電轉(zhuǎn)，也(yě)稱(chēng)電穿孔法，是通過(guò)脈(mài)衝(chōng)電流在細(xì)胞(bāo)膜上打孔，將(jiāng)外源分子(zǐ)（DNA，RNA ，mRNA等(děng)）導入(rù)真(zhēn)核(hé)細胞內，來改變(biàn)細(xì)胞(bāo)的(dí)特(tè)性，從而達(dá)到(dào)改造細(xì)胞的目的，是(shì)實(shí)現細(xì)胞基因功能(néng)和(hé)蛋(dàn)白質表達(dá)研究的重(zhòng)要(yào)工(gōng)具(jù)。那(nà)麼(mó)該(gāi)如(rú)何提(tí)高(gāo)電轉(zhuǎn)效(xiào)率呢
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一(yī)，細胞(bāo)收(shōu)集時：

1)在(zài)消(xiāo)化(huà)貼壁細胞時(shí)，一定(dìng)要注意(yì)終(zhōng)止胰(yí)酶反(fǎn)應(yīng)，防止過(guò)度(dù)消(xiāo)化(huà)；最好(hǎo)使(shǐ)用專業(yè)的胰(yí)酶中(zhōng)和劑(jì)；

2)在進行細(xì)胞(bāo)離心(xīn)時(shí)，使(shǐ)用低轉(zhuǎn)速(sù)長(cháng)時間離心，提升細胞的存活率；

3)選擇合(hé)適(shì)狀態的細胞(bāo)，一般原代細(xì)胞可以傳1-2次後(hòu)使(shǐ)用(yòng)；盡量挑選迭代次(cì)數(shù)少(shǎo)的(dí)細(xì)胞(bāo)，如果是(shì)凍(dòng)存(cún)細(xì)胞(bāo)，建議復蘇(sū)1-2h後(hòu)使用(yòng)；

4)選(xuǎn)擇(zé)對(duì)數(shù)增長(cháng)期(qī)的(dí)細胞；

5)做好支原體清(qīng)除。

二，試劑(jì)添(tiān)加：

1）電轉試劑的添加(jiā)隻需室(shì)溫(wēn)操作(zuò)即(jí)可(kě)；

2）細(xì)胞在試劑中停留不超20min，混合好(hǎo)盡快(kuài)開始實驗；

3）轉染(rǎn)的底物(wù)占比不(bù)能大(dà)於(yú)總體(tǐ)積(jī)的10%，比如(rú)轉染體係100ul，底(dǐ)物最(zuì)多(duō)添加10ul；

4）在(zài)消(xiāo)化的(dí)細(xì)胞進行配置時(shí)，一(yī)定(dìng)要(yào)離(lí)心並完(wán)quan去(qù)除殘(cán)留(liú)培(péi)養(yǎng)基(jī)；

5）在加入到(dào)電(diàn)極(jí)杯(bēi)中(zhōng)時，要(yào)避(bì)免(miǎn)產生(shēng)氣(qì)泡，從而影響電脈(mài)衝；

6）對底(dǐ)物(wù)進行內毒(dú)素(sù)控製；

7）轉染試劑與底物濃(nóng)度配比控製；

8）如果(guǒ)是mRNA轉(zhuǎn)染，可(kě)多洗(xǐ)滌2次。

三(sān)，程序(xù)設置：

1）使用(yòng)電(diàn)轉(zhuǎn)儀，程序已(yǐ)經(jīng)設定好，可(kě)以根據不同的(dí)細胞名(míng)稱(chēng)，選(xuǎn)擇(zé)對應的最(zuì)you程序；根據實(shí)際情(qíng)況(kuàng)，可(kě)以對(duì)程(chéng)序(xù)進行微調(tiáo)，確保(bǎo)轉染效率和細胞存(cún)活率。

2）使用需(xū)要(yào)自(zì)行設置(zhì)的(dí)儀器(qì)，一般電場強度設置遵循低電場(cháng)，長時程的原則。

四，細(xì)胞重懸：

1）轉染(rǎn)結束之(zhī)後，可以(yǐ)先停(tíng)留10min再(zài)加(jiā)培(péi)養基重懸；

2）使(shǐ)用無(wú)鈣(gài)培養基(jī)重懸(xuán)，5-10min後(hòu)轉移細(xì)胞(bāo)到培(péi)養皿上；

3）後續(xù)的(dí)實驗一般在轉(zhuǎn)染後24h再(zài)進行(háng)；

4）電(diàn)轉(zhuǎn)後(hòu)的(dí)細(xì)胞(bāo)，鋪板(bǎn)數(shù)量(liáng)翻(fān)一倍。

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