免疫(yì)共沉澱(diàn)（Co-Immunoprecipitation，CoIP）是一種(zhǒng)常(cháng)用的分(fēn)子(zǐ)生物學實(shí)驗技術(shù)，用(yòng)於研(yán)究(jiū)蛋(dàn)白(bái)質間的相互作(zuò)用(yòng)及(jí)其與其他分(fēn)子的結合(hé)。該實驗(yàn)通過(guò)將抗體與(yǔ)特(tè)定蛋白質結(jié)合，然(rán)後利用這種(zhǒng)結合來沉澱目標蛋(dàn)白(bái)質和與(yǔ)其相互(hù)作用的(dí)分子。那麼你(nǐ)知道(dào)免疫(yì)共沉澱(diàn)實驗的原理是什(shí)麼嗎？有何注(zhù)意(yì)事項？讓(ràng)我們一(yī)起來看看吧！

一(yī)，基(jī)本原(yuán)理(lǐ)：

首先在非變性(xìng)條(tiáo)件下使用溫和的(dí)細(xì)胞(bāo)裂解(jiě)液裂解(jiě)細胞，此(cǐ)時存在於(yú)完(wán)整(zhěng)細胞內的(dí)蛋白質(zhì)與(yǔ)蛋白質之間(jiān)的相互作(zuò)用被保留了下來。隨後向(xiàng)細(xì)胞(bāo)裂解液(yè)中(zhōng)加(jiā)入偶聯(lián)某(mǒu)種(zhǒng)抗(kàng)體(tǐ)的(dí)瓊脂糖珠並(bìng)進(jìn)行(háng)孵育(yù)。當蛋白質A 被(bèi)其(qí)抗體特(tè)異識別並結合(hé)後，A 可(kě)以與(yǔ)其抗(kàng)體免疫沉澱，那(nà)麼(mó)在(zài)細胞內(nèi)與(yǔ)A 存在相互作用(yòng)的(dí)蛋白(bái)質(zhì)或者蛋白(bái)復合物(wù)B 也(yě)能沉澱下來(lái)。利用洗(xǐ)脫(tuō)液(yè)洗脫沉澱下來(lái)的(dí)蛋(dàn)白，通(tōng)過(guò)Western blotting 對這(zhè)些(xiē)蛋白進行鑒定和分析。

二(èr)，注意(yì)事項：

1. 細胞裂(liè)解要采用(yòng)溫和的(dí)裂(liè)解(jiě)條件，避免破壞細(xì)胞(bāo)內(nèi)存(cún)在(zài)的蛋(dàn)白間相互作用，裂解，洗滌(dí)時需使用非變性裂(liè)解液，如(rú) NP-40 和(hé) Triton X-100。

2. 由於(yú)不同細胞裂解條(tiáo)件(jiàn)不(bù)一樣，建議通過預(yù)實驗來確(què)定最佳條件。

3. 抗(kàng)體的選擇十(shí)分重要，選(xuǎn)經(jīng)過 IP 驗證(zhèng)的抗(kàng)體(tǐ)，可(kě)以減少假陽(yáng)性概率。

4. 注意抗(kàng)體/緩(huǎn)衝液(yè)的比(bǐ)例，抗體(tǐ)稀釋(shì)過度(dù)不(bù)利於(yú)後(hòu)續抗(kàng)原抗體(tǐ)結合
；而抗體過(guò)多(duō)就(jiù)不能(néng)wan全沉降在固(gù)相基(jī)質上(shàng)，殘存於(yú)上清。

5. 操(cāo)作(zuò)時(shí)，為(wéi)了(liǎo)避(bì)免(miǎn)損(sǔn)傷 beads，使用大口徑(jìng)或截duan槍頭(tóu)進(jìn)行加樣。

免疫(yì)共沉(chén)澱實驗是(shì)一種(zhǒng)重(zhòng)要(yào)的實驗技(jì)術，通(tōng)過(guò)利用抗體(tǐ)與(yǔ)目標蛋蛋(dàn)白質特異性(xìng)結合(hé)的能力，免(miǎn)疫(yì)共沉澱實(shí)驗能夠(gòu)有(yǒu)效(xiào)地(dì)沉(chén)澱目(mù)標蛋白質及(jí)其相互(hù)作用的分子。該實驗在(zài)生物(wù)學研(yán)究(jiū)中具有廣泛的應(yīng)用(yòng)價值(zhí)，可以(yǐ)用於確定蛋白質相(xiāng)互作(zuò)用關(guān)係(xì)，鑒定蛋白質復(fù)合體成員，研究蛋(dàn)白(bái)質修飾以及探(tàn)究疾(jí)病(bìng)機(jī)製(zhì)等(děng)方(fāng)麵(miàn)。

隨(suí)著技(jì)術(shù)的不斷(duàn)發展(zhǎn)，免(miǎn)疫共沉澱(diàn)實(shí)驗也在不斷(duàn)改進和(hé)*。例如，引(yǐn)入可逆(nì)交(jiāo)聯劑可以增強(qiáng)沉(chén)澱蛋(dàn)白(bái)質的(dí)穩定(dìng)性(xìng)
；利(lì)用質譜分析(xī)技(jì)術(shù)可(kě)以對(duì)沉澱(diàn)蛋白質進(jìn)行定量和鑒(jiàn)定(dìng)
；結合其(qí)他(tā)技術如(rú)熒(yíng)光(guāng)共(gòng)振能(néng)量(liáng)轉移（FRET）或共聚焦顯微鏡等(děng)，可以實(shí)現對(duì)蛋白(bái)質(zhì)相互作用的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和定(dìng)位(wèi)。更多(duō)有(yǒu)關(guān)免(miǎn)疫(yì)共沉澱(diàn)實驗的(dí)原理(lǐ)與注(zhù)意事項(xiàng)，請(qǐng)聯係天(tiān)津益(yì)元利(lì)康生物科(kē)技有限公司(sī)。