酶聯免疫吸附(fù)測(cè)定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA)是(shì)免(miǎn)疫(yì)學(xué)和分(fēn)子生物學中(zhōng)廣泛(fàn)使用(yòng)的實驗(yàn)室技術(shù)，由Eva Engvall和(hé) Peter Perlmann 於1971年(nián)描述。該測定(dìng)依(yī)賴於抗(kàng)原(yuán)-抗體(tǐ)相互作(zuò)用的原理，並(bìng)利(lì)用酶和比(bǐ)色檢(jiǎn)測來(lái)量(liáng)化(huà)目(mù)標分(fēn)子(zǐ)，主(zhǔ)要用(yòng)於檢(jiǎn)測和(hé)量(liáng)化生(shēng)物樣品中特定蛋白質(zhì)，肽，抗體(tǐ)或抗(kàng)原(yuán)的(dí)存(cún)在。ELISA測定(dìng)通(tōng)常應(yīng)用於各(gè)個(gè)領域(yù)，包括臨床診(zhěn)斷，藥(yào)物(wù)研究(jiū)和生命科學(xué)基(jī)礎(chǔ)研究。那麼你(nǐ)知道(dào)ELISA實驗常見問題(tí)及解決方法嗎(má)？讓我們(mén)一起來(lái)看看吧(bā)！
 

　　一(yī)，高(gāo)背景(jǐng)
 

　　原因(yīn)：洗(xǐ)板(bǎn)不充分(fēn)，Streptavidin-HRP 加樣(yàng)量過高，孵育時間(jiān)是否過(guò)長，樣(yàng)本的交(jiāo)叉(chā)汙(wū)染
 

　　解決(jué)方法(fǎ)：檢查洗板(bǎn)是(shì)否按要求進(jìn)行(háng)；洗(xǐ)板(bǎn)不(bù)充分；濃縮洗滌液有結晶就使用(yòng)，導致洗(xǐ)滌不(bù)充(chōng)分；檢查SA-HRP是否(fǒu)按(àn)要求的(dí)濃度(dù)配製；檢查孵育時間是(shì)否按要求進行；注意實驗(yàn)過程中(zhōng)可(kě)能(néng)造成(chéng)樣(yàng)本交叉(chā)孔間(jiān)反應的(dí)操(cāo)作。
 

　　二(èr)，無信號(hào)值
 

　　原(yuán)因：試劑使用順序(xù)錯(cuò)誤(wù)，試劑(jì)配製錯(cuò)誤(wù)，試劑(jì)配製(zhì)濃度錯誤(wù)
 

　　解(jiě)決(jué)方法：檢(jiǎn)查(chá)試劑使用順(shùn)序是否(fǒu)存在(zài)問題，重復測試(shì)；檢(jiǎn)查(chá)是否(fǒu)存在(zài)試劑配(pèi)製錯誤(wù)；檢(jiǎn)查(chá)試(shì)劑是(shì)否(fǒu)因標準(zhǔn)蛋白(bái)，抗體(tǐ)或SA-HRP濃度配製(zhì)過低(dī)造(zào)成(chéng)信(xìn)號(hào)值無。
 

　　三(sān)，過(guò)強的信號值(zhí)
 

　　原(yuán)因：洗(xǐ)板不充分(fēn)，TMB底(dǐ)物變(biàn)質(zhì)，Streptavidin-HRP 加(jiā)樣量過高
 

　　解決(jué)方法：
 

　　洗板(bǎn)不(bù)充(chōng)分(fēn)，造成(chéng)SA-HRP殘(cán)留。檢(jiǎn)查洗(xǐ)板(bǎn)是否按要求(qiú)進(jìn)行(háng)；如(rú)使(shǐ)用洗板(bǎn)機，請充(chōng)分(fēn)衝洗管路(lù)並(bìng)確保每(měi)個孔都被全部衝(chōng)洗(xǐ)；TMB底物是否存(cún)在變(biàn)藍，使(shǐ)用新的(dí)底物(wù)試(shì)劑；避免使(shǐ)用金(jīn)屬物質(zhì)接觸(chù)底物(wù)造(zào)成(chéng)變質失效；檢查SA-HRP是(shì)否(fǒu)按要求(qiú)的(dí)濃度(dù)配(pèi)製；檢查(chá)加樣(yàng)量(liáng)是否(fǒu)按(àn)要(yào)求進行。
 

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