細(xì)胞凋亡(wáng)是指(zhǐ)細(xì)胞在(zài)一定的生理(lǐ)或病(bìng)理條件下，遵(zūn)循(xún)自身(shēn)的程(chéng)序，自(zì)己結(jié)束(shù)生命(mìng)，最(zuì)後(hòu)裂解為(wéi)若幹凋(diāo)亡(wáng)小(xiǎo)體，被其他細胞吞噬(shì)的過程(chéng)，也(yě)稱為程序性細胞(bāo)死亡(wáng)。細(xì)胞(bāo)凋亡(wáng)是多細胞(bāo)有機體為調控(kòng)機(jī)體(tǐ)發(fā)育，維護內(nèi)環境(jìng)穩定的方(fāng)式，凋亡(wáng)過程是由基因控(kòng)製(zhì)的(dí)細胞(bāo)主(zhǔ)動死亡(wáng)過程(chéng)。那(nà)麼(mó)你(nǐ)知道常見(jiàn)的細(xì)胞凋亡檢(jiǎn)測方法有(yǒu)什(shí)麼(mó)嗎(má)？讓(ràng)我們(mén)一起(qǐ)來(lái)看(kàn)看(kàn)吧！
 

　　一(yī)，基於(yú)生物學(xué)功能(néng)的方(fāng)法：
 

　　1.Annexin V/PI檢測磷(lín)脂酰絲(sī)氨(ān)酸 (PS)
 

　　在正常(cháng)細胞(bāo)中(zhōng)，磷(lín)脂(zhī)酰絲氨(ān)酸(PS)位於細胞膜(mó)內側(cè)；細(xì)胞(bāo)凋(diāo)亡(wáng)早期，PS會從(cóng)細胞膜胞(bāo)質(zhì)外(wài)翻(fān)到細胞膜外側(cè)。Annexin V (膜(mó)聯(lián)蛋白V)是(shì)一(yī)種(zhǒng)Ca2+ 依賴(lài)性磷脂結合(hé)蛋白(bái)，可(kě)與外(wài)翻的(dí)PS特(tè)異性結合，因此Annexin V 常作為檢測(cè)細胞早期凋(diāo)亡的(dí)靈敏(mǐn)指(zhǐ)標之(zhī)一(yī)。碘(diǎn)化丙啶(Propidium Iodide, PI) 染(rǎn)色(sè)液(yè)是一種不(bù)能穿透細(xì)胞(bāo)膜的(dí)紅色核酸染料，可(kě)對凋亡(wáng)晚期細胞(bāo)及壞(huài)死(sǐ)細(xì)胞染色(sè)。
 

　　Annexin V 經(jīng)熒(yíng)光素標記(jì)後(hòu)作為(wéi)熒光探(tàn)針(zhēn)，如Annexin V-FITC ，與PI聯合(凱基貨號：KGA107)染色(sè)後，正(zhèng)常細胞基(jī)本無(wú)熒(yíng)光(Annexin V-/PI-)，早(zǎo)期凋(diāo)亡細胞(bāo)呈綠色熒(yíng)光(Annexin V+/PI-)，晚期凋亡細胞(bāo)及壞死細(xì)胞(bāo)則呈(chéng)綠色(sè)和紅(hóng)色(sè)熒(yíng)光(Annexin V+/PI+)。借助(zhù)流式(shì)細(xì)胞(bāo)術即(jí)可檢(jiǎn)測細胞(bāo)的凋(diāo)亡(wáng)情(qíng)況。此(cǐ)外，除(chú)了用(yòng)FITC標(biāo)記(jì)Annexin V 之外(wài)，也可以(yǐ)用(yòng)EGFP，PE，APC，mCherry等(děng)作為熒光(guāng)探(tàn)針，也可(kě)以(yǐ)用(yòng)7-AAD來(lái)替(tì)代(dài)PI作為(wéi)核(hé)酸染料(liào)。
 

