原理：葡(pú)萄球菌(jūn)腸毒素屬於超(chāo)抗原，能夠非特異性(xìng)激(jī)活T細胞(bāo)增殖並(bìng)釋(shì)放過(guò)量(liáng)細(xì)胞(bāo)因子，可用(yòng)於抗腫瘤治療。T細(xì)胞(bāo)活化通過(guò)暴露於(yú)特(tè)定抗(kàng)原（例如葡萄(táo)球菌腸(cháng)毒素(sù) B (SEB)）來(lái)測(cè)定(dìng)。SEB是一(yī)種細菌(jūn)毒(dú)素，能夠(gòu)與抗(kàng)原呈遞(dì)細(xì)胞 (APC) 和 TCR上(shàng)的MHCII類分子結合，誘導促(cù)炎細胞因子(zǐ)的釋(shì)放(fàng)，例(lì)如IL-2
，IL-6
，TNF-α和IFN-γ。

應用(yòng)舉例(lì)：誘導活(huó)化T細胞(bāo)

一(yī)
，將(jiāng) PBMCs（120 K/孔(kǒng)）與 Nuclight 綠(lǜ)色試劑標(biāo)記的 Ramos 細(xì)胞（40 /孔）進(jìn)行共(gòng)培養(yǎng)。使(shǐ)用 CD3/CD28 Dynabead
，CD3×CD19 BiTE 抗體或葡萄球(qiú)菌腸毒(dú)素 B (SEB) 誘導活(huó)化(huà)。在 60 h 時，使用 T 細(xì)胞活化(huà)分(fēn)析試劑盒
，T 細(xì)胞介導(dǎo)的(dí)細胞殺傷(shāng)分(fēn)析試劑盒(hé)和 T 細胞耗(hào)竭分析試劑(jì)盒聯合(hé) iQue® 3 係(xì)統分析 10 µL 樣本。

每種(zhǒng)活(huó)化(huà)因(yīn)子(zǐ)會導(dǎo)致(zhì)不同的(dí) CD3+ T 細胞蛋白(bái)表達和(hé)殺傷特征：

1.CD3/CD28 Dynabead 誘導的(dí) T 細胞(bāo)活化(huà)呈現(xiàn)濃度依賴的特性。最高的(dí)微球數(shù)量對應於最大的(dí)活(huó)化標誌物表達(dá)百分(fēn)比。該結果與高(gāo)水平(píng)的細胞耗竭(jié)標誌(zhì)物呈(chéng)現相關性。

2.與 Dynabead 和 SEB 相(xiāng)比，CD3×CD19 BiTE 抗體(tǐ)介(jiè)導的靶細胞死亡增(zēng)量(liáng)最(zuì)多(duō)，活(huó)化(huà)和耗竭水平顯著(zhù)降低。這(zhè)說明(míng) BiTE 介導(dǎo)的(dí)免疫(yì)細(xì)胞殺傷時間(jiān)可能(néng)持續(xù)的較長。

3.SEB 刺(cì)激(jī)，即使在zui低濃度(dù)下，也(yě)可(kě)使(shǐ) T 細胞活化並(bìng)產(chǎn)生(shēng)最大殺傷(shāng)率，導(dǎo)致(zhì)高水平的(dí) T 細胞(bāo)耗(hào)竭。

原(yuán)理：葡萄球(qiú)菌(jūn)腸毒(dú)素屬於超抗(kàng)原，能(néng)夠非特異性(xìng)激活(huó)T細(xì)胞(bāo)增殖並釋放(fàng)過(guò)量(liáng)細胞因(yīn)子(zǐ)，可(kě)用(yòng)於抗腫(zhǒng)瘤治療(liáo)。T細(xì)胞(bāo)活化通(tōng)過(guò)暴(bào)露(lòu)於特(tè)定抗(kàng)原(yuán)（例如(rú)葡萄球菌腸(cháng)毒素 B (SEB)）來測定(dìng)。SEB是一種(zhǒng)細(xì)菌(jūn)毒素(sù)，能夠(gòu)與(yǔ)抗(kàng)原呈(chéng)遞細胞(bāo) (APC) 和 TCR上的(dí)MHCII類分子(zǐ)結(jié)合，誘(yòu)導促炎細胞(bāo)因(yīn)子的(dí)釋放，例(lì)如IL-2
，IL-6
，TNF-α和IFN-γ。

