在所(suǒ)有RNA實驗中，最(zuì)關鍵的因素是分離得(dé)到(dào)全(quán)長的RNA。而(ér)實(shí)驗失(shī)敗(bài)的(dí)主(zhǔ)要(yào)原因(yīn)是(shì)核(hé)糖(táng)核(hé)酸酶(RNA酶)的(dí)汙染(rǎn)。由於(yú)RNA酶廣(guǎng)泛存在而(ér)穩定(dìng)，一般反應不需要(yào)輔助因子(zǐ)。因而(ér)RNA製(zhì)劑中隻(zhī)要(yào)存在少(shǎo)量的(dí)RNA酶就會(huì)引(yǐn)起(qǐ)RNA在製備與分析(xī)過程(chéng)中的(dí)降(jiàng)解，而(ér)所(suǒ)製備的(dí)RNA的(dí)純度(dù)和(hé)完整性又可(kě)直接影(yǐng)響RNA分析的結(jié)果，所以RNA的製(zhì)備(bèi)與分(fēn)析操作難度(dù)極大。那麼你(nǐ)知道防止(zhǐ)RNA酶(méi)汙染的(dí)方法(fǎ)有(yǒu)什麼嗎(má)？讓我們一起(qǐ)來看(kàn)看(kàn)吧
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　　防止RNA酶(méi)汙(wū)染的(dí)措施
 

　　1. 所有的玻璃(lí)器皿均(jūn)應(yīng)在(zài)使用前於180℃的高溫(wēn)下幹烤(kǎo)6hr或(huò)更(gēng)長時間(jiān)。
 

　　2. 塑(sù)料器(qì)皿可(kě)用0.1% DEPC水浸(jìn)泡或用氯仿(fǎng)衝洗(xǐ)(注(zhù)意(yì)：有(yǒu)機玻璃(lí)器具因可(kě)被氯仿腐(fǔ)蝕(shí)，故不能使(shǐ)用)。
 

　　3. 有(yǒu)機(jī)玻(bō)璃的電泳(yǒng)槽(cáo)等，可(kě)先用(yòng)去(qù)汙劑洗滌，雙(shuāng)蒸水(shuǐ)衝(chōng)洗，乙醇(chún)幹(gān)燥，再浸泡在3% H2O2 室溫(wēn)10min，然後用(yòng)0.1% DEPC水衝洗，晾(liàng)幹。
 

　　4. 配製的(dí)溶液(yè)應(yīng)盡可能的(dí)用(yòng)0.1% DEPC，在37℃處理(lǐ)12hr以(yǐ)上。然(rán)後用高壓(yā)滅(miè)菌(jūn)除(chú)去殘(cán)留的DEPC。不(bù)能(néng)高(gāo)壓滅菌(jūn)的(dí)試(shì)劑，應(yīng)當用DEPC處(chǔ)理過的無菌雙(shuāng)蒸水配(pèi)製，然後(hòu)經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾(lǜ)除(chú)菌。
 

　　RNA酶抑製(zhì)劑
 

　　1. 焦(jiāo)磷酸二乙(yǐ)酯(zhǐ)(DEPC)：是一種(zhǒng)強烈但(dàn)不(bù)徹底的(dí)RNA酶抑製劑。它通(tōng)過和RNA酶的(dí)活性基團(tuán)組(zǔ)氨酸的咪唑環結(jié)合(hé)使(shǐ)蛋(dàn)白(bái)質變(biàn)性(xìng)，從(cóng)而抑(yì)製(zhì)酶的活(huó)性。
 

　　2. 異硫(liú)氰酸(suān)胍：目(mù)前被(bèi)認(rèn)為(wéi)是有(yǒu)效的(dí)RNA酶(méi)抑(yì)製(zhì)劑(jì)，它在裂(liè)解(jiě)組(zǔ)織(zhī)的同時也使RNA酶失(shī)活。它(tā)既可破(pò)壞細(xì)胞(bāo)結構(gòu)使(shǐ)核(hé)酸從核蛋(dàn)白中(zhōng)解(jiě)離出(chū)來(lái)，又對(duì)RNA酶有(yǒu)強烈的變(biàn)性(xìng)作用。
 

　　3. 氧(yǎng)釩核糖核(hé)苷(gān)復合(hé)物：由氧化(huà)釩離子和核苷形(xíng)成的復(fù)合(hé)物，它和RNA酶(méi)結合形成(chéng)過(guò)渡(dù)態類(lèi)物質，幾(jī)乎(hū)能完(wán)全抑製RNA酶(méi)的活(huó)性(xìng)。
 

　　4. RNA酶的蛋白抑(yì)製(zhì)劑(jì)(RNasin)：從大鼠肝(gān)或人胎(tāi)盤中(zhōng)提取得來(lái)的(dí)酸(suān)性(xìng)糖(táng)蛋(dàn)白。RNasin是(shì)RNA酶(méi)的(dí)一種非競爭性抑(yì)製(zhì)劑(jì)，可(kě)以和(hé)多種RNA酶結合，使(shǐ)其(qí)失(shī)活。
 

　　5. 其它(tā)：SDS，尿素(sù)，矽藻土(tǔ)等對RNA酶也(yě)有(yǒu)一(yī)定(dìng)抑製(zhì)作用(yòng)。
 

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