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更新(xīn)時間(jiān):2025-03-24
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標(biāo)題:化學(xué)轉染(rǎn)分類(lèi)及(jí)介紹
一,轉染
轉染(transfection)是細胞(bāo)在(zài)一定(dìng)條件(jiàn)下主(zhǔ)動或被(bèi)動(dòng)導入外源(yuán)DNA片段而獲得新(xīn)的表型的(dí)過程。
二(èr),化學(xué)轉染
1.陽離(lí)子脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)
【原(yuán)理(lǐ)】帶正(zhèng)電(diàn)荷的脂(zhī)質體(由磷脂,膽(dǎn)固醇(chún)等組成(chéng)的具有(yǒu)脂(zhī)質(zhì)雙分(fēn)子(zǐ)層結構(gòu))依靠靜電作(zuò)用(yòng)與(yǔ)DNA形成(chéng)DNA-脂(zhī)質體復合物,通過細胞的(dí)內吞作用(yòng)進入細胞.
【優點】操(cāo)作(zuò)簡便
適合轉染各(gè)種細胞
對DNA濃(nóng)度有一(yī)定要(yào)求
重(zhòng)復性好(hǎo),但轉染時需(xū)除血(xiě)清
【缺點】需(xū)進行條件(jiàn)優化(一(yī)些(xiē)細(xì)胞對陽離子(zǐ)脂質體(tǐ)較敏感)
有(yǒu)些細胞(bāo)係(xì)不容易(yì)轉染(rǎn)
血清(qīng)的存在(zài)幹(gān)擾(rǎo)復合物(wù)的形成,導致低轉染效(xiào)率
2.陽(yáng)離子(zǐ)聚(jù)合物(如(rú)聚(jù)乙(yǐ)烯亞胺(àn)(PEI))
【原(yuán)理】帶(dài)正(zhèng)電的聚合(hé)物(wù)與(yǔ)DNA形(xíng)成(chéng)帶正電(diàn)的復(fù)合(hé)物(wù)後與細胞(bāo)表麵帶負電的(dí)蛋(dàn)白多(duō)糖相互作(zuò)用,並通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細胞(bāo)
【優點(diǎn)】不含疏(shū)水部分(fēn)而(ér)wan-quan溶於水(shuǐ)
可進(jìn)行(háng)化學修飾
不像(xiàng)脂質體(tǐ)一(yī)樣破(pò)壞(huài)細胞結構(gòu)
濃縮DNA,將DNA運送(sòng)到細(xì)胞內,並其在細(xì)胞(bāo)核內釋放(fàng)
細胞毒(dú)性(xìng)很低,高效
不(bù)被血(xiě)清清(qīng)除
【缺(quē)點(diǎn)】不(bù)能(néng)生物(wù)降解(樹枝狀大分(fēn)子)
隻限(xiàn)於瞬時(shí)轉染
3.磷酸(suān)鈣(gài)法
【原理(lǐ)】磷酸(suān)鈣能夠促(cù)進外源DNA和細(xì)胞的結合,磷酸鈣-DNA復合(hé)物能(néng)夠(gòu)附著到(dào)細胞(bāo)表(biǎo)麵,並通過內(nèi)吞作用(yòng)進入細胞
【優(yōu)點(diǎn)】操作簡單(dān)
對(duì)DNA濃(nóng)度要求高
【缺點】對pH值(zhí)敏(mǐn)感,需仔細(xì)製備(bèi)試劑(jì)
適(shì)用性(xìng)有局(jú)限(不適(shì)用於原代(dài)細(xì)胞(bāo)和(hé)懸(xuán)浮細(xì)胞)
不能(néng)采用RPMI培養基(含有高濃(nóng)度(dù)的磷酸(suān)鹽)
三,Polyplus轉染試(shì)劑
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