Trizol法是(shì)目(mù)前(qián)普(pǔ)遍使(shǐ)用的(dí)RNA提(tí)取(qǔ)方法(fǎ)，那麼(mó)Trizol法提取(qǔ)RNA有(yǒu)哪些注意事(shì)項和常(cháng)見問(wèn)題(tí)呢？讓(ràng)我們(mén)一(yī)起來(lái)看(kàn)看吧！

一(yī)，Trizol法提取RNA的注意事項(xiàng)

在(zài)使用TRIZOL的時候要帶手套和(hé)眼(yǎn)罩(zhào)，避(bì)免接(jiē)觸(chù)到皮(pí)膚和(hé)衣服，使用化(huà)學通風(fēng)櫥，防止(zhǐ)蒸汽(qì)吸入。

從少量(liáng)樣品（1-10mg組織(zhī)或102-104細(xì)胞(bāo)）中(zhōng)提(tí)取(qǔ)RNA時(shí)可(kě)加入少(shǎo)許糖原以促(cù)進RNA沉澱。例(lì)如加800ml TRIzol匀漿(jiāng)樣品，沉澱RNA前(qián)加(jiā)5-10μg RNase-free糖原(yuán)。糖(táng)原會與(yǔ)RNA一同(tóng)沉(chén)澱(diàn)出(chū)來(lái)，糖(táng)原濃度(dù)不高(gāo)於(yú)4mg/ml是(shì)不(bù)影響(xiǎng)第一(yī)鏈的合成，也不(bù)影響PCR反(fǎn)應。

匀漿(jiāng)後加(jiā)氯仿之(zhī)前(qián)樣(yàng)品可以(yǐ)在-60至-70℃保(bǎo)存至(zhì)少(shǎo)一(yī)個(gè)月。RNA沉澱可(kě)以保存於75%酒精中2-8℃一星期以(yǐ)上(shàng)或(huò)-5至-20℃一年以上。

分(fēn)層和(hé)RNA沉澱(diàn)時也(yě)可使用(yòng)台(tái)式(shì)離心機，2600×g離心30-60分(fēn)鐘(zhōng)。

預期產(chǎn)量：1mg組(zǔ)織(zhī)或1×106細胞(bāo)提(tí)取RNA分別為(wéi)：

肝和脾6-10μg ,腎(shèn)3-4μg ,骨骼肌(jī)和腦組織1-1.5μg ,胎盤(pán)1-4μg ,上(shàng)皮細胞8-15μg ,成(chéng)纖(xiān)維細胞5-7μg。

二，Trizol法提取(qǔ)RNA的(dí)常(cháng)見(jiàn)問題

1. 得率低

（1）樣(yàng)品裂解或匀(yún)漿(jiāng)處理不che底

（2）RNA沉(chén)澱未(wèi)wan全溶解

2. OD260/OD280<1 .65

（1）檢測(cè)吸光度時(shí)，rna樣(yàng)品沒(méi)有溶(róng)於(yú)水(shuǐ)，而(ér)溶(róng)於了(liǎo)TE中(zhōng)

（2）樣品(pǐn)匀漿(jiāng)時加(jiā)的(dí)試(shì)劑量(liáng)太少

（3）匀(yún)漿樣品時(shí)未在室溫放置(zhì)5分鐘

（4）吸取水相時混入(rù)了有機相(xiāng)

（5）RNA沉(chén)澱未(wèi)wan全(quán)溶解。

3. RNA降解

（1）組織(zhī)取(qǔ)出(chū)後沒有馬上(shàng)處理或(huò)冷凍(dòng)

（2）待(dài)提取(qǔ)RNA的樣品沒有保存於-60至(zhì)-70℃,而保存在(zài)了-5至(zhì)-20℃

（3）細胞(bāo)在(zài)用(yòng)胰酶處理時(shí)過(guò)度

（4）溶(róng)液或離心管(guǎn)未經RNase去(qù)除處(chǔ)理

（5）電(diàn)泳(yǒng)時(shí)使(shǐ)用(yòng)的(dí)甲醛(quán)pH值低於了(liǎo)3.5

更(gēng)多有關Trizol法提取RNA的注(zhù)意事項與(yǔ)常(cháng)見(jiàn)問(wèn)題，請聯(lián)係天(tiān)津益元(yuán)利康(kāng)生(shēng)物(wù)科(kē)技有限公(gōng)司(sī)：