隨(suí)著(zhuó)分(fēn)子(zǐ)生物學(xué)和細(xì)胞生(shēng)物(wù)學研究的(dí)不(bù)斷(duàn)發展，細胞轉染已(yǐ)經(jīng)成為研(yán)究真核細(xì)胞基因(yīn)功能(néng)的常規工具。常用於(yú)研究(jiū)基(jī)因功能(néng)，基因表達(dá)調控(kòng)，突變(biàn)分(fēn)析(xī)和蛋白質生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中(zhōng)，其應用非常廣(guǎng)泛。那(nà)麼(mó)你知道(dào)常(cháng)見(jiàn)的轉染方法的(dí)原(yuán)理(lǐ)，特點(diǎn)及步(bù)驟嗎？讓(ràng)我們(mén)一(yī)起來(lái)看(kàn)看(kàn)吧！

一，脂質體轉(zhuǎn)染法(fǎ)

陽(yáng)離(lí)子(zǐ)脂質(zhì)體表(biǎo)麵(miàn)帶(dài)正電(diàn)荷，能與核酸的磷酸(suān)根(gēn)通過靜電(diàn)作(zuò)用，將(jiāng)DNA分子(zǐ)包裹(guǒ)入內(nèi)，形(xíng)成(chéng)DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物，也(yě)能(néng)被表麵(miàn)帶負(fù)電的細胞膜吸(xī)附(fù)，再通過融(róng)合或細胞內吞(tūn)進入(rù)細(xì)胞。脂質體轉(zhuǎn)染(rǎn)適用於把DNA轉染入(rù)懸(xuán)浮(fú)或(huò)貼壁(bì)培養細(xì)胞中(zhōng)，是目前實驗室zui方(fāng)便(biàn)的轉(zhuǎn)染方(fāng)法之一，其轉染率較高(gāo)，優(yōu)於(yú)磷酸鈣(gài)法。由於脂質(zhì)體(tǐ)對細(xì)胞(bāo)有一(yī)定(dìng)的毒性(xìng)，所(suǒ)以(yǐ)轉染時間(jiān)一(yī)般(bān)不超過(guò)24小時。

特(tè)點(diǎn)：脂質(zhì)體(tǐ)轉染法(fǎ)的(dí)優(yōu)點是能夠高效轉(zhuǎn)染許(xǔ)多細胞係，適(shì)用於高通量篩選，並(bìng)能夠遞送(sòng)任何(hé)大(dà)小的 DNA 以及 RNA 和蛋白(bái)。此外，該(gāi)方法既(jì)可(kě)應(yīng)用於穩定(dìng)表達(dá)，也可(kě)應(yīng)用(yòng)於(yú)瞬時表達(dá)，與其(qí)他(tā)化學方法(fǎ)不(bù)同的是，其可(kě)用(yòng)於將 DNA 和 RNA 向動(dòng)物(wù)和人(rén)體內轉(zhuǎn)移；缺(quē)點是轉(zhuǎn)染(rǎn)效率(shuài)依賴於(yú)細胞(bāo)類型(xíng)和培養條(tiáo)件(jiàn)，因(yīn)此，需要(yào)對每(měi)種細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)染條件和(hé)轉染試劑進(jìn)行(háng)優化。

實(shí)驗步驟(zhòu)：將(jiāng)DNA，RNA，siRNA或寡核苷酸(suān)和轉染(rǎn)試劑(jì)分別在不同(tóng)的管中(zhōng)稀(xī)釋→將兩者混合(hé)形成(chéng)混合(hé)物→將形成的混(hùn)合物(wù)加入細(xì)胞(bāo)中，脂質(zhì)體的(dí)正(zhèng)電(diàn)荷(hé)有(yǒu)助於(yú)幫助復(fù)合物粘附(fù)到(dào)細胞膜上(shàng)→復(fù)合(hé)物經細胞內(nèi)吞作(zuò)用進(jìn)入細胞→檢(jiǎn)測(cè)基(jī)因(yīn)表達或(huò)沉(chén)默情況(kuàng)。

二，電穿孔法

利用(yòng)電脈(mài)衝(chōng)可(kě)逆(nì)地(dì)擊穿(chuān)細胞膜(mó)形成(chéng)瞬(shùn)時的(dí)膜(mó)上(shàng)小孔(kǒng)，同時細(xì)胞膜上(shàng)電(diàn)勢升(shēng)高，驅(qū)使(shǐ)帶(dài)電荷(hé)的(dí)分子(zǐ)（如 DNA）以類似於(yú)電泳的方式(shì)經(jīng)臨時微孔穿過(guò)細胞(bāo)膜(mó)進入(rù)胞內（見(jiàn)下圖）。當遇(yù)到某些(xiē)脂質體轉染(rǎn)效率很(hěn)低(dī)或幾乎無法轉(zhuǎn)入(rù)時建(jiàn)議用電穿孔(kǒng)法轉染。一(yī)般情況下，高電(diàn)場強(qiáng)度會(huì)殺(shā)死50%-70% 的(dí)細胞。為確保(bǎo)轉(zhuǎn)染成(chéng)功(gōng)，針對實驗條件(jiàn)優化(huà)電(diàn)轉(zhuǎn)參數是(shì)極(jí)為重(zhòng)要的(dí)。電場強度，脈衝形狀，脈衝施加(jiā)次數，緩衝液組分(fēn)等(děng)因(yīn)素都會影響轉染效(xiào)率。

特(tè)點：與(yǔ)其(qí)他轉染(rǎn)方法(fǎ)相(xiāng)比，電(diàn)轉染具有(yǒu)諸(zhū)多優勢，其中(zhōng)主要優勢包括：適(shì)用(yòng)於(yú)所(suǒ)有(yǒu)細(xì)胞(bāo)類(lèi)型(xíng)的瞬時和(hé)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；在確(què)定(dìng)最佳電轉(zhuǎn)染(rǎn)條(tiáo)件(jiàn)的情況下(xià)，能(néng)夠在短(duǎn)時間內轉(zhuǎn)染(rǎn)大(dà)量(liáng)細(xì)胞(bāo)。電轉的(dí)主要(yào)缺點在於高電壓脈衝可引起大量細胞死(sǐ)亡(wáng)，僅(jǐn)部(bù)分細胞(bāo)膜可以(yǐ)成(chéng)功修(xiū)復，因此(cǐ)相比化(huà)學(xué)轉染方(fāng)法(fǎ)，電(diàn)轉染需要使用更多(duō)數(shù)量的(dí)細胞(bāo)。

實(shí)驗步驟：利用電轉緩衝液(yè)重(zhòng)懸(xuán)細(xì)胞→對含有核(hé)酸，緩衝(chōng)液，細(xì)胞(bāo)的混(hùn)合(hé)物(wù)給予(yú)合(hé)適(shì)的電(diàn)脈衝→電脈衝(chōng)在細(xì)胞膜上(shàng)形(xíng)成電勢差(chà)，誘(yòu)導產生暫(zàn)時的孔(kǒng)使核酸(suān)進(jìn)入(rù)細(xì)胞→將細胞返回(huí)到生長(cháng)培養(yǎng)基中，使其慢(màn)慢恢復→檢(jiǎn)測基因(yīn)表達或(huò)沉(chén)默情況。

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