一(yī)，前言

細胞(bāo)培(péi)養(yǎng)技(jì)術(shù)在(zài)生命科(kē)學(xué)研(yán)究(jiū)領(lǐng)域是(shì)must的。在(zài)科研上(shàng)，細胞培養基（medium）一(yī)般(bān)都會加入(rù)血清(qīng)（Serum）來補(bǔ)充(chōng)蛋白質（protein），生(shēng)長(cháng)因(yīn)子（growth factor）或(huò)其(qí)他營養物(wù)質(zhì)（nutrients）等(děng)，大部分細(xì)胞(bāo)培養會選(xuǎn)擇使(shǐ)用(yòng)胎牛血(xiě)清（fetal bovine serum, FBS）。近年(nián)來也(yě)陸(lù)續有(yǒu)多(duō)樣的血清(qīng)種類(lèi)，例如：人類血(xiě)小板(bǎn)生長因子(zǐ)（platelet-rich plasma, PRP），小牛血(xiě)清(qīng)（bovine growth serum, BGS）等，中科(kē)百(bǎi)抗自研產(chǎn)品：來(lái)源於(yú)無(wú)菌采集的健(jiàn)康胎牛血清，適(shì)用於(yú)各種(zhǒng)難(nán)培(péi)養(yǎng)腫瘤細胞，難培養(yǎng)原代(dài)細(xì)胞，部分幹細(xì)胞(bāo)（不包括(kuò)難(nán)貼(tiē)壁細胞），驗證的細(xì)胞典型(xíng)代表(biǎo)有(yǒu)：A2780，SK-Hep-1；HUVEC，神經元(yuán)細胞。

二(èr)，無血清培養基介紹

經歷了(liǎo)天然培(péi)養(yǎng)基，合成(chéng)培(péi)養基後，無(wú)血清培養基和(hé)無(wú)血清(qīng)培(péi)養成(chéng)為當今細(xì)胞培(péi)養領域的(dí)一(yī)大(dà)趨勢(shì)。采用無血清培(péi)養可(kě)降低生(shēng)產(chǎn)成本，簡化(huà)分(fēn)離純化(huà)步(bù)驟(zhòu)，避免(miǎn)病毒(dú)汙染(rǎn)造成的危害。無血清培(péi)養(yǎng)基(serum free medium,SFM):是不需要(yào)添加血清就(jiù)可(kě)以維持細胞(bāo)在(zài)體外較長時間(jiān)生長(cháng)繁殖的合(hé)成培養(yǎng)基(jī)。但是它(tā)們(mén)可能(néng)包(bāo)含個別蛋白或大量蛋白組(zǔ)分。雖(suī)然(rán)基(jī)礎(chǔ)培(péi)養基(jī)加少(shǎo)量(liáng)血(xiě)清(qīng)所配製(zhì)的(dí)wanquan培養(yǎng)基(jī)可(kě)以(yǐ)滿足大(dà)部分細胞(bāo)培(péi)養的要(yào)求(qiú)，但(dàn)對(duì)有些(xiē)實驗卻不適合，如觀(guān)察一種生(shēng)長(cháng)因(yīn)子對(duì)某種細胞(bāo)的作(zuò)用(yòng)，這時需(xū)要排除其他生長(cháng)因子的(dí)幹擾作用。而(ér)血(xiě)清中(zhōng)可能含有各種生(shēng)長(cháng)因子；又(yòu)如需要測(cè)定某(mǒu)種細(xì)胞在培養過程中分泌某種(zhǒng)物質（抗體，生長因(yīn)子(zǐ)）的(dí)能(néng)力；或(huò)者要(yào)大(dà)規模(mó)的(dí)培養某種細胞，以獲得(dé)它(tā)們的分泌產物。因此研製出(chū)無(wú)血(xiě)清(qīng)培養基(jī)一直(zhí)是生物科(kē)學(xué)工作(zuò)者(zhě)努力的目標。如(rú)有需要，請聯係(xì)天(tiān)津(jīn)益元(yuán)利康生物科技有(yǒu)限(xiàn)公司(sī)。

三，無血清(qīng)培養(yǎng)基(jī)的基(jī)本(běn)配方(fāng)

基(jī)本成(chéng)分(fēn)為(wéi)基礎培(péi)養基及添加(jiā)組分兩大部(bù)分。

用於生物製藥和疫苗生產的細胞在(zài)體外(wài)培(péi)養(yǎng)時，多(duō)數(shù)呈貼(tiē)壁(bì)生長或兼(jiān)性(xìng)貼壁生(shēng)長；而當其(qí)在(zài)無(wú)血清，無蛋白培(péi)養基中生(shēng)長時，由(yóu)於缺(quē)乏(fá)血清中(zhōng)的(dí)各種粘(nián)附貼壁因子如(rú)纖粘(nián)連蛋白，層粘連(lián)蛋(dàn)白，膠原，玻(bō)表粘連(lián)蛋白，細胞往往以(yǐ)懸浮形式生長。

