產(chǎn)品(pǐn)名(míng)稱：NEB rCutSmart緩衝(chōng)液(B6004V)現貨供(gōng)應(yīng)

產(chǎn)品貨(huò)號(hào)：B6004V

產品品(pǐn)牌：NEB

產(chǎn)品(pǐn)簡(jiǎn)介：

NEB rCutSmart緩衝(chōng)液(yè)(B6004V)適用於(yú)各類限製性(xìng)內(nèi)切酶，超過 210 種(zhǒng)限製性(xìng)內切酶(méi)都(dū)能在rCutSmart緩衝(chōng)液(yè)中(zhōng)表現出百分(fēn)之bai的活性(xìng)，從(cóng)而極大地簡(jiǎn)化(huà)了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中雙酶(méi)切反應的(dí)準備工作(zuò)。rCutSmart 緩衝液中(zhōng)富(fù)含重組(zǔ)白(bái)蛋(dàn)白，因此可減少試管數量和(hé)移(yí)液(yè)操(cāo)作步(bù)驟(zhòu)。此外(wài)，許多DNA修飾(shì)酶(méi)也(yě)能在(zài)rCutSmart緩衝(chōng)液中保持100% 活(huó)性(xìng)，因此無需(xū)進(jìn)行後續純化。

此(cǐ)外(wài)，New England Biolabs為每種限製性(xìng)內(nèi)切(qiē)酶(méi)提供了(liǎo)一種采用顏(yán)色標(biāo)記的(dí)10X NEBuffer 反(fǎn)應(yīng)緩衝(chōng)液，以確(què)保(bǎo)酶(méi)保(bǎo)持最(zuì)佳（100%）活(huó)性。New England Biolabs的大多(duō)數酶均(jūn)配(pèi)有(yǒu)四種標準(zhǔn)NEBuffer 緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)之一。這些緩(huǎn)衝液(yè)中含有(yǒu)重組白蛋白(bái)。

使(shǐ)用方(fāng)法(fǎ)：

同時(shí)用(yòng)兩(liǎng)種(zhǒng)限(xiàn)製性(xìng)核酸內切酶(méi)消化(huà) DNA 底物(wù)（雙重(zhòng)消化）是一種常(cháng)見的省時(shí)程(chéng)序(xù)。選擇最hao的(dí)NEBuffer以提供優(yōu)化(huà)酶(méi)活性的(dí)反應條件，並(bìng)避免(miǎn)與(yǔ)某些(xiē)酶相關(guān)的(dí)星形活(huó)性是一(yī)個重要(yào)的考(kǎo)慮(lǜ)因素。每種酶(méi)都配有(yǒu)最佳的(dí) NEBuffer，以確保 100% 的活性。NEBuffer 組合物(wù)列在緩衝區(qū)頁麵上。

設(shè)置雙消化

· 可(kě)以(yǐ)在 rCutSmart 緩(huǎn)衝(chōng)液™中設置(zhì)含有 NEB 限(xiàn)製(zhì)性內(nèi)切(qiē)酶(méi)的雙重(zhòng)酶解。否則，請選擇對兩種(zhǒng)酶都具(jù)有最大(dà)活(huó)性的 NEBuffer。如果對(duì)星體(tǐ)活(huó)性(xìng)有顧慮，請考慮(lǜ)使(shǐ)用我(wǒ)們的高保(bǎo)真 （HF®） 酶之一。

· 根據(jù)推(tuī)薦方案(àn)設(shè)置反應。任(rèn)何反應中甘(gān)油(yóu)的最(zuì)終濃度應(yīng)小(xiǎo)於5%，以盡量(liáng)減少星活(huó)性的(dí)可能(néng)性。例(lì)如(rú)，在50μl反(fǎn)應中，加(jiā)入的(dí)酶(méi)的總量不(bù)應(yīng)超過5μl。 NEBcloner也(yě)可(kě)用於(yú)確定推薦(jiàn)的雙(shuāng)消(xiāo)化條件(jiàn)。

· 如(rú)果需要(yào)兩(liǎng)種不同(tóng)的孵育溫度，請選(xuǎn)擇最(zuì)佳反(fǎn)應(yīng)緩衝液並相(xiāng)應(yīng)地設(shè)置反(fǎn)應。加入(rù)第(dì)一(yī)種酶(méi)並在(zài)所(suǒ)需溫度(dù)下孵育。然(rán)後(hòu)，加熱滅(miè)活(huó)第(dì)一種(zhǒng)酶，加(jiā)入第(dì)二種酶並在(zài)推薦溫度(dù)下孵育。

· 根據酶在(zài)非最(zuì)佳NEBuffer中(zhōng)的(dí)活(huó)性等級(jí)，可(kě)以調整(zhěng)單位數或孵育(yù)時(shí)間，以補償(cháng)較慢的裂解(jiě)速(sù)率(shuài)。限製(zhì)性內(nèi)切酶(méi)性能(néng)圖表可指(zhǐ)示星(xīng)形(xíng)活性是否是次(cì)優緩衝液(yè)的問題(tí)。

設置順序消化

· 如果(guǒ)沒(méi)有(yǒu)兩(liǎng)種酶表現(xiàn)出(chū)>50%活性的緩衝液，則可以(yǐ)進行順序(xù)消化。

· 使(shǐ)用(yòng)推薦(jiàn)緩衝液中鹽(yán)濃度(dù)zui低(dī)的限(xiàn)製性核酸內(nèi)切(qiē)酶設置反(fǎn)應並孵(fū)育(yù)完(wán)成。

· 調整反(fǎn)應(yīng)的鹽濃度（使用少量濃鹽溶(róng)液(yè)）以近(jìn)似第二限(xiàn)製(zhì)性核酸內(nèi)切(qiē)酶的反(fǎn)應(yīng)條(tiáo)件。

· 加(jiā)入第二(èr)種(zhǒng)酶(méi)並孵(fū)育(yù)以完成第二反應。

· 或者，可以使(shǐ)用(yòng)離心柱(zhù)在第(dì)二次(cì)反(fǎn)應之(zhī)前分離DNA。

產品選購：

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