一，傳代培養

傳代培養是指需(xū)要將培(péi)養物分割(gē)成小的(dí)部(bù)分，重新接種(zhǒng)到另外的培(péi)養(yǎng)器皿（瓶）內，再進行(háng)培養(yǎng)的(dí)過(guò)程(chéng)。對(duì)單層培(péi)養(yǎng)而(ér)言，80%匯合(hé)或(huò)剛(gāng)匯合(hé)的細胞(bāo)是較(jiào)理想的(dí)傳代階段(duàn)。傳(chuán)代(dài)培養(yǎng)中的細胞(bāo)傳(chuán)代(dài)培養（subculture），當原代(dài)培養成(chéng)功(gōng)以後(hòu)，隨(suí)著(zhuó)培養時間的延長和(hé)細(xì)胞(bāo)不斷(duàn)分裂(liè)，一(yī)則細胞之間(jiān)相互接(jiē)觸而發生接觸(chù)性抑(yì)製(zhì)，生長(cháng)速(sù)度減(jiǎn)慢甚至停(tíng)止；另一(yī)方麵也(yě)會(huì)因營養(yǎng)物(wù)不(bù)足和(hé)代謝(xiè)物(wù)積累而不(bù)利(lì)於生(shēng)長(cháng)或(huò)發生中毒。

二，RAW264.7細胞傳(chuán)代(dài)步(bù)驟

在進(jìn)行(háng)RAW264.7細胞(bāo)傳(chuán)代時(shí)，首(shǒu)先需要(yào)將舊培養基棄去，並使用(yòng)PBS洗(xǐ)滌(dí)細胞1-2次，確保細胞(bāo)表麵(miàn)幹淨。然(rán)後向(xiàng)培(péi)養瓶中(zhōng)加(jiā)入(rù)2 mL PBS，使其浸潤所有細胞(bāo)，輕輕吹打(dǎ)細(xì)胞以將其(qí)吹下(xià)，將細(xì)胞懸液(yè)收(shōu)集至(zhì)無(wú)菌(jūn)離(lí)心(xīn)管(guǎn)中(zhōng)。使用1000 rpm的(dí)離(lí)心速度(dù)離心5分鐘(zhōng)，棄去上清液，再加(jiā)入1-2 mL培養(yǎng)基(jī)並(bìng)充(chōng)分重懸(xuán)細胞(bāo)。

接(jiē)下(xià)來，將(jiāng)懸液(yè)按(àn)1:2的比(bǐ)例進行(háng)傳代至新(xīn)的(dí)培(péi)養(yǎng)皿(mǐn)或(huò)培(péi)養(yǎng)瓶中(zhōng)，並將其(qí)置(zhì)於(yú)培養箱中進(jìn)行培(péi)養。通(tōng)過這些步驟，可以有(yǒu)效地(dì)進行(háng)RAW264.7細胞的(dí)傳(chuán)代操作(zuò)，促進(jìn)細(xì)胞(bāo)的增(zēng)殖(zhí)和持(chí)續生長，以(yǐ)維持細胞係(xì)的活力和穩定性(xìng)。傳代是細(xì)胞培(péi)養中的(dí)重要步驟，有(yǒu)助(zhù)於(yú)確保(bǎo)RAW264.7細(xì)胞在(zài)研究(jiū)中的連續(xù)性(xìng)和(hé)穩定性(xìng)。

三，RAW264.7細胞凍存具體(tǐ)步(bù)驟(zhòu)

1. 首(shǒu)先(xiān)需要(yào)收集(jí)細(xì)胞並將其(qí)轉移(yí)至無菌離(lí)心管中(zhōng)。使(shǐ)用1000 rpm的(dí)離(lí)心速度離心5分鐘，將(jiāng)上清液棄去。

2. 隨(suí)後，向細(xì)胞中(zhōng)添(tiān)加1 ml細(xì)胞凍存液（包含20% FBS的培(péi)養(yǎng)基(jī)和10% DMSO），輕輕吹打混匀，將(jiāng)1 ml細胞(bāo)懸(xuán)液吸(xī)取(qǔ)至凍存(cún)管中，並做好(hǎo)詳(xiáng)細(xì)的標記。

3. 將凍存管(guǎn)置於(yú)梯(tī)度降(jiàng)溫(wēn)凍存(cún)盒(hé)中(zhōng)，並將其放入-80℃冰箱(xiāng)中過(guò)夜，確保冷凍過程(chéng)緩慢(màn)進(jìn)行(háng)。

4. 隨(suí)後，將已(yǐ)凍存的(dí)細(xì)胞(bāo)轉移(yí)至液氮(dàn)罐中(zhōng)進行(háng)長(cháng)期儲存，以確保細胞(bāo)的(dí)保存和使用。通(tōng)過這些步驟，可以有效地(dì)進行RAW264.7巨噬細(xì)胞的(dí)凍(dòng)存(cún)，以供日後實(shí)驗或應急(jí)需求(qiú)使(shǐ)用。

四(sì)，推(tuī)薦使用產品

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實(shí)驗(yàn)中會用到的(dí)PBS推薦：