二(èr)
，使(shǐ)用來自(zì) T 細(xì)胞活化(huà)分(fēn)析試劑(jì)盒
，T 細胞介(jiè)導(dǎo)的細胞殺傷(shāng)分析試(shì)劑(jì)盒和 T 細(xì)胞(bāo)耗竭分析(xī)試劑盒的 Qbeads 測(cè)定 Nuclight 綠色(sè)標(biāo)記的 Ramos 和 PBMC（3:1 比例）共培養時細胞(bāo)因子的(dí)釋放(fàng)數據。在(zài)多個試劑(jì)盒中(zhōng)均檢(jiǎn)測了 IFNɣ 和 TNFa 的濃度(dù)，以(yǐ)便(biàn)將(jiāng)所有(yǒu)試劑盒的測(cè)定(dìng)結果取(qǔ)平(píng)均(jūn)值(zhí)。

各個活化因子(zǐ)對細胞(bāo)因子分泌(mì)和(hé)對(duì)表麵蛋(dàn)白(bái)表(biǎo)達的(dí)影(yǐng)響相(xiāng)當：

1.在使用的微(wēi)球(qiú)數量範圍內(nèi)，CD3/CD28 Dynabead 誘(yòu)導(dǎo)的(dí)細胞因子釋放(fàng)呈濃度(dù)依(yī)賴(lài)性增(zēng)加。

2.與微(wēi)球(qiú)或(huò) SEB 相比(bǐ)，CD3×CD19 BiTE 刺(cì)激(jī)後的細胞因子(zǐ)釋放(fàng)始(shǐ)終較低（最高刺激濃度(dù)下(xià)的顆(kē)粒(lì)酶(méi) B 濃(nóng)度(dù)除(chú)外）。該(gāi)結果表(biǎo)明(míng)，在(zài)降(jiàng)低(dī)毒性風險的(dí)情(qíng)況下（例如(rú)細胞(bāo)因(yīn)子釋放綜合征），可(kě)以(yǐ)實(shí)現高水(shuǐ)平(píng)的(dí)細(xì)胞殺傷(shāng)。

3.SEB 可(kě)誘(yòu)導高(gāo)水平的(dí)細胞(bāo)因(yīn)子(zǐ)釋放（即使(shǐ)在低(dī)濃度下）。

三(sān)
，將(jiāng) PBMCs（25 K/孔(kǒng)）與貼壁 AU565 細胞（5 K/孔）進(jìn)行共培養。使用 SEB 誘導(dǎo) T 細(xì)胞活(huó)化。在 60 h 時，使用 T 細(xì)胞活(huó)化分析(xī)試(shì)劑(jì)盒
，T 細(xì)胞介導的細胞(bāo)殺(shā)傷和 T 細胞耗竭(jié)分(fēn)析試劑盒聯合 iQue® 3 係(xì)統(tǒng)提取靶(bǎ)細胞和(hé)效(xiào)應細胞，進行終點分(fēn)析。

SEB 活化誘導(dǎo)靶(bǎ)細胞殺(shā)傷(shāng)呈濃度依賴(lài)性增加，伴隨 CD3+ T 細胞上活化(huà)（CD69
，CD25 和 HLA-DR）和(hé)耗竭（PD-1
，LAG-3 和(hé) TIM-3）標誌物(wù)的高表達（在(zài)所有(yǒu)使用(yòng)的(dí) SEB 濃度中均是(shì)如此）。

其(qí)他應用(yòng)：抗體製備
，毒素檢(jiǎn)驗
，多(duō)種免疫(yì)和(hé)偶聯(lián)試驗
，藥(yào)物研(yán)發(fā)等。

——天津益(yì)元(yuán)利康(kāng)生(shēng)物科技有限公司，成(chéng)立(lì)於2018年(nián)，坐落於(yú)天(tiān)津經(jīng)濟技(jì)術開發區。公司(sī)產品(pǐn)綫(xiàn)涉(shè)及(jí)細(xì)胞與(yǔ)基(jī)因治療(liáo)
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