　　2.JC-1檢(jiǎn)測綫(xiàn)粒(lì)體膜電(diàn)位凋(diāo)亡(wáng)早期(qī)細胞，綫(xiàn)粒(lì)體膜通(tōng)透(tòu)性增(zēng)加，綫粒(lì)體(tǐ)膜(mó)電(diàn)位(ΔΨm)下(xià)降(jiàng)甚至(zhì)消失(shī)。綫(xiàn)粒(lì)體(tǐ)膜電(diàn)位的(dí)下降被(bèi)認為(wéi)是(shì)細胞凋(diāo)亡(wáng)過(guò)程(chéng)中最早發生(shēng)的生(shēng)物學變化(huà)。一旦綫粒體(tǐ)膜電位被破壞(huài)，細(xì)胞凋(diāo)亡將不可(kě)逆(nì)轉(zhuǎn)。
 

　　二，基(jī)於生(shēng)化(huà)標記(jì)的方(fāng)法(fǎ)：
 

　　1.TUNEL法檢(jiǎn)測(cè)DNA片段(duàn)原(yuán)位
 

　　細(xì)胞凋(diāo)亡形(xíng)成的DNA斷裂會(huì)暴露(lòu)DNA鏈(liàn)的3’-OH末(mò)端(duān)，末端脫氧(yǎng)核苷酸(suān)轉(zhuǎn)移(yí)酶(méi)(TdT)可催(cuī)化(huà)斷裂DNA的3′-OH端的(dí)核(hé)酸聚合(hé)反應，加入帶有熒光素，過氧(yǎng)化(huà)物(wù)酶(méi)，鹼性磷酸酶(méi)或生物素標記的(dí)dUTP，顯(xiǎn)色反應(yīng)後可(kě)特異(yì)地進(jìn)行原位(wèi)凋亡(wáng)細胞(bāo)的(dí)檢(jiǎn)測。正(zhèng)常(cháng)或(huò)增(zēng)殖細(xì)胞幾(jī)乎沒有DNA的斷裂，故很(hěn)少(shǎo)被(bèi)染(rǎn)色。TUNEL細(xì)胞(bāo)凋(diāo)亡(wáng)檢測(cè)試(shì)劑(jì)盒(hé)(凱(kǎi)基貨(huò)號：KGA7072)適用(yòng)於(yú)組織(zhī)樣本(běn)(石(shí)蠟包埋，冰(bīng)凍和(hé)超(chāo)薄切片)和細(xì)胞樣本(běn)(細胞塗(tú)片或爬片)的(dí)凋(diāo)亡(wáng)原位(wèi)檢(jiǎn)測。對於經過固定和(hé)洗滌的(dí)細胞(bāo)或組織，隻(zhī)要(yào)經過(guò)一步(bù)染(rǎn)色反(fǎn)應(yīng)，洗滌後就可(kě)以(yǐ)通(tōng)過熒(yíng)光(guāng)顯微鏡或(huò)激光共聚(jù)焦等成像(xiàng)設備檢測到凋(diāo)亡(wáng)細胞(bāo)。
 

　　2.彗星(xīng)電泳(yǒng)檢(jiǎn)測(cè)DNA片段化
 

　　彗星(xīng)電(diàn)泳實(shí)驗(yàn)的(dí)原理(lǐ)：當各(gè)種(zhǒng)內(nèi)源性(xìng)和外源性因素誘(yòu)發(fā)細(xì)胞(bāo)DNA鏈斷裂時(shí)，其超螺(luó)旋(xuán)結構(gòu)受到破(pò)壞(huài)，在(zài)細胞(bāo)裂(liè)解液(yè)作用下(xià)，細(xì)胞(bāo)膜(mó)，核膜(mó)等膜結構受到破壞(huài)，細(xì)胞內的(dí)蛋白(bái)質，RNA以及其他成分均擴散到(dào)電(diàn)解液中，而(ér)核DNA由於分子量(liáng)太(tài)大(dà)不(bù)能(néng)進(jìn)入(rù)凝(níng)膠而(ér)留(liú)在(zài)原(yuán)位。詳(xiáng)細操作和(hé)數據(jù)分(fēn)析(xī)可參考幹貨|彗(huì)星電(diàn)泳法檢測(cè)DNA損(sǔn)傷-從實(shí)驗到數據(jù)分析。
 

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