分析(xī)型流式細胞儀檢測原(yuán)理

將待測(cè)樣(yàng)品製(zhì)成(chéng)單細(xì)胞懸液(yè)，在鞘(qiào)液(yè)的包(bāo)裹下(xià)進入流式細胞(bāo)儀(yí)內的(dí)檢測區域，細(xì)胞(bāo)在激(jī)光(guāng)的(dí)照射下會發(fā)生散(sàn)射和(hé)折射，產生(shēng)的散(sàn)射光(guāng)信(xìn)號(hào)和熒(yíng)光信號由不同的(dí)通道(dào)接(jiē)收。其(qí)中前向角散(sàn)射(shè)光（FSC）的(dí)強(qiáng)度與(yǔ)細胞直徑(jìng)成(chéng)正(zhèng)相關(guān)，可以理解為(wéi)細(xì)胞直(zhí)徑越(yuè)大(dà)，FSC越強(qiáng)，細(xì)胞直(zhí)徑越(yuè)小(xiǎo)，FSC越(yuè)弱。所以(yǐ)可(kě)以利用(yòng)細胞的FSC值(zhí)初步比較細胞(bāo)的(dí)大小，利用FSC值對細(xì)胞進行(háng)分群(qún)和(hé)分類。  

側向角散射光（SSC）的強(qiáng)度(dù)與細(xì)胞(bāo)內顆(kē)粒結(jié)構復(fù)雜(zá)程(chéng)度成(chéng)正(zhèng)相(xiāng)關(guān)（與細胞中所含的(dí)細胞器，細胞核等(děng)的數(shù)量成(chéng)正比），可(kě)以(yǐ)理解為(wéi)細(xì)胞內(nèi)顆(kē)粒結構(gòu)越復雜，SSC越(yuè)強；細(xì)胞(bāo)內(nèi)顆(kē)粒結(jié)構越(yuè)簡單(dān)，SSC越(yuè)弱(ruò)。所以可以(yǐ)利用(yòng)細胞的SSC值初(chū)步比較(jiào)細(xì)胞的顆(kē)粒度，利用(yòng)SSC值對細胞(bāo)進行(háng)分群和(hé)分類(lèi)。

當細胞(bāo)通過激光(guāng)束(shù)時，檢測器(qì)會檢測到細(xì)胞或顆(kē)粒的散射光(guāng)，放置(zhì)在前麵的檢(jiǎn)測器(qì)檢測(cè)FSC值(zhí)，而(ér)放(fàng)置在側麵(miàn)的多個(gè)檢(jiǎn)測(cè)器(qì)檢(jiǎn)測(cè)SSC值。通過綜(zōng)合分(fēn)析前(qián)向散(sàn)射FSC和(hé)側向(xiàng)散射SSC的數(shù)據，便(biàn)能根(gēn)據細胞(bāo)大(dà)小，形狀和(hé)復雜度將其進(jìn)行(háng)分群分類。由於(yú)樣品(pǐn)細胞不(bù)需(xū)要標(biāo)記任何(hé)熒(yíng)光化合物偶聯抗(kàng)體，直接(jiē)上樣(yàng)分析(xī)得(dé)到(dào)FSC值和SSC值，其值代表細(xì)胞(bāo)的(dí)大小和(hé)顆(kē)粒(lì)度(dù)兩個物(wù)理特征(zhēng)，所(suǒ)以(yǐ)FSC-SSC散(sàn)點圖(tú)又稱為 “物理圖(tú)"。

