轉染是生(shēng)物學實驗(yàn)中常(cháng)用(yòng)的實驗(yàn)技術(shù)，那麼你知道DNA轉(zhuǎn)染有何注(zhù)意事項嗎？讓我們(mén)一起(qǐ)來看(kàn)看吧！

一(yī)，質粒DNA轉(zhuǎn)染(rǎn)注意事(shì)項(xiàng)

1. 啟動子的(dí)選(xuǎn)擇

啟動子的選擇對(duì)於轉(zhuǎn)染基因的(dí)有效(xiào)表達是非常重要的。對於轉染(rǎn)過程本身雖然(rán)無甚影(yǐng)響(xiǎng)，但是對(duì)轉染(rǎn)結(jié)果(guǒ)卻有著(zhuó)微妙的影(yǐng)響。

2. 質粒的(dí)大(dà)小(xiǎo)和(hé)質量

綫性化還(huán)是(shì)超螺(luó)旋會影(yǐng)響(xiǎng)轉染(rǎn)結果：超(chāo)螺旋質(zhì)粒(lì)的轉(zhuǎn)染效率比(bǐ)綫性DNA高得多，特(tè)別是瞬(shùn)時轉染。而綫性化DNA轉(zhuǎn)染的(dí)整合幾率高(gāo)。質(zhì)粒太大(dà)了轉(zhuǎn)染會困(kùn)難一些(xiē)。畢竟，相(xiāng)對(duì)致密(mì)，較小的(dí)外(wài)源異(yì)物被細(xì)胞(bāo)內吞(tūn)的幾率(shuài)要大一(yī)些(xiē)。如果你(nǐ)的質(zhì)粒(lì)正好(hǎo)比較大(dà)，又沒(méi)有(yǒu)經驗，選(xuǎn)擇(zé)特(tè)別注(zhù)明(míng)可以轉大質(zhì)粒(lì)的轉(zhuǎn)染試劑(jì)成(chéng)功幾率(shuài)會高(gāo)一些(xiē)。有(yǒu)的轉(zhuǎn)染試劑(jì)還(huán)會提(tí)供一些促進DNA凝聚的成(chéng)分，使得(dé)DNA形成(chéng)轉染復合物時更致(zhì)密一(yī)些，更(gēng)容易轉(zhuǎn)染(rǎn)一(yī)些。純(chún)化質粒(lì)的(dí)質量也(yě)會影響(xiǎng)轉(zhuǎn)染效率，一定要選擇(zé)高(gāo)質量(liáng)的(dí)質粒。

3. 質粒(lì)DNA的濃度(dù)和(hé)量(liáng)

既然質(zhì)粒(lì)純(chún)化已經不成(chéng)問題(tí)，初(chū)學者(zhě)通常(cháng)都不會(huì)在(zài)乎甚至(zhì)願意(yì)多加點DNA，但是要注(zhù)意(yì)的是，DNA量(liáng)過(guò)少(shǎo)固(gù)然轉染效(xiào)率(shuài)不高(gāo)，DNA量過(guò)多(duō)同樣會降低轉染效率。所以(yǐ)預實驗(yàn)需要按照說明(míng)書(shū)的(dí)要(yào)求(qiú)，按(àn)一定比例混合(hé)適量的質粒DNA和(hé)轉染試劑(jì)。有的轉染試(shì)劑(jì)要(yào)求DNA的(dí)量多(duō)些(xiē)，有(yǒu)的(dí)轉染試劑效(xiào)率(shuài)高(gāo)隻要很少(shǎo)DNA。

4. 轉染(rǎn)試(shì)劑(jì)的選擇

在確(què)定了質粒的質(zhì)量(liáng)之(zhī)後，就(jiù)要(yào)考慮轉染(rǎn)試劑(jì)的(dí)選擇了。目前(qián)大多數(shù)用的是脂質體類的轉染試劑，但這類試劑的(dí)毒(dú)性較(jiào)大(dà)，轉(zhuǎn)染效率低，最好選(xuǎn)擇非脂(zhī)質體(tǐ)的轉(zhuǎn)染試(shì)劑，如(rú)Entranster試劑。

二，細胞DNA轉(zhuǎn)染注意事項

1. 優化(huà)條件

質(zhì)粒(lì)不同，所轉染的細胞不同及定量的(dí)準(zhǔn)確(què)性(xìng)等(děng)因(yīn)素(sù)會導致在(zài)一(yī)些(xiē)情(qíng)況(kuàng)下(xià)所做的(dí)轉(zhuǎn)染不(bù)在(zài)該優(yōu)化條件(jiàn)內(nèi)。這(zhè)種情(qíng)況下(xià)需(xū)要對質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑的(dí)配(pèi)比進(jìn)行優(yōu)化。另外(wài)，可選用(yòng)更合(hé)適的轉染(rǎn)試(shì)劑，如Entranster試劑。

2. 抑(yì)製(zhì)劑(jì)

不(bù)要(yào)在用於(yú)製備(bèi)DNA-轉染(rǎn)試(shì)劑(jì)復合物(wù)的培養基(jī)中使用(yòng)抗生(shēng)素，EDTA，檸(níng)檬(méng)酸鹽，磷酸鹽(yán)，RPMI，硫酸軟骨素，透(tòu)明(míng)質(zhì)酸(suān)，硫(liú)酸(suān)葡聚糖(táng)或其他硫(liú)酸(suān)蛋(dàn)白(bái)多糖。

3. 細(xì)胞狀(zhuàng)態及融合度

長勢(shì)旺盛(shèng)的細胞轉染效果更佳，細(xì)胞密(mì)度應(yīng)該在轉(zhuǎn)染(rǎn)時融(róng)合(hé)度至(zhì)少70%以上(shàng)。

4. DNA純度(dù)及數量(liáng)

確保質粒(lì)OD值(zhí)A260/A280在1.8~2.0之間(jiān)。DNA量不能(néng)太(tài)高(gāo)，單(dān)獨DNA也會(huì)對細(xì)胞(bāo)生(shēng)長有(yǒu)一(yī)個基礎的影響。

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