康(kāng)寧(níng)基底膜(mó)基(jī)質可以以幾(jī)種(zhǒng)方式(shì)使(shǐ)用。薄層(céng)凝(níng)膠(jiāo)法適用(yòng)於(yú)在凝(níng)膠頂(dǐng)部接種細(xì)胞(bāo)，厚(hòu)層凝膠法(fǎ)允許(xǔ)您(nín)在(zài)三(sān)位(wèi)基(jī)質(zhì)內培養細(xì)胞，薄(báo)層包(bāo)被法(不凝膠化)給(gěi)您(nín)提供(gōng)了復雜的蛋(dàn)白(bái)質(zhì)層(céng)，您可(kě)以在其上(shàng)培養(yǎng)細胞。您(nín)的(dí)選擇(zé)基(jī)於您想(xiǎng)要實(shí)現的(dí)最(zuì)終(zhōng)結(jié)果(guǒ)，無(wú)論(lùn)是(shì)細胞(bāo)生(shēng)長，附著還是(shì)分(fēn)化。

  注意
：在康寧支(zhī)持網(wǎng)頁上發(fā)布了具體(tǐ)的應用程序*。康(kāng)寧(níng)基底膜(mó)基質產品的(dí)蛋(dàn)白(bái)質濃度是(shì)批(pī)次特異(yì)的並(bìng)提(tí)供在(zài)分析(xī)證明(míng)書上(shàng)。通(tōng)過(guò)計算(suàn)需要的(dí)特定蛋白(bái)濃度(mg/mL)獲(huò)得(dé)了(liǎo)稀(xī)釋康(kāng)寧基底(dǐ)膜基質產(chǎn)品(pǐn)的(dí)一致(zhì)結果(guǒ)。為(wéi)了維(wéi)持凝膠化(huà)的(dí)一(yī)致(zhì)性(xìng)，我(wǒ)們(mén)推(tuī)薦不(bù)要將康寧基(jī)底膜基(jī)質稀釋到(dào)少於(yú) 3 mg/mL。請(qǐng)使(shǐ)用(yòng)冰冷的無(wú)血清培養(yǎng)基來(lái)稀(xī)釋康(kāng)寧基(jī)底膜(mó)基(jī)質。通(tōng)過在冰(bīng)上移液管上下吸(xī)液或渦旋(xuán)小瓶來混合。

一，薄層凝膠法

  1. 依(yī)照推(tuī)薦(jiàn)的方法解凍(dòng)康寧(níng)基底膜(mó)基質(zhì)。使用預(yù)冷的(dí)移液管，將康寧(níng)基底膜基(jī)質混合(hé)至均匀(yún)。

  2. 將培養板(bǎn)放置在冰上，以 50 µl/cm2向生長表麵(miàn)加入康(kāng)寧基底(dǐ)膜基(jī)質。

  3. 將(jiāng)培(péi)養(yǎng)板(bǎn)放置在(zài) 37 °C ，30 分鐘(zhōng)。

  4. 如果有(yǒu)必要的話，請在使(shǐ)用無(wú)血(xiě)清培(péi)養基輕柔漂洗前吸出未(wèi)結合的(dí)材料。請(qǐng)確保(bǎo)移(yí)液器(qì)的吸(xī)頭不(bù)要刮擦(cā)包被(bèi)的表(biǎo)麵。培養板現(xiàn)在(zài)可以使用了(liǎo)。

二(èr)，厚(hòu)層凝(níng)膠法(fǎ)

  1.  依(yī)照(zhào)推(tuī)薦的(dí)方法解凍康(kāng)寧基(jī)底(dǐ)膜基質。使(shǐ)用(yòng)預冷(lěng)的移(yí)液管(guǎn)，將康(kāng)寧基(jī)底膜基質混合至均(jūn)匀。

  2. 將(jiāng)培(péi)養板放(fàng)置(zhì)在(zài)冰上(shàng)。向康寧(níng)基底膜(mó)基質中加(jiā)入細胞並(bìng)使用預(yù)冷的移液管(guǎn)懸浮。以150-200 µl/cm2向(xiàng)生(shēng)長(cháng)表(biǎo)麵加入康(kāng)寧(níng)基(jī)底(dǐ)膜基(jī)質(zhì)。

  3. 將(jiāng)培養板放置(zhì)在 37°C，30 分(fēn)鐘。現在(zài)可(kě)以添(tiān)加培(péi)養(yǎng)基(jī)了。細胞也可(kě)以(yǐ)培養在這一(yī)凝膠的頂(dǐng)部。

三(sān)，薄層包(bāo)被法

  1. 依照(zhào)推(tuī)薦的方(fāng)法解(jiě)凍康寧(níng)基底(dǐ)膜(mó)基質。使用預(yù)冷的(dí)移液(yè)管，將(jiāng)康(kāng)寧基底(dǐ)膜基質混合(hé)至均匀(yún)。

  2. 使(shǐ)用無血(xiě)清培養(yǎng)基(jī)將康寧(níng)基底膜基質稀(xī)釋(shì)到需(xū)要(yào)的(dí)濃(nóng)度。對於您的應(yīng)用程序(xù)，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗(yàn)為主的(dí)研究(jiū)來(lái)確定您的最(zuì)適包被(bèi)濃(nóng)度。

  3. 向被包被的容器(qì)中加(jiā)入稀釋(shì)的康寧基(jī)底膜(mó)基(jī)質(zhì)。加(jiā)入的量應該(gāi)足以(yǐ)容(róng)易地覆蓋整個生長(cháng)表麵(miàn)。在(zài)室(shì)溫下培養(yǎng) 1 個小(xiǎo)時(shí)。

  4. 吸出未結(jié)合的材料並(bìng)使用(yòng)無(wú)血清(qīng)培(péi)養(yǎng)基(jī)輕柔(róu)地(dì)漂洗。培(péi)養板(bǎn)現在(zài)可以使用(yòng)了(liǎo)。

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