添加(jiā)組分包括(kuò)以下(xià)幾大類(lèi)物(wù)質：

(1）促貼(tiē)壁物質

許(xǔ)多(duō)細胞必須(xū)貼壁才(cái)能(néng)生(shēng)長，這種(zhǒng)情況(kuàng)下(xià)無血清培養(yǎng)基(jī)中一(yī)定要添(tiān)加促貼(tiē)壁(bì)和擴展(zhǎn)因子，一般為細胞(bāo)外基質(zhì)，如纖(xiān)連蛋(dàn)白(bái)，層粘連蛋白(bái)等。它(tā)們還是重(zhòng)要的(dí)分(fēn)裂(liè)素(sù)以及維(wéi)持正常細(xì)胞(bāo)功能的分(fēn)化因子(zǐ)，對許(xǔ)多(duō)細(xì)胞(bāo)的繁殖(zhí)和(hé)分化(huà)，起(qǐ)著重要作用(yòng)。纖(xiān)連(lián)蛋白主要促進來自(zì)中胚層細(xì)胞的(dí)貼(tiē)壁與(yǔ)分(fēn)化，這(zhè)些細(xì)胞包括成(chéng)纖維(wéi)細(xì)胞(bāo)，肉(ròu)瘤細(xì)胞，粒細胞，腎(shèn)上(shàng)皮細胞，腎(shèn)上(shàng)腺皮(pí)質細(xì)胞，CHO細胞(bāo)，成肌細(xì)胞等。

(2）促生(shēng)長因子及激(jī)素(sù)

針(zhēn)對不同細胞(bāo)添加不(bù)同的生長(cháng)因子。激素(sù)也是刺激細(xì)胞生長(cháng)，維持(chí)細胞(bāo)功(gōng)能(néng)的(dí)重(zhòng)要(yào)物質，有些激素(sù)是許(xǔ)多(duō)細胞bi要的，胰島素。

(3）酶抑(yì)製(zhì)劑

培養(yǎng)貼壁生(shēng)長的細(xì)胞，需要(yào)用(yòng)胰(yí)酶(méi)消化(huà)傳代(dài)，在無(wú)血清(qīng)培養(yǎng)基(jī)中須含酶(méi)抑製(zhì)劑，以終(zhōng)止酶的消化作用，達到保護(hù)細(xì)胞的目的。常用的是大(dà)豆胰酶(méi)；抑製劑。

(4）結合(hé)蛋白(bái)和(hé)轉運(yùn)蛋白(bái)

常見(jiàn)如轉鐵蛋(dàn)白和(hé)牛(niú)血(xiě)清白蛋(dàn)白(bái)。牛血清(qīng)白蛋白的添(tiān)加比較(jiào)大，可增加培養(yǎng)基的粘(nián)度，保護細胞免受(shòu)機械損傷。許(xǔ)多(duō)旋(xuán)轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的(dí)無血清培(péi)養基都(dū)含有牛血(xiě)清白(bái)蛋白。

(5)  微(wēi)量(liáng)元素(sù)

硒(xī)是(shì)最(zuì)常見(jiàn)的。

四，使用(yòng)方法

目前，血(xiě)清仍是動(dòng)物(wù)細胞培(péi)養(yǎng)中最基(jī)本的(dí)的添(tiān)加物，尤其是在(zài)原代培(péi)養(yǎng)或者(zhě)細胞(bāo)生長狀況(kuàng)不良時，常常(cháng)會先使用(yòng)有血(xiě)清的培(péi)養液進(jìn)行(háng)培養(yǎng)，待細胞生(shēng)長旺(wàng)盛以後(hòu)，再(zài)換成無血清培養(yǎng)液。細胞(bāo)轉(zhuǎn)入無(wú)血(xiě)清培(péi)養(yǎng)基培(péi)養(yǎng)要有一(yī)個(gè)適應過(guò)程，一般要(yào)逐步降(jiàng)低血(xiě)清(qīng)濃度(dù)，從10%減少到5%，3%，1%，直(zhí)至(zhì)無血(xiě)清(qīng)培(péi)養(yǎng)。在降低過程(chéng)中要(yào)注(zhù)意觀察(chá)細胞(bāo)形態(tài)是(shì)否發生(shēng)變(biàn)化，是否有部(bù)分細胞死亡，存(cún)活細胞(bāo)是否還(huán)保(bǎo)持(chí)原(yuán)有(yǒu)的功能(néng)和生物學特(tè)性(xìng)等(děng)。在實驗後這些細(xì)胞一般不再繼(jì)續(xù)保留(liú)，很少(shǎo)有細(xì)胞能夠長期培(péi)養於無(wú)血(xiě)清培養(yǎng)基而不(bù)發(fā)生改(gǎi)變的。細胞轉入(rù)無血清培養之前(qián)，要留有種子細(xì)胞(bāo)，種(zhǒng)子細(xì)胞按常規培(péi)養(yǎng)於(yú)含(hán)血(xiě)清的(dí)培養基中(zhōng)，以保證細胞的特性(xìng)不發生(shēng)變化(huà)。