該感受態細胞(bāo)用於以(yǐ) T7 RNA 聚合酶(méi)為表(biǎo)達(dá)係統(tǒng)的高效外(wài)源基因(yīn)的蛋(dàn)白(bái)表達(dá)宿(sù)主
。T7 噬(shì)菌體(tǐ) RNA 聚合酶(méi)基因(yīn)的表達受控於λ噬(shì)菌體(tǐ)DE3區(qū)的(dí)lacUV5啟(qǐ)動(dòng)子
，該(gāi)區(qū)整(zhěng)合於 BL21 的染(rǎn)色(sè)體上
。該菌適(shì)合(hé)於非毒(dú)性蛋白(bái)的(dí)表達(dá)
。轉化(huà)效(xiào)率可達 107 cfu/µg
。

本公(gōng)司生產的(dí)BL21(DE3)感(gǎn)受態細胞是(shì)采(cǎi)用大腸(cháng)杆菌BL21(DE3)菌株經(jīng)特(tè)殊工(gōng)藝處理(lǐ)得到的(dí)感(gǎn)受態(tài)細(xì)胞
，可用(yòng)於DNA的化學(xué)轉化
。使(shǐ)用(yòng)pUC19質(zhì)粒(lì)檢(jiǎn)測
，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10’cfu/ug
，-90~-65℃保存(cún)幾(jī)個月(yuè)轉化效率(shuài)不(bù)發生(shēng)改變(biàn)
。

操(cāo)作方法
：

1.取感(gǎn)受(shòu)態細(xì)胞(bāo)置於(yú)冰浴中
，如需分(fēn)裝(zhuāng)可將(jiāng)剛融化細(xì)胞懸液分(fēn)裝到(dào)無(wú)菌預冷的(dí)離心(xīn)管(guǎn)中(zhōng)
，置於冰(bīng)浴中(zhōng)
。

注意(yì):一(yī)次轉化感(gǎn)受態細胞(bāo)的建(jiàn)議用量為50-100
，可以(yǐ)根據(jù)實際情況分裝使(shǐ)用
。應(yīng)注(zhù)意(yì)所用(yòng)DNA體積不(bù)要(yào)超過感受態細胞(bāo)懸液體(tǐ)積的十(shí)分(fēn)之(zhī)一(yī)
。

2.向(xiàng)感受(shòu)態細(xì)胞懸液中(zhōng)加入目的DNA(100μl的感(gǎn)受態細胞(bāo)能夠被1 ng超(chāo)螺旋質粒DNA所(suǒ)飽和)
，輕(qīng)彈(dàn)混(hùn)匀
，在冰浴中靜置30 min
。

3.將(jiāng)離心管置(zhì)於(yú)42℃水(shuǐ)浴中放置60-90 sec
，然(rán)後快速將(jiāng)管(guǎn)轉移到冰(bīng)浴(yù)中
，使細胞冷(lěng)卻2-3 min
，該過(guò)程(chéng)不要(yào)搖(yáo)動(dòng)離(lí)心(xīn)管
。

注意:此(cǐ)步(bù)驟也(yě)可(kě)將離心管(guǎn)置於室(shì)溫進(jìn)行(háng)
，時(shí)間(jiān)不需(xū)十分(fēn)準(zhǔn)確(què)
，夏(xià)季(jì)或室(shì)溫較高(gāo)時(shí)
，可放(fàng)置5-8 min左右(yòu):如果室(shì)溫較(jiào)低
，可延(yán)長時(shí)間(jiān)至(zhì)8-15 min左(zuǒ)右
。條(tiáo)件允(yǔn)許(xǔ)建(jiàn)議使用42℃℃熱(rè)激(jī)方法
。

4.向每個離心管中加入(rù)900μl無菌的(dí)SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生(shēng)素(sù))
，混(hùn)匀(yún)後(hòu)置(zhì)於37℃搖(yáo)床(chuáng)振(zhèn)蕩培養(yǎng)45 min(150 rpm)
，目的(dí)是使(shǐ)質粒上(shàng)相關的抗(kàng)性(xìng)標(biāo)記基因表達(dá)
，使菌體(tǐ)復蘇
。

5.將離(lí)心(xīn)管(guǎn)內(nèi)容物混(hùn)匀(yún)
，吸取(qǔ)100 μl已轉化的感(gǎn)受(shòu)態細胞(bāo)加到含(hán)相(xiāng)應抗生素的(dí)SOB或(huò)LB固體瓊脂(zhī)培養基(jī)上
，用無(wú)菌的彎(wān)頭(tóu)玻棒輕輕(qīng)的將細胞(bāo)均匀塗開
。將平板置於室(shì)溫直至液體(tǐ)被(bèi)吸收
，倒(dǎo)置(zhì)平(píng)板(bǎn)
，37C培養12-16 h
。

注(zhù)意(yì):塗布用(yòng)量(liáng)可根據具(jù)體實驗(yàn)來調(tiáo)整
。如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多(duō)
，可(kě)取更少(shǎo)量轉化產(chǎn)物塗布(bù)平板;反(fǎn)之
，如轉化的DNA總量(liáng)較少
，可(kě)取(qǔ)200-300μI轉(zhuǎn)化(huà)產物塗(tú)布平(píng)板
。如(rú)果(guǒ)預(yù)計的克隆較少(shǎo)
，可(kě)通(tōng)過(guò)離心(4000 rpm,2 min)後吸除部(bù)分培(péi)養(yǎng)液(yè)
，懸浮(fú)菌體(tǐ)後將其(qí)塗布(bù)於(yú)一個(gè)平板(bǎn)中
。(塗布剩餘(yú)的(dí)菌液可置於(yú)4°C保存(cún)
，如果(guǒ)次日的(dí)轉(zhuǎn)化(huà)菌落(là)數過少可(kě)以(yǐ)將剩下的菌液再(zài)塗布新的(dí)培養(yǎng)板)

注(zhù)意(yì)事項
：

1.感受(shòu)態細胞(bāo)應(yīng)保(bǎo)存在-90~-65℃
，不(bù)可(kě)凍融和放(fàng)置時間過(guò)長
，以(yǐ)避(bì)免降(jiàng)低感(gǎn)受態(tài)細(xì)胞(bāo)的轉化(huà)效率(shuài)
。

2.進行轉化操作時
，應(yīng)根據相應(yīng)溫度(dù)及無菌條件的(dí)要(yào)求(qiú)進(jìn)行(háng)
。

3.為防止轉(zhuǎn)化實驗不成(chéng)功(gōng)
，可(kě)以保(bǎo)留(liú)部(bù)分連(lián)接反應(yīng)液(yè)
，以重(zhòng)新轉(zhuǎn)化(huà)
，將損(sǔn)失(shī)降(jiàng)到(dào)zui低(dī)
。

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