電(diàn)轉(zhuǎn)，也稱電穿(chuān)孔法，是(shì)通(tōng)過脈(mài)衝電(diàn)流在細胞(bāo)膜(mó)上打(dǎ)孔，將(jiāng)外(wài)源分(fēn)子（DNA，RNA ，mRNA等）導(dǎo)入真核細胞內，來改變細胞的特(tè)性，從(cóng)而(ér)達(dá)到(dào)改造(zào)細胞的目(mù)的(dí)，是(shì)實現細(xì)胞(bāo)基因功能(néng)和蛋(dàn)白質表達研究(jiū)的(dí)重(zhòng)要(yào)工(gōng)具。那麼影(yǐng)響電(diàn)轉(zhuǎn)效率的因(yīn)素有(yǒu)哪些(xiē)呢？讓我(wǒ)們(mén)一起(qǐ)來看看吧
！

一，電轉過(guò)程(chéng)

1）電轉(zhuǎn)的完(wán)整操作步(bù)驟包(bāo)括(kuò)電(diàn)轉前操作，電轉執(zhí)行和電轉(zhuǎn)後培(péi)養(yǎng)。在進行電轉前(qián)操(cāo)作時(shí)，電轉試劑(jì)，細胞(bāo)與轉(zhuǎn)染(rǎn)底(dǐ)物(wù)要進(jìn)行混匀，如果混匀(yún)時過(guò)於(yú)激烈(liè)，會破(pò)壞(huài)轉染(rǎn)復(fù)合物的(dí)形(xíng)成(chéng)，從(cóng)而導(dǎo)致轉染(rǎn)效率降低(dī)；
2）在進(jìn)行(háng)電轉前操作(zuò)時，電(diàn)擊緩衝(chōng)液(yè)的(dí)選擇也很重要(yào)，由(yóu)於細胞對緩衝液(yè)的離(lí)子組(zǔ)成(chéng)和滲透(tòu)壓非(fēi)常(cháng)敏(mǐn)感，因(yīn)此組(zǔ)分與(yǔ)細胞(bāo)質(zhì)類(lèi)似的緩衝液有利(lì)於(yú)細(xì)胞電(diàn)擊(jī)後的存活；

3）電(diàn)轉(zhuǎn)執行時，需要(yào)控製電場強度(dù)和脈(mài)衝時(shí)間(jiān)。適(shì)當提(tí)高(gāo)電(diàn)場強度(dù)或延長脈(mài)衝時間(jiān)，能(néng)使底(dǐ)物更容易進入(rù)細(xì)胞，但細(xì)胞的死亡率也(yě)會增(zēng)加。一般(bān)電場強(qiáng)度(dù)設置遵(zūn)循低(dī)電場長時程(chéng)的原(yuán)則。如果(guǒ)選擇內(nèi)置(zhì)優(yōu)化(huà)程序的電轉(zhuǎn)係(xì)統，如Lonza的(dí)Nucleofector係(xì)統(tǒng)，則可以節省摸(mō)索電場強(qiáng)度(dù)和(hé)脈衝時間(jiān)的步(bù)驟(zhòu)。

4）轉染(rǎn)培養(yǎng)基中含有抗生素會影響細(xì)胞(bāo)轉染效率，這(zhè)是因為(wéi)轉染試劑(jì)對(duì)細(xì)胞(bāo)有損傷，這時培(péi)養基(jī)中的抗(kàng)生素會(huì)進一(yī)步損(sǔn)傷(shāng)細(xì)胞，因(yīn)此(cǐ)我(wǒ)們(mén)建議(yì)使(shǐ)用(yòng)不(bù)含抗生(shēng)素(sù)的培(péi)養基或(huò)PBS；

5）電轉(zhuǎn)後培養要(yào)注(zhù)意，如果使用傳統轉(zhuǎn)染(rǎn)試劑，轉(zhuǎn)染後4-6h後必(bì)須(xū)進行換液，否則會(huì)由於(yú)轉(zhuǎn)染(rǎn)試(shì)劑毒性(xìng)而引(yǐn)起細胞死(sǐ)亡(wáng)，最終(zhōng)影響(xiǎng)轉(zhuǎn)染(rǎn)效率(shuài)。

