用於ELISA實(shí)驗(yàn)的樣(yàng)本(běn)有多種(zhǒng)類型(xíng)，包括(kuò)血清(qīng)，血漿，細胞培養上(shàng)清，尿(niào)液(yè)以及組(zǔ)織(zhī)匀漿(jiāng)等(děng)。不同(tóng)樣(yàng)本(běn)類型(xíng)的預處理(lǐ)方(fāng)法存在差(chà)異。合適(shì)的樣本(běn)預處理，是確(què)保ELISA實驗準確性的第(dì)一(yī)步。下麵讓我(wǒ)們一起來看看(kàn)ELISA實(shí)驗(yàn)三(sān)類(lèi)樣本的處理方法吧！
 

　　一(yī)，液(yè)體樣本(běn)
 

　　1. 血(xiě)清(qīng)
 

　　血(xiě)清是(shì)ELISA實(shí)驗常用(yòng)的(dí)樣本(běn)，其(qí)預處(chǔ)理也(yě)十(shí)分簡單(dān)。使(shǐ)用無(wú)熱(rè)原無(wú)內(nèi)毒素(sù)的試管或(huò)離心管(guǎn)采集(jí)血液(yè)樣本，將試管或離(lí)心管在(zài)室內溫(wēn)度(dù)下放置自然凝固(視室溫環境10分鐘到2小(xiǎo)時不等)或(huò)4℃過(guò)夜(yè)，分離出血清，(建議傾斜試(shì)管(guǎn)或離(lí)心(xīn)管(guǎn)以擴大(dà)液麵(miàn)的橫截(jié)麵，使血清能更大程(chéng)度的分離出(chū)來，)，2-8℃條件(jiàn)離心5分鐘(zhōng)左右(5000-6000轉/分鐘(zhōng))，仔細收集上(shàng)清(qīng)，立即進行測定，建議(yì)在(zài)-20℃或-80℃下將收集(jí)的血(xiě)清(qīng)分裝保存(cún)，避免反復(fù)凍融，保(bǎo)存過程中(zhōng)如出現(xiàn)沉澱，應再次離心。
 

　　2. 血(xiě)漿(jiāng)
 

　　應根據(jù)標本(běn)的要求選(xuǎn)擇EDTA，肝素鈉，枸櫞(yuán)酸納或檸檬酸鈉(nà)作為抗凝劑(jì)，使(shǐ)用含(hán)抗凝劑(jì)的(dí)采(cǎi)血(xiě)管或(huò)離心(xīn)管采集(jí)血液樣本(běn)，采(cǎi)集後(hòu)30分(fēn)鐘內，混合(hé)10-20分鐘(zhōng)後，2-8℃條(tiáo)件離心(xīn)5分(fēn)鐘(zhōng)左右(5000-6000轉/分鐘)，仔細(xì)收集上(shàng)清液(yè)(血(xiě)漿(jiāng))，建(jiàn)議(yì)在-20℃或-80℃下將收(shōu)集的(dí)血清分(fēn)裝保(bǎo)存，避免(miǎn)反復凍融。樣(yàng)本(běn)應避免溶血或高血脂(zhī)。保存過程中(zhōng)如(rú)有沉(chén)澱(diàn)形(xíng)成，使(shǐ)用(yòng)前(qián)應該再(zài)次離心。
 

　　二，固(gù)體(tǐ)樣本
 

　　1. 組織(zhī)標本(běn)
 

　　切(qiē)割(gē)標本(běn)後(hòu)，稱(chēng)取(qǔ)1g組(zǔ)織，加(jiā)入9ml的(dí)pH7.2-7.4左右的PBS，用(yòng)手工(gōng)或(huò)匀(yún)漿器將(jiāng)標本匀漿充(chōng)分(fēn)。2-8℃條件離心5分(fēn)鐘左(zuǒ)右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘(zhōng))，仔細收(shōu)集上清。分裝一(yī)份(fèn)待(dài)檢(jiǎn)測，其(qí)餘(yú)冷凍備用，保(bǎo)存(cún)過程中如有沉澱形成，使用前(qián)應(yīng)再(zài)次離(lí)心。對於植(zhí)物(wù)組(zǔ)織，不好匀漿的話，就在(zài)液(yè)氮中充分研(yán)磨。
 

　　2. 細胞內蛋白樣(yàng)本(běn)
 

　　許(xǔ)多待測(cè)蛋白不(bù)是分泌蛋白(bái)，而是存在於(yú)細(xì)胞(bāo)內(nèi)的(dí)蛋(dàn)白(bái)，這(zhè)個時候(hòu)，要(yào)先(xiān)收(shōu)集(jí)細胞(bāo)，洗(xǐ)滌(dí)幹淨(jìng)，再破(pò)碎(suì)細胞，離(lí)心取上(shàng)清。
 

　　三，植物樣本
 

　　1. 標(biāo)本的精采集及(jí)保存
 

　　取0.1g(誤差(chà)±3%以內)新鮮植(zhí)物組(zǔ)織樣(yàng)本(běn)，在液氮(dàn)中充(chōng)分研磨
；加(jiā)入1ml的提(tí)取液(yè)(80%甲醇), 置於-20℃過(guò)夜
；於4℃，8000rpm，離心1小(xiǎo)時，取上(shàng)清。
 

　　上清(qīng)液過(guò)C-18固(gù)相(xiāng)萃取柱。具體(tǐ)步驟(zhòu)是：80%甲醇(1ml)平衡(héng)柱(zhù)→上樣→收(shōu)集樣品→移開樣品後(hòu)用100%甲醇(5ml)洗柱(zhù)→100%(5ml)洗柱(zhù)→100%甲(jiǎ)醇(5ml)洗柱(zhù)→循(xún)環。過柱後(hòu)的(dí)樣本(běn)真空(kōng)幹燥(zào)或氮(dàn)氣吹(chuī)幹(gān)，保存備(bèi)用。
 

　　上樣(yàng)前加(jiā)入(rù)pH7.4 PBS緩(huǎn)衝(chōng)液(1ml定容)。混匀後室(shì)溫放(fàng)置30分(fēn)鐘(zhōng)，然後4℃離心(8000rpm，15分(fēn)鐘(zhōng))，取(qǔ)上清(qīng)並暫時(shí)保(bǎo)存於(yú)4℃待用(yòng)。
 

　　2. 植(zhí)物(wù)標(biāo)本中相關酶或(huò)蛋白(bái)的測(cè)定(dìng)(粗(cū)提取(qǔ))
 

　　新(xīn)鮮植(zhí)物組(zǔ)織請(qǐng)在液氮中充分研(yán)磨(mó)
；加入樣品體積9倍(bèi)的(dí)提取液(yè)(pH 7.4 PBS緩衝(chōng)液(yè))，請(qǐng)於4℃，8000rpm，離(lí)心(xīn)30分(fēn)鐘(zhōng)，取(qǔ)上清並(bìng)暫時(shí)保存於4℃待(dài)用(yòng)。
 

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