分(fēn)選型流式(shì)細胞儀檢(jiǎn)測原(yuán)理

當(dāng)細胞懸(xuán)液放(fàng)入樣品(pǐn)管中(zhōng)，被(bèi)高壓(yā)壓入(rù)流動(dòng)室內。流動室內充滿鞘(qiào)液，在(zài)鞘液(yè)的(dí)包(bāo)裹和推動(dòng)下，細(xì)胞被排(pái)成(chéng)單列(liè)，以(yǐ)一定速度從(cóng)流動室(shì)噴(pēn)口(kǒu)噴出(chū)。在流動(dòng)室的(dí)噴(pēn)口上配(pèi)有一個超高頻(pín)的壓(yā)電晶體，充電(diàn)後振(zhèn)動，使(shǐ)噴(pēn)出(chū)的液流斷(duàn)裂為(wéi)均匀的(dí)液滴，待測細(xì)胞就(jiù)分散在這些液(yè)滴(dī)之(zhī)中(zhōng)。將這些液(yè)滴(dī)充以(yǐ)正，負(fù)不同(tóng)的(dí)電(diàn)荷，當液滴(dī)流經過帶(dài)有幾(jī)千(qiān)伏(fú)的(dí)偏轉板時，在(zài)高(gāo)壓(yā)電(diàn)場的作(zuò)用下偏轉(zhuǎn)落入(rù)各自(zì)的收集容器(qì)中，沒有(yǒu)充電(diàn)的液滴落入中間(jiān)的廢液容器，從(cóng)而(ér)實現細(xì)胞(bāo)的分離(lí)。流式(shì)細(xì)胞(bāo)儀(yí)除了(liǎo)根(gēn)據FSC和SCC散(sàn)射(shè)度(dù)或熒光(如DNA，RNA或蛋白(bái)含(hán)量，酶(méi)活(huó)性(xìng)，特異抗原(yuán)) 散射度差異來(lái)分離細胞外，更多(duō)的采用細胞表(biǎo)麵(miàn)抗(kàng)原標(biāo)記的熒光(guāng)強(qiáng)度差異來分(fēn)離細(xì)胞。每種細(xì)胞表麵(miàn)具有du te的(dí)抗原(yuán)，當形(xíng)態(tài)學(xué)檢測難以(yǐ)區(qū)別(bié)時，免(miǎn)疫表(biǎo)型參數(shù)對細胞分(fēn)選(xuǎn)有決定(dìng)性(xìng)作用(yòng)。

流(liú)式細胞(bāo)術結(jié)果(guǒ)

熒(yíng)光(guāng)信號和散射光信號(hào)通過波長(cháng)選擇的(dí)濾(lǜ)光片，由相(xiāng)應的(dí)光(guāng)電管和(hé)電(diàn)子檢測器接(jiē)收並轉換成(chéng)電信號，經放(fàng)大(dà)器放(fàng)大(dà)後送入計(jì)算機並(bìng)進(jìn)行(háng)分析(xī)顯示(shì)和(hé)結(jié)果輸(shū)出，測定(dìng)的結果常用(yòng)流式直(zhí)方圖(tú)，流式散點(diǎn)圖(tú)，流式(shì)密度圖(tú)和(hé)流式(shì)等(děng)高(gāo)綫圖來表(biǎo)示。

流(liú)式(shì)細胞術(shù)樣(yàng)本類型

流(liú)式(shì)細胞(bāo)儀(yí)可檢測多種(zhǒng)樣(yàng)本(běn)：外(wài)周(zhōu)血，骨(gǔ)髓，細(xì)胞穿(chuān)刺液，洗脫(tuō)液，實體(tǐ)組織，培(péi)養細(xì)胞，微生物(wù)。

流(liú)式細胞術應(yīng)用

1.流(liú)式細胞(bāo)術可以(yǐ)用(yòng)來檢(jiǎn)測細(xì)胞表麵以(yǐ)及胞內的各(gè)種(zhǒng)標誌，對細胞進(jìn)行分群鑒定以及各種蛋白表達量(liáng)高低(dī)的比較。

2.通過標記Ki67，BCL-2，caspases等增(zēng)殖及凋亡(wáng)相(xiāng)關(guān)基(jī)因(yīn)，流式細胞(bāo)術(shù)可用來(lái)檢測細(xì)胞的(dí)增殖以及(jí)凋(diāo)亡。

3.流(liú)式細(xì)胞(bāo)術可用來分析(xī)細(xì)胞(bāo)周(zhōu)期。細胞(bāo)核(hé)DNA含量隨(suí)著(zhuó)細胞(bāo)增殖周(zhōu)期(qī)時相(xiāng)的(dí)不同而發生變(biàn)化，用DNA染(rǎn)料進(jìn)行(háng)染色，DNA含量(liáng)多，熒光信(xìn)號(hào)強，DNA含量少，熒光強度(dù)低。

4.在腫瘤學研(yán)究中(zhōng)尤其(qí)常(cháng)用，流(liú)式細(xì)胞術可(kě)以用(yòng)於判斷藥物(wù)對腫(zhǒng)瘤(liú)細胞(bāo)影響，腫(zhǒng)瘤的生(shēng)長速度等。