CRISPR Cas9酶是一(yī)種(zhǒng)基因編(biān)輯(jí)工(gōng)具，用(yòng)於(yú)修(xiū)改生物(wù)體(tǐ)的基(jī)因組(zǔ)
。CRISPR(Clustered RegularlyInterspaced Short Palindromic Repeats)是一種存在(zài)於(yú)細(xì)菌和(hé)古細(xì)菌中的(dí)一類DNA序列，而Cas9(CRISPR-associatedprotein9)是CRISPR係(xì)統中的(dí)一種酶
。從(cóng)細菌中發(fā)現(xiàn)的(dí)一(yī)種天(tiān)然(rán)的免(miǎn)疫係統，用(yòng)於(yú)抵(dǐ)御病(bìng)毒入侵
。它通過(guò)記(jì)錄病(bìng)毒的DNA片(piàn)段，並將其整(zhěng)合(hé)到(dào)自(zì)身的基(jī)因(yīn)組(zǔ)中(zhōng)，形成(chéng)CRISPR序列(liè)
。當同(tóng)一病(bìng)毒再次入侵時，CRISPR序列(liè)會產生RNA分(fēn)子(zǐ)，與(yǔ)Cas9酶結(jié)合，形(xíng)成復(fù)合(hé)物
。該復合物能(néng)夠識別並切割與(yǔ)CRISPR序(xù)列相匹(pǐ)配的病毒(dú)DNA，從而(ér)保護細(xì)菌免(miǎn)受(shòu)病毒(dú)感染
。
 

　　CRISPR Cas9酶(méi)具有許多(duō)優勢(shì)，使(shǐ)其成(chéng)為廣泛應用於(yú)基因(yīn)編輯領域的工(gōng)具
。首先(xiān)，相比傳統的基因(yīn)編(biān)輯技術，如(rú)鋅(xīn)指核酸(suān)酶(méi)和(hé)轉錄活(huó)化子(zǐ)樣效應(yīng)器(Transcription Activator-LikeEffector Nucleases，TALENs)，CRISPR-Cas9係統(tǒng)更容易設計(jì)和實(shí)施
。其(qí)次(cì)，CRISPR-Cas9係(xì)統具(jù)有(yǒu)高度(dù)的(dí)特異性，可以實現對目標基(jī)因(yīn)組(zǔ)的準確編(biān)輯(jí)
。此外(wài)，CRISPR-Cas9係(xì)統還具(jù)有(yǒu)快速(sù)，相對低(dī)成本(běn)的特(tè)點，使得基(jī)因(yīn)編輯(jí)變得(dé)更加可行和廣泛應用
。
 

　　CRISPR Cas9酶操作步驟：
 

　　1.根據(jù)目(mù)標基(jī)因序(xù)列(liè)設(shè)計(jì)並合成RNA導向探(tàn)針，該探(tàn)針具有(yǒu)與(yǔ)目標基因序(xù)列特異(yì)性互補(bǔ)的(dí)序列
。
 

　　2.將合(hé)成的RNA導向(xiàng)探(tàn)針插入表達(dá)載體中
。
 

　　3.將構建(jiàn)好的酶表達載體通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染引(yǐn)入(rù)目(mù)標細胞中(zhōng)
。
 

　　4.通過PCR，Westernblot或其(qí)他(tā)適當(dāng)的實(shí)驗(yàn)方(fāng)法來檢(jiǎn)測和(hé)驗證是(shì)否(fǒu)成(chéng)功編輯(jí)了(liǎo)目(mù)標(biāo)基(jī)因
。
 

　　5.如果需(xū)要(yào)進一步(bù)分析編(biān)輯(jí)效(xiào)果，可以(yǐ)利(lì)用(yòng)細胞提(tí)取試(shì)劑盒提(tí)取目(mù)標細(xì)胞內(nèi)的(dí)DNA和蛋白(bái)質(zhì)
。
 

　　6.通(tōng)過測(cè)序或(huò)其他相關實(shí)驗方(fāng)法來(lái)分析目標(biāo)細(xì)胞內編輯的(dí)效果(guǒ)
。
 

　　7.分(fēn)析(xī)和統計編輯的效果(guǒ)，以圖表(biǎo)或報(bào)告(gào)的(dí)形(xíng)式進(jìn)行表達(dá)
。
 

　　CRISPR Cas9酶的(dí)儲存條(tiáo)件：
 

　　1.存儲在-80℃的冰箱中，避免暴露(lòu)在室(shì)溫或高溫環(huán)境下
。
 

　　2.避(bì)免頻繁的(dí)凍融循(xún)環(huán)，每次(cì)使(shǐ)用(yòng)前盡可能(néng)使用小分(fēn)裝(zhuāng)方(fāng)式，避(bì)免多次凍(dòng)融(róng)對(duì)酶活(huó)性(xìng)造(zào)成的(dí)影響
。
 

　　3.對高溫敏(mǐn)感(gǎn)，避免將(jiāng)其(qí)長(cháng)時間存放在高溫環境(jìng)或(huò)加(jiā)熱處(chǔ)理
。
 

　　4.根(gēn)據實(shí)驗需求，準(zhǔn)確稀釋，避免(miǎn)使(shǐ)用(yòng)過高或過(guò)低的(dí)酶(méi)濃度，以免(miǎn)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
。
 

　　5.使(shǐ)用(yòng)無(wú)菌技(jì)術操(cāo)作，避免(miǎn)外部細菌或(huò)病毒(dú)的汙染(rǎn)
。