你(nǐ)知(zhī)道(dào)競(jìng)爭(zhēng)法ELISA的(dí)原(yuán)理是(shì)什麼嗎？讓(ràng)我(wǒ)們一(yī)起來看(kàn)看吧(bā)！

競(jìng)爭(zhēng)法ELISA（也(yě)稱抑製或(huò)封閉法(fǎ)ELISA）通(tōng)過定(dìng)量某種(zhǒng)樣品分(fēn)析(xī)物(wù)對(duì)預計(jì)信號的(dí)幹擾，來測定(dìng)該分析(xī)物在樣(yàng)品中的含(hán)量(liáng)，可通(tōng)過(guò)以下(xià)方(fāng)式進行：微(wēi)孔板(bǎn)用一(yī)種分析物(wù)或(huò)一種對靶(bǎ)標分(fēn)析物(wù)具有(yǒu)特異性(xìng)的抗體包(bāo)被（即直接(jiē)法(fǎ)和(hé)間接法(fǎ)），再(zài)添加(jiā)一種(zhǒng)有部分(fēn)某(mǒu)種(zhǒng)檢測的靶(bǎ)標分(fēn)析(xī)物，以競爭結合抗體上的(dí)位點。信號與分析(xī)物(wù)含量呈負(fù)相關，因此(cǐ)，如(rú)果(guǒ)靶標(biāo)分析物的(dí)濃(nóng)度較分(fēn)析(xī)物(wù)高，靶(bǎ)標分析(xī)物(wù)競爭性(xìng)結(jié)合(hé)有(yǒu)xian量的標(biāo)記(jì)抗(kàng)體(tǐ)，參(cān)考信號將(jiāng)會較靶(bǎ)標分析物(wù)的濃(nóng)度較(jiào)低的情況(kuàng)增(zēng)強(qiáng)。

競爭法(fǎ)的理論(lùn)基礎(chǔ)是xian量(liáng)抗(kàng)體(tǐ)，隻(zhī)有(yǒu)在(zài)xian量抗體(tǐ)基(jī)礎上，兩(liǎng)種抗(kàng)原才會(huì)形成競爭關係(xì)。該方(fāng)法一般用來(lái)檢測具(jù)有(yǒu)較(jiào)少(shǎo)表(biǎo)位的(dí)小分(fēn)子物(wù)質。

競爭法(fǎ)ELISA是一(yī)種(zhǒng)較少用(yòng)到的ELISA檢測機(jī)製(zhì)，一般用(yòng)於檢(jiǎn)測小分(fēn)子抗(kàng)原，其操作步驟為(wéi)：

1. 將(jiāng)具有(yǒu)專(zhuān)一性之抗(kàng)體固著於塑膠(jiāo)孔盤上，完成後洗(xǐ)去多餘(yú)抗(kàng)體(tǐ)

2. 加入(rù)待測(cè)檢體，使(shǐ)檢(jiǎn)體(tǐ)中(zhōng)的待(dài)測(cè)抗原與塑膠(jiāo)孔(kǒng)盤上(shàng)的(dí)抗體進行專(zhuān)一(yī)性(xìng)鍵結

3. 加(jiā)入帶有酵素(sù)之(zhī)抗原，此抗(kàng)原也(yě)可(kě)與塑膠孔(kǒng)盤(pán)上的抗(kàng)體(tǐ)進(jìn)行專一性(xìng)鍵(jiàn)結(jié)，由於(yú)塑膠孔(kǒng)盤上(shàng)固著(zhuó)的(dí)抗體(tǐ)數(shù)量有(yǒu)限(xiàn)，因(yīn)此當檢(jiǎn)體中(zhōng)抗原的(dí)量(liáng)越(yuè)多，則帶(dài)有酵(jiào)素(sù)之抗原(yuán)可鍵結(jié)的固(gù)著抗(kàng)體就越(yuè)少，亦(yì)即，兩(liǎng)種抗原皆(jiē)競相(xiāng)與塑膠孔(kǒng)盤(pán)上抗(kàng)體(tǐ)鍵(jiàn)結，即所謂(wèi)競爭法之由來。

4. 洗去(qù)檢(jiǎn)體與帶(dài)有酵(jiào)素(sù)之(zhī)抗(kàng)原(yuán)，加入酵素底(dǐ)物(wù)使酵(jiào)素(sù)呈(chéng)色(sè)，當檢體(tǐ)中抗原量越多(duō)，代(dài)表塑膠(jiāo)孔盤內留下之帶(dài)有(yǒu)酵(jiào)素(sù)的(dí)抗原越(yuè)少，顯色也就(jiù)越淺(qiǎn)。

5. 當(dāng)需(xū)要偵(zhēn)測無法獲(huò)得兩(liǎng)種以上(shàng)單(dān)一性抗(kàng)體的抗(kàng)原，或(huò)是(shì)不易得(dé)到足(zú)夠(gòu)的(dí)純化(huà)抗體以固(gù)著於孔盤上時，一(yī)般會(huì)考(kǎo)慮使用(yòng)競爭(zhēng)法ELISA。

當(dāng)需要偵(zhēn)測無法獲(huò)得(dé)兩種以上單一性抗(kàng)體的抗(kàng)原，或(huò)是不易得到足(zú)夠(gòu)的(dí)純(chún)化抗(kàng)體(tǐ)以(yǐ)固(gù)著(zhuó)於孔(kǒng)盤上(shàng)時，一(yī)般(bān)會考慮(lǜ)使(shǐ)用競爭法(fǎ)ELISA。

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