前言(yán)：WB實(shí)驗中(zhōng)的轉(zhuǎn)膜，顧(gù)名思義(yì)，是將電泳(yǒng)後分(fēn)離的蛋白質從凝(níng)膠(jiāo)中(zhōng)轉移到(dào)固相(xiāng)載體(tǐ)上，同時(shí)維(wéi)持(chí)其相(xiāng)對位置(zhì)和分辨率的(dí)過(guò)程。需(xū)要(yào)根據(jù)雜方案和被(bèi)轉(zhuǎn)移(yí)蛋白(bái)的特性(xìng).以(yǐ)及(jí)蛋(dàn)白(bái)分子(zǐ)量大小等條(tiáo)件去選(xuǎn)擇合適材(cái)質，孔徑的(dí)雜交膜。

一，膜(mó)材質的(dí)選擇(zé)

Western Blot實驗(yàn)中zui常用的轉(zhuǎn)印膜(mó)有兩種(zhǒng)：PVDF膜（聚偏二(èr)氟乙烯膜(mó)）和NC膜(mó)（硝酸(suān)纖(xiān)維素膜(mó)）。

1. NC膜(mó)

NC膜(mó)背景(jǐng)很低，可結合(hé)蛋(dàn)白(bái)質和核酸進(jìn)行各(gè)種印跡應(yīng)用(yòng)。可適用(yòng)於蛋白(bái)質(zhì)印(yìn)跡法(fǎ)，RNA印(yìn)跡法(fǎ)，DNA印跡法(fǎ)和斑點雜交技術。但(dàn)缺點是(shì)對於(yú)分(fēn)子量較(jiào)小的蛋(dàn)白(bái)質會(huì)在洗(xǐ)滌時丟失，且(qiě)NC膜(mó)韌性較差(chà)，操(cāo)作時容易碎，對(duì)操作的(dí)技巧(qiǎo)要(yào)求較高；

2. PVDF膜

PVDF膜在(zài)機(jī)械強(qiáng)度和(hé)化(huà)學相容(róng)性上(shàng)都具有更(gēng)good的(dí)性能(néng)，且靈(líng)敏(mǐn)度(dù)高，分辨率和蛋白親(qīn)和力較其他(tā)的膜(mó)要高，非常(cháng)適合(hé)分子量(liáng)較小的蛋白(bái)質檢(jiǎn)測，通(tōng)常需要甲醇/乙(yǐ)醇(chún)預先活(huó)化(huà)。現(xiàn)在有新出的免甲(jiǎ)醇潤濕的PVDF膜，可以(yǐ)免去(qù)甲醇對實驗操作人(rén)員(yuán)的(dí)傷害。

3.根據膜(mó)材質的特(tè)性選(xuǎn)擇轉印(yìn)膜(mó)，涉及(jí)以下幾(jī)方麵(miàn)的考慮(lǜ)：

蛋(dàn)白結(jié)合(hé)能(néng)力(lì)

是否需要用醇預濕

開展多次剝(bāo)離（stripping）和(hé)再(zài)次檢測（reprobing）實驗的能(néng)力

蛋(dàn)白(bái)觀(guān)察

長期印跡保存

信噪比(bǐ)

可以(yǐ)看出常(cháng)規(guī)PVDF膜(mó)相(xiāng)對NC膜(mó)優(yōu)點(diǎn)更多(duō)，實(shí)用(yòng)性(xìng)廣。

PVDF膜可提(tí)供更(gēng)好的(dí)蛋(dàn)白截留(liú)率，物理強度和廣泛的化學兼(jiān)容性。其中(zhōng)更高(gāo)的機械強(qiáng)度(dù)和出(chū)色(sè)的耐化學(xué)性使PVDF膜成為免疫檢測(cè)中各種(zhǒng)染色應用和多(duō)次(cì)檢測的(dí)理想選(xuǎn)擇。使用PVDF膜(mó)的另一個優點是，從(cóng)單塊凝膠上(shàng)轉移的(dí)平行(háng)重復泳道(dào)可(kě)用於(yú)後續各種(zhǒng)應用，如(rú)考馬(mǎ)斯亮(liàng)藍染色(sè)，接(jiē)著切割(gē)條帶進(jìn)行N端(duān)測(cè)序，蛋(dàn)白(bái)水(shuǐ)解/肽(tài)段分離/內部(bù)測(cè)序，以及(jí)免疫檢(jiǎn)測。

二(èr)，選(xuǎn)擇膜(mó)孔(kǒng)徑

選到合適(shì)材質的膜之後，還(huán)需要(yào)根(gēn)據檢(jiǎn)測蛋白(bái)的大小，選擇(zé)合適的(dí)膜(mó)孔徑(jìng)。Western Blot轉印(yìn)膜(mó)通(tōng)常有兩種(zhǒng)孔徑(jìng)大小：0.2μm和(hé)0.45μm。

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1. Immobilon®-P 0.45umzui chang用的WB轉印(yìn)膜(mó)，適(shì)用於一(yī)般(bān)的免(miǎn)疫(yì)印

跡應用(yòng)。（貨號：IPVH00010）

0.45μm：更(gēng)加常用(yòng)，適合大(dà)於20kD的蛋白(bái)，背(bèi)景較低(dī)

2.Immobilon®-PSQ 0.2um小(xiǎo)分子蛋白(bái)/肽(tài)WB轉印膜(mó)（貨號：ISEQ00010）

適用於蛋白測序和低分子(zǐ)量(liáng)蛋白(bái)的免(miǎn)疫印跡(jì)。它有著(zhuó)更高的蛋白(bái)結合能(néng)力以(yǐ)及(jí)比0.45 μm膜(mó)更高的(dí)截留(liú)率。0.2μm ：特別適(shì)合(hé)小於(yú)20kD的蛋(dàn)白(bái)；推薦用於(yú)低(dī)豐(fēng)度蛋白檢測。結(jié)合能力(lì)是(shì)由孔的內(nèi)部表麵(miàn)積來(lái)決(jué)定(dìng)的（文獻參(cān)考(kǎo)：Mansfield，1994）。0.2μm轉印(yìn)膜(mó)的內部表(biǎo)麵(miàn)積(jī)大約是0.45μm轉印(yìn)膜的(dí)三倍(bèi)，使其(qí)吸(xī)附能(néng)力更(gēng)高(gāo)

三，選(xuǎn)擇合(hé)適的(dí)轉印膜(mó)形式(shì)

• 卷(juàn)膜(mó)

• 預切(qiē)膜(mó)

預切好的(dí)膜與(yǔ)所(suǒ)有預製膠以及(jí)大部(bù)分市(shì)售的凝膠(jiāo)電泳係(xì)統(tǒng)兼容。

對(duì)於(yú)用量(liáng)較小(xiǎo)的情(qíng)況，優(yōu)先推薦(jiàn)選擇(zé)預裁切的(dí)包(bāo)裝(zhuāng)產品(pǐn)，使(shǐ)用比較便(biàn)捷也(yě)可以避免浪費。對於用(yòng)量較大(dà)的(dí)情況(kuàng)，推薦(jiàn)使(shǐ)用整(zhěng)卷產(chǎn)品(pǐn)。預(yù)裁切(qiē)產(chǎn)品(pǐn)無(wú)需再(zài)進行裁切，使用非常(cháng)便捷；並且由(yóu)於機械(xiè)化(huà)裁(cái)切(qiē)的效率(shuài)很(hěn)高(gāo)，可(kě)以避免(miǎn)手(shǒu)工(gōng)裁切(qiē)導致的膜裁切(qiē)時(shí)的(dí)浪(làng)費(fèi)。

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