二，細(xì)胞狀態(tài)

1）細胞(bāo)汙染(rǎn)對(duì)細(xì)胞狀(zhuàng)態的影(yǐng)響很(hěn)大(dà)，受到細(xì)菌(jūn)，真(zhēn)菌(jūn)或(huò)支原體(tǐ)汙(wū)染(rǎn)的細胞都會(huì)導(dǎo)致轉染(rǎn)效(xiào)率降低(dī)，細胞死亡率(shuài)增(zēng)加，尤(yóu)其(qí)是支(zhī)原體(tǐ)汙(wū)染悄無(wú)聲息，因此一定(dìng)要做好定(dìng)期的支(zhī)原體(tǐ)檢(jiǎn)測，確保細胞狀態；

2）細胞培養(yǎng)到(dào)不(bù)同密度都能用於電轉(zhuǎn)，但最(zuì)hao的(dí)轉化效率是在(zài)細胞(bāo)的對(duì)數(shù)生長(cháng)期(qī)（15代以內(nèi)，傳(chuán)代(dài)後(hòu)2d）。當細胞(bāo)處於(yú)對數(shù)生長期(qī)時，有絲(sī)分裂較(jiào)旺盛(shèng)，表(biǎo)麵結(jié)構(gòu)密(mì)度(dù)比穩(wěn)定(dìng)期(qī)的細胞(bāo)差(chà)，電轉後，細胞膜(mó)的恢復能力(lì)強，而且處(chǔ)於有(yǒu)絲分(fēn)裂期的細(xì)胞(bāo)更(gēng)容易(yì)接受外源(yuán)DNA。

三(sān)，轉(zhuǎn)染(rǎn)底物狀(zhuàng)態

1）不同的(dí)轉染(rǎn)底(dǐ)物對轉(zhuǎn)染效率都(dū)會(huì)產生不(bù)同的(dí)影(yǐng)響(xiǎng)，例如質(zhì)粒DNA在(zài)大(dà)小，用(yòng)量以(yǐ)及構象這(zhè)三(sān)方(fāng)麵都(dū)影響著電(diàn)轉(zhuǎn)效率，IRES導致(zhì)轉染(rǎn)效率低，轉染mRNA需(xū)要調(tiáo)整洗(xǐ)滌(dí)次(cì)數等(děng)等(děng)；

2）轉染(rǎn)試劑與底(dǐ)物(wù)的配比，也會(huì)影響(xiǎng)轉染效率(shuài)，因此需要根據(jù)說明(míng)書或參(cān)考文獻(xiàn)來(lái)進(jìn)行配比(bǐ)優化實驗，選用(yòng)最佳配比濃(nóng)度(dù)；

3）底物的內毒(dú)素，也(yě)會(huì)影(yǐng)響轉染效率(shuài)，內毒素含量過高，會導(dǎo)致轉染過程中(zhōng)細(xì)胞狀(zhuàng)態變差(chà)，從而(ér)增(zēng)加細(xì)胞死亡率，降低轉染(rǎn)效率，因(yīn)此要(yào)對內(nèi)毒(dú)素進行(háng)控(kòng)製。

影(yǐng)響電轉(zhuǎn)效(xiào)率(shuài)的(dí)因素(sù)有(yǒu)很多，總(zǒng)結下來有三方麵：電轉過程，細胞狀(zhuàng)態(tài)以(yǐ)及轉染底物(wù)狀態(tài)。隻有了(liǎo)解(jiě)影(yǐng)響電(diàn)轉效率(shuài)的(dí)因素(sù)有(yǒu)哪些(xiē)，我(wǒ)們才能夠“對(duì)症下(xià)藥(yào)"。更多有(yǒu)關影(yǐng)響(xiǎng)電(diàn)轉效(xiào)率(shuài)的因(yīn)素問(wèn)題(tí)，請聯係(xì)天(tiān)津(jīn)益元利康生(shēng)物科技有限公(gōng)司(sī)：