該怎麼使(shǐ)用呢
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一(yī)，人(rén)腦組織(zhī)通用解離(lí)試(shì)劑盒簡介

本(běn)產(chǎn)品(pǐn)適用於(yú)人腦(nǎo)組(zǔ)織的(dí)細胞懸(xuán)液(yè)的(dí)分離(lí)製(zhì)備,本產品利用(yòng)酶(méi)溫和，快速(sù)有效地破(pò)壞(huài)細胞外基質，釋放細胞，從而生成(chéng)單細胞懸浮(fú)液。製備(bèi)的單細(xì)胞懸液(yè)可(kě)用(yòng)於(yú)單(dān)細(xì)胞測序(xù)，細(xì)胞培養或其他細胞(bāo)相關(guān)檢測。

二(èr)，人腦組(zǔ)織(zhī)通(tōng)用(yòng)解離試(shì)劑盒(hé)使(shǐ)用(yòng)說明(míng)

【使(shǐ)用方(fāng)法】

準備(bèi)工作:水(shuǐ)浴鍋或雜交(jiāo)爐設(shè)置到37℃，配製(zhì)含5%FBS的PBS新鮮(xiān)組織約200mg(黃豆(dòu)粒(lì)大小)，如圖(tú)1.

1.取(qǔ)一個5mL離心管，加(jiā)入 2160μLBuferA,放(fàng)入(rù)用(yòng) PBS 清洗(xǐ)幹淨的組織(zhī)樣本，並(bìng)剪(jiǎn)碎(suì)。

2.添(tiān)加(jiā)800μL的EnzymeB和10μ的Enzyme C，顛倒(dǎo)混(hùn)匀(yún)。

3.放在(zài) 37℃水浴鍋(guō)或雜交爐中(zhōng) 20~30min。消化過(guò)程中(zhōng),使用水浴(yù)鍋(guō)每隔(gé)3~5min 手(shǒu)動搖晃(huǎng)混匀(yún)，使用(yòng)雜交(jiāo)爐轉(zhuǎn)速20~30轉/分(fēn)鐘左右。

4.每隔(gé)3~5min質(zhì)檢一(yī)次(cì)細胞懸(xuán)液，根據細胞(bāo)總(zǒng)量(liáng)及活性等確(què)定(dìng)消化(huà)停(tíng)止時間5.消化(huà)完成後(hòu)，用 70 μm 細(xì)胞篩進行(háng)過濾，收集濾(lǜ)液於新的15 mL離心管中。6.加(jiā)3mLRPMI1640培(péi)養(yǎng)基或(huò)5%FBS的 PBS 於消(xiāo)化(huà)的離(lí)心管(guǎn)中，上下(xià)顛(diān)倒涮洗管壁涮(shuàn)洗液同(tóng)樣經過(guò)同一(yī)個 70μm 細胞篩進行過濾，收集(jí)濾(lǜ)液於第5步的15 mL 離(lí)心管(guǎn)中7.將收(shōu)集(jí)液(yè)於(yú)4℃，300xg離心5min，棄上清

8.用5mL含(hán)5%FBS的PBS重懸沉澱，吹(chuī)打混匀.

9.放入水(shuǐ)平離心(xīn)機，4℃，300xg離(lí)心5min，棄上清

10.用含5%FBS的(dí) PBS 重(zhòng)懸沉(chén)澱至(zhì) 2mL.

11.加(jiā)入1mLDRS(細胞(bāo)碎片(piàn)去(qù)除緩衝(chōng)液)，用(yòng)5mL移液器緩慢吹打(dǎ)混(hùn)匀10次。不(bù)要(yào)渦(wō)旋振蕩。

12.緩慢加入3mLPBS，輕輕覆(fù)蓋在(zài)最(zuì)上層，千萬(wàn)不要(yào)混匀，如圖2.

13.務(wù)必使用水(shuǐ)平(píng)離心(xīn)機(jī)，並設置為居中的加速度和減(jiǎn)速(sù)度(dù)，4°℃，3000xg，離(lí)心 20 min

14.離(lí)心(xīn)後，緩(huǎn)慢(màn)取(qǔ)出(chū)離心(xīn)管。溶液(yè)分(fēn)成(chéng)3層(céng)。緩(huǎn)慢吸出全部(bù)上清液(優(yōu)先(xiān)吸出碎(suì)片(piàn)層)保留細胞沉澱(上清盡(jìn)量(liáng)去(qù)除幹淨)，如(rú)圖(tú)3和圖4.注(zhù):離(lí)心管要輕拿輕放(fàng)，確(què)保(bǎo)分層(céng)明顯，不(bù)同層的溶(róng)液間(jiān)不(bù)互相(xiāng)混合(hé)

15.向沉澱中加人適(shì)當(dāng)體積的含(hán)5%FBS的PBS,加人三倍(bèi)體積的(dí)紅(hóng)細胞(bāo)裂解液(BA3311).

冰上裂(liè)紅5min。具體(tǐ)可以參(cān)考BA3311紅細胞裂(liè)解液(yè)說明書。

16.加入等(děng)體積的 PBS混匀(yún)，終止(zhǐ)裂紅，4℃，450xg，離(lí)心(xīn)5min，棄上(shàng)清

17.用10mL含(hán)5%FBS的(dí) PBS重懸(xuán)沉(chén)澱，吹打混匀.

18.4℃，300xg離(lí)心(xīn)5min，棄上清.

19.用(yòng)50μL~2mL 含5%FBS的 PBS 重(zhòng)懸沉(chén)澱,根據(jù)所(suǒ)需的(dí)細胞濃(nóng)度調(tiáo)整(zhěng)重懸液的體(tǐ)積。20.若(ruò)有明(míng)顯細胞結團，則使用 20μm細胞(bāo)篩進行過(guò)濾(lǜ)，收(shōu)集濾液於新(xīn)的離(lí)心管中(zhōng)。若無(wú)明顯細胞(bāo)結(jié)團(tuán)，則(zé)可跳過此步(bù)驟.

21.用細(xì)胞計數(shù)儀(yí)對(duì)細胞懸(xuán)液進行質控並(bìng)記錄(lù)，質控結(jié)束後(hòu)請立即進(jìn)行(háng)後續(xù)實驗。