在(zài)實際應用(yòng)中
，通(tōng)過不(bù)同的(dí)設計
，具體的方法(fǎ)步驟可(kě)有(yǒu)多(duō)種。即：用於(yú)檢(jiǎn)測抗體(tǐ)的(dí)間接(jiē)法，用(yòng)於(yú)檢測抗(kàng)原的(dí)雙(shuāng)抗體(tǐ)夾(jiā)心法以(yǐ)及用(yòng)於(yú)檢(jiǎn)測小分(fēn)子抗原或半抗原的(dí)抗原競爭法等等。那麼(mó)你(nǐ)知道直接(jiē)法(fǎ)與間接法的(dí)ELISA檢測原(yuán)理是什(shí)麼嗎？讓(ràng)我們(mén)一起(qǐ)來看(kàn)看吧！

一(yī)，直(zhí)接(jiē)法原(yuán)理

直接(jiē)法是利(lì)用包被抗原(yuán)
，檢測抗體或者進(jìn)行重組蛋(dàn)白(bái)的活(huó)性驗(yàn)證(zhèng)
，利用(yòng)蛋白與(yǔ)板材(cái)（即(jí)微(wēi)孔板底）通過疏水鍵，流(liú)水/離(lí)子鍵的(dí)被(bèi)動(dòng)吸附,通(tōng)過引入其(qí)它活性基(jī)團如氨(ān)基和(hé)碳基的(dí)共價結合
，以及通過表麵(miàn)改性(xìng)後(hòu)的(dí)親水鍵結(jié)合等(děng)等
，當(dāng)然(rán)也(yě)有利用親和素預包被(bèi)的板材(cái)
，通過親和(hé)素與生物素的(dí)共價結合(hé)及親(qīn)和素有(yǒu)四個(gè)殘基理論可(kě)結合個生(shēng)物(wù)素的特(tè)性
，使結(jié)合的蛋白更(gēng)多(duō)
，靈敏度(dù)進一(yī)步提(tí)高(gāo)
，目前(qián)隻(zhī)是該方(fāng)法的成本會升高。

直接法相(xiāng)對(duì)來(lái)說靈敏度和特異性較其他方法低
，目前(qián)使用(yòng)較(jiào)少
，通(tōng)常(cháng)用(yòng)於(yú)重(zhòng)組蛋白或重組(zǔ)抗(kàng)體的結(jié)合活性驗(yàn)證(zhèng)。而(ér)使(shǐ)用(yòng)親和(hé)素包被的(dí)板(bǎn)材(cái)主(zhǔ)要原因(yīn)在(zài)於大(dà)分(fēn)子(zǐ)蛋白質較小(xiǎo)分子蛋白質通常含有更(gēng)多的疏水基(jī)團
，故(gù)更易吸附到固相載(zǎi)體(tǐ)表(biǎo)麵(miàn)。蛋白質與聚苯乙烯(xī)固(gù)相載(zǎi)體(tǐ)是(shì)通過(guò)物(wù)理吸附(fù)結合的
，靠(kào)的是(shì)蛋白質(zhì)分(fēn)子(zǐ)結(jié)構上的疏(shū)水(shuǐ)基(jī)團(tuán)與(yǔ)固相載體表(biǎo)麵的疏水基團(tuán)間(jiān)的作用(yòng)
，當然好的(dí)板材(cái)也(yě)是成功(gōng)的(dí)一半
，聚苯乙烯具有較強的吸附(fù)蛋白(bái)質(zhì)的(dí)性(xìng)能。各(gè)方麵表現(xiàn)較(jiào)為(wéi)均衡
，是ELISA 反應(yīng)中常用的(dí)固(gù)相載(zǎi)體。小分子蛋白(bái)由於吸(xī)附性較差
，固使(shǐ)用這(zhè)樣間(jiān)接包被(bèi)的形(xíng)式(shì)才(cái)能起到理想的(dí)固定形式。

二，間接法(fǎ)原理

間接法相對(duì)直(zhí)接法
，靈(líng)敏度(dù)進一步提(tí)升
，利用(yòng)一(yī)抗(kàng)與(yǔ)抗(kàng)原(yuán)的(dí)特(tè)異結(jié)合
，再(zài)加(jiā)入通用二(èr)抗（即檢測(cè)抗體）
，如(rú)一抗使用的(dí)抗(kàng)某蛋白的鼠(shǔ)抗
，二抗(kàng)可使用(yòng)鼠(shǔ)/兔等(děng)抗該類(lèi)型(xíng)抗體（IgG）的(dí)抗體(tǐ)
，利用抗體(tǐ)的(dí)特(tè)異性(xìng)識(shí)別
，加之顯(xiǎn)色(sè)用(yòng)的(dí)二抗非直接與抗(kàng)原(yuán)結合(hé)
，所以(yǐ)稱(chēng)之(zhī)為(wéi)間接檢(jiǎn)測
，該方(fāng)法一(yī)般用(yòng)於抗體(tǐ)的檢(jiǎn)測(cè)
，如(rú)重組抗體(tǐ)
，或(huò)疫苗(miáo)效(xiào)價(jià)的檢(jiǎn)測
，咱們(mén)打疫(yì)苗(miáo)的(dí)目的就是(shì)產生(shēng)中和抗(kàng)體嘛(má)
，該(gāi)方法(fǎ)在IVD企業使(shǐ)用較多。

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