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更新時(shí)間:2023-10-10
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一,如(rú)何(hé)保(bǎo)存提取(qǔ)出(chū)的(dí)RNA?
提(tí)取(qǔ)後溶解於RNase-free Water中,RNA樣(yàng)品建議(yì)立即(jí)進(jìn)行(háng)下(xià)遊(yóu)實(shí)驗(yàn),如需(xū)儲存,建(jiàn)議分裝(zhuāng)保(bǎo)存(cún)於(yú)-80℃。避免多次(cì)取(qǔ)用樣品,反(fǎn)復(fù)凍融。
二,為什(shí)麼提取(qǔ)的(dí)RNA有降(jiàng)解(jiě)?
1.使用(yòng)的(dí)組織(zhī)材料不新(xīn)鮮(xiān)。提(tí)取RNA應采用新(xīn)鮮的組織材料,或將新(xīn)鮮組(zǔ)織(zhī)材料(liào)用液氮(dàn)迅(xùn)凍後置(zhì)於(yú)-80℃保存(cún)。
2.提取RNA時使用(yòng)的試(shì)劑及(jí)耗材中混(hùn)有(yǒu)RNase。
三(sān),RNA分(fēn)離(lí)過程(chéng)中(zhōng)水(shuǐ)相與有機相分(fēn)離不(bù)全,提取的RNA含量低。
可(kě)能是氯仿(fǎng)混合(hé)不(bù)充(chōng)分,離(lí)心時轉速不夠或離心(xīn)時間太(tài)短(duǎn)。使(shǐ)得回(huí)收的RNA水(shuǐ)相(xiāng)低於(yú)500 µL。
四(sì),如何防止提(tí)取RNA過程中(zhōng)RNA的降(jiàng)解?
1.實(shí)驗(yàn)過(guò)程(chéng)中(zhōng)使用的玻璃器皿(mǐn)使(shǐ)用(yòng)前(qián)可(kě)於180 ℃幹烤8 h以上,塑(sù)料製品要(yào)用氯(lǜ)仿(fǎng)衝洗。焦磷酸二(èr)乙(yǐ)酯(zhǐ)(DEPC)是(shì)RNase的強烈抑製劑(jì),RNA提(tí)取過(guò)程(chéng)和逆(nì)轉(zhuǎn)錄過(guò)程中(zhōng)所(suǒ)用(yòng)的水(shuǐ)用DEPC處理;
2.實驗人(rén)員的(dí)手為(wéi)RNase的重(zhòng)要(yào)汙染源(yuán),進(jìn)行(háng)RNA實(shí)驗(yàn)時應始終(zhōng)戴(dài)手(shǒu)套,並(bìng)應(yīng)勤換手套(tào);
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