Transwell細(xì)胞(bāo)遷移實驗，也(yě)稱為Transwell遷移(yí)或(huò)侵襲測(cè)定實(shí)驗，是一種(zhǒng)用於(yú)細(xì)胞生(shēng)物學(xué)和分子(zǐ)生物學的實(shí)驗室(shì)技(jì)術，用(yòng)於研(yán)究細(xì)胞通過多孔(kǒng)膜(mó)的運動。前(qián)麵已經(jīng)講過(guò)，那實(shí)驗(yàn)過程中需(xū)要(yào)注(zhù)意(yì)些什麼(mó)呢(ní)？

注意事項(xiàng)一

 基(jī)質(zhì)膠在(zài)室(shì)溫(wēn)下容(róng)易凝固(gù)，鋪(pū)膠過程(chéng)全程需(xū)要(yào)在(zài)冰上(shàng)操作(zuò)。

注(zhù)意事(shì)項二(èr)

 基質(zhì)膠濃度也(yě)是影響細(xì)胞(bāo)遷移(yí)和侵(qīn)襲的因素之一，所(suǒ)以基質膠(jiāo)的濃度和(hé)稀(xī)釋(shì)比(bǐ)例需根據(jù)供應商(shāng)提供的信息和實驗(yàn)具體情(qíng)況(kuàng)調整(zhěng)，必要時可設(shè)置預實驗摸(mō)索最佳濃度和(hé)稀釋(shì)比例(lì)。一般常用(yòng)濃(nóng)度為(wéi)1mg/mL。

注意事(shì)項(xiàng)三(sān)

  鋪膠時(shí)，盡量垂直小室底(dǐ)部在小(xiǎo)室(shì)底部(bù)中間加入(rù)，可避(bì)免(miǎn)氣泡(pào)的(dí)產生。

注意事(shì)項(xiàng)四

  吸出小室內未(wèi)結合的基(jī)質(zhì)膠(jiāo)時需(xū)確保(bǎo)移液(yè)管(guǎn)的(dí)尖(jiān)頭不會(huì)刮傷(shāng)凝膠層(céng)表麵(miàn)。

注(zhù)意事(shì)項五(wǔ)

 不(bù)同細胞的(dí)遷移和侵襲能力(lì)不(bù)同(tóng)，可設置一係列細(xì)胞(bāo)密度梯(tī)度(dù)摸索(suǒ)合(hé)適(shì)的(dí)細胞(bāo)接(jiē)種密(mì)度。

注(zhù)意(yì)事項六

  小(xiǎo)室(shì)的放(fàng)置過程經(jīng)常有氣泡產(chǎn)生(shēng)，一(yī)旦(dàn)產生氣泡，下(xià)層培(péi)養液的趨化作用就(jiù)減(jiǎn)弱甚至消(xiāo)失，因(yīn)此需(xū)特(tè)別(bié)留(liú)心。一旦(dàn)出(chū)現氣泡，需(xū)將(jiāng)小(xiǎo)室提起或(huò)用槍(qiāng)頭去(qù)除，去(qù)除(chú)氣(qì)泡(pào)後(hòu)重新(xīn)放(fàng)置。

注意事項(xiàng)七(qī)

  接種(zhǒng)細胞1-2小時(shí)後，可對培養板進行(háng)檢(jiǎn)查，確保(bǎo)沒(méi)有大氣泡產(chǎn)生(shēng)。但有時(shí)會觀察(chá)到有(yǒu)極小的(dí)汽包產生，但(dàn)並不(bù)影(yǐng)響細胞(bāo)遷(qiān)移(yí)和侵襲，也可輕輕敲擊(jī)孔板去除(chú)。

注意(yì)事項(xiàng)八 

  用PBS清(qīng)洗(xǐ)小室(shì)時(shí)，需(xū)避物理觸碰(pèng)小室底部。可以準備(bèi)幾個(gè)無菌燒杯或(huò)培養皿，倒(dǎo)入適(shì)量PBS，依次(cì)涮洗，可提(tí)高效(xiào)率。

注意(yì)事項九(jiǔ)

  拍(pāi)照前需適當晾幹小(xiǎo)室，水(shuǐ)分(fēn)會影(yǐng)響鏡(jìng)下(xià)視野。

小tips：

實(shí)驗中會用(yòng)到(dào)的PBS推薦

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