì)胞(bāo)的(dí)細胞活性（例(lì)如，原(yuán)代成纖維細(xì)胞）
？

A：轉(zhuǎn)染(rǎn)對(duì)於(yú)細胞來(lái)說(shuō)是創(chuàng)傷事件。改進(jìn)細(xì)胞活性，可參考(kǎo)以下建(jiàn)議：

-轉(zhuǎn)染後4小(xiǎo)時更(gēng)換(huàn)培(péi)養基

-減少DNA的量(liáng)

-減(jiǎn)少jetPRIME^®的(dí)體(tǐ)積(jī)

-在(zài)含血清(qīng)的培(péi)養基中進行(háng)轉染(rǎn)

-轉染後24小(xiǎo)時分析轉(zhuǎn)染效(xiào)率(shuài)而不是48小時

-確保使(shǐ)用(yòng)jetPRIME^® buffer稀釋jetPRIME和DNA

-檢測質粒(lì)不(bù)含內毒(dú)素(sù)

質粒(lì)大小(xiǎo)問題：

Q：使用jetPRIME^®做(zuò)DNA轉(zhuǎn)染(rǎn)會(huì)有質粒大小的限(xiàn)製(zhì)嗎
？

A：使(shǐ)用jetPRIME^®做(zuò)DNA轉(zhuǎn)染沒有質粒(lì)大小(xiǎo)的限(xiàn)製。然而(ér)，記住(zhù)同樣的DNA量(liáng)，大(dà)質粒(lì)的(dí)基(jī)因拷貝數比(bǐ)小(xiǎo)質粒少。

siRNA問(wèn)題(tí):

Q：可(kě)以(yǐ)使(shǐ)用(yòng)jetPRIME^®轉染siRNA嗎
？

A：jetPRIME^®完(wán)quan可以用於siRNA轉染(rǎn)，使(shǐ)用(yòng)終濃度(dù)10-50nm的(dí)siRNA。然(rán)而(ér)，如(rú)果(guǒ)您主要(yào)感(gǎn)興(xīng)趣的是(shì)siRNA轉(zhuǎn)染(rǎn)，那麼試劑(jì)INTERFERin^®是(shì)您(nín)的選擇(zé)。

保存(cún)問題：

Q：jetPRIME^®如(rú)何保(bǎo)存
？

A：jetPRIME^®是(shì)穩定的(dí)分(fēn)子(zǐ)。室(shì)溫(wēn)運輸jetPRIME^®和(hé)它(tā)的(dí)buffer，為(wéi)長期(qī)保存，應(yīng)儲(chǔ)存在4°C。

加熱問題：

Q：當我(wǒ)收到jetPRIME^®試(shì)劑時，管子(zǐ)完quan是(shì)溫的。它(tā)是否(fǒu)仍然(rán)有(yǒu)效，能(néng)否繼續使用
？

A：jetPRIME^®是(shì)非常(cháng)穩定(dìng)的分(fēn)子。已(yǐ)經做(zuò)了(liǎo)測(cè)試jetPRIME試(shì)劑(jì)穩定(dìng)性的實驗(yàn)。jetPRIME^®在50°C放置48小(xiǎo)時後(hòu)，仍表現出和保存在4°C時相似(sì)的轉(zhuǎn)染效率(shuài)。

冷(lěng)凍(dòng)問(wèn)題(tí)：

Q：我(wǒ)不(bù)小(xiǎo)心凍(dòng)存(cún)了我(wǒ)的jetPRIME^®試(shì)劑，我該(gāi)怎麼(mó)辦(bàn)
？

A：jetPRIME^®可(kě)以(yǐ)耐受(shòu)偶爾(ěr)的(dí)冷凍，而(ér)不(bù)影(yǐng)響轉染效率。然(rán)而(ér)，對於(yú)長期(qī)保(bǎo)存來說，建議(yì)分裝並(bìng)儲(chǔ)存(cún)在4°C，以確保(bǎo)試劑長(cháng)時(shí)間(jiān)有效。

有效期問(wèn)題(tí)：

保(bǎo)存適(shì)當時，jetPRIME^®cat#114-01 (0.1mL)可(kě)以(yǐ)保(bǎo)存6個月。其他規格(gé)的(dí)jetPRIME^®至少可以保(bǎo)存1年。

參考(kǎo)文(wén)獻問題：

Q：我(wǒ)在哪(nǎ)裏可以(yǐ)找到科研人員已成功使用(yòng)jetPRIME^®發表(biǎo)的(dí)文(wén)章(zhāng)
？

A：在(zài)Polyplusproduct citation database,可以找(zhǎo)到引用jetPRIME和Polyplus-transfection公司(sī)其他試(shì)劑的科研論(lùn)文(wén)。

更多(duō)有(yǒu)關(guān)Polyplus轉(zhuǎn)染試(shì)劑jetPRIME®產品問題，請(qǐng)聯(lián)係(xì)Polyplus轉染試劑jetPRIME®代(dài)理(lǐ)商——天(tiān)津益元利(lì)康生(shēng)物科(kē)技有(yǒu)限(xiàn)公司：