方(fāng)法(fǎ)一(yī)：

1. 1. 根據(jù)樣品重(zhòng)量(liáng)（1g 樣品加(jiā)入3.5ml 提(tí)取液，可根據材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取(qǔ)液放在冰上(shàng)。

2. 2. 樣(yàng)品放(fàng)在研缽(bō)中用(yòng)液(yè)氮研(yán)磨，研磨(mó)後(hòu)加入提(tí)取液(yè)中(zhōng)在(zài)冰上靜置（3-4 小時(shí)）。

3. 3. 用(yòng)離心(xīn)機(jī)離心8000rpm40min4℃或(huò)11100rpm20min4℃

4. 4. 提(tí)取(qǔ)上(shàng)清(qīng)夜(yè)，樣(yàng)品製(zhì)備完(wán)成。

5. 5. 蛋(dàn)白質(zhì)提(tí)取(qǔ)液(yè)：300ml

6. 1Mtris-HCl（PH8） 45ml

7. 甘油（Glycerol）75ml

8. 聚乙烯(xī)吡(pǐ)咯(kǎ)烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g

9. 這(zhè)種(zhǒng)方(fāng)法(fǎ)針對(duì)SDS-PAGE，垂直(zhí)板電泳！

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方法(fǎ)二：

1. 用三(sān)氯(lǜ)醋酸—丙酮沉(chén)澱法，這(zhè)種方法(fǎ)針對雙向(xiàng)電泳，雜質少，離(lí)子(zǐ)濃(nóng)度小的(dí)特(tè)點(diǎn)！當(dāng)然(rán)單向(xiàng)電泳(yǒng)也(yě)同樣(yàng)適用(yòng)，隻(zhī)是電(diàn)泳的條(tiáo)帶會(huì)減(jiǎn)少(shǎo)！

2. 1. 在液氮(dàn)中研磨(mó)葉(yè)片(piàn)

3. 2. 加入樣(yàng)品體(tǐ)積(jī)3 倍的(dí)提取液(yè)在-20℃的條件(jiàn)下過夜，然後(hòu)離(lí)心(xīn)（4℃8000rpm以上1 小(xiǎo)時）棄(qì)上清。

4. 3. 加(jiā)入等體積的冰(bīng)浴丙酮(tóng)（含(hán)0.07%的(dí)β-巰基乙醇(chún)），搖(yáo)匀(yún)後離心（4℃8000rpm以上1 小(xiǎo)時(shí)），然後真空(kōng)幹(gān)燥(zào)沉(chén)澱(diàn)，備(bèi)用。

5. 4. 上樣(yàng)前加入裂(liè)解液，室(shì)溫(wēn)放置(zhì)30 分鐘，使(shǐ)蛋(dàn)白充(chōng)分(fēn)溶於(yú)裂解液(yè)中，然後離(lí)心(xīn)（15℃8000rpm 以(yǐ)上(shàng)1 小(xiǎo)時或(huò)更長(cháng)時(shí)間以沒(méi)有沉(chén)澱為標(biāo)準），可臨(lín)時(shí)保(bǎo)存在4℃待用。

6. 5. 用Brandford 法(fǎ)定量蛋白，然後可(kě)分裝放(fàng)入-80℃備用。

7. 提取液：含(hán)10%TCA 和(hé)0.07%的β-巰基(jī)乙(yǐ)醇的丙酮

8. 裂解(jiě)液：2.7g 尿(niào)素(sù)0.2gCHAPS 溶(róng)於3ml 滅菌(jūn)的去(qù)離子(zǐ)水中（終體(tǐ)積為5ml），使(shǐ)用前(qián)再(zài)加(jiā)入1M 的(dí)DTT65ul/ml。

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