一
，Lipo 2000介紹(shào)

賽默飛(fēi)Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑是一種多功能轉染試劑，經證明可以將各種(zhǒng)有(yǒu)效載荷有效(xiào)地(dì)轉染到各(gè)種貼(tiē)壁(bì)和懸(xuán)浮(fú)細(xì)胞係(xì)中(zhōng)。

二
，Lipo 2000轉(zhuǎn)染(rǎn)步(bù)驟

1.轉(zhuǎn)染(rǎn)前一天，胰酶消(xiāo)化(huà)細胞並計(jì)數(0.5-2x105)細胞鋪板，使其(qí)在轉染(rǎn)日密度為90-95%。細胞鋪板在0.5 ml含(hán)血清，不含抗(kàng)生(shēng)素的正常生(shēng)長(cháng)的培(péi)養(yǎng)基中。2.對(duì)於(yú)每孔細胞，使用50 ul無(wú)血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEM I培(péi)養基)稀(xī)釋0.8-1.0ugDNA，輕輕混匀。

3.使用(yòng)前將(jiāng)Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑(jì)輕輕混匀(yún)，用50ul無(wú)血清培(péi)養基(jī)(如(rú)OPTIMEM I培養基(jī))稀釋1-3 ul Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混匀。Lipofectamine2000稀釋後，在(zài)5分鐘內(nèi)同(tóng)稀釋的DNA混合(hé)(<30分鐘(zhōng))。NOTE:若使(shǐ)用DMEM培(péi)養基(jī)，則(zé)需(xū)在(zài)5分鐘(zhōng)內同(tóng)稀(xī)釋的DNA混(hùn)合。4.混合稀(xī)釋(shì)的(dí)DNA(第二步)和(hé)稀釋的Lipofectamine 2000(第三(sān)步(bù))。室溫放置(zhì)20分鐘。

5.(optional)將24孔板中(zhōng)的舊營(yíng)養液(yè)吸出，用無(wú)血清(qīng)培養(yǎng)基(jī)清(qīng)洗兩(liǎng)次。加入(rù)0.5ml無血清(qīng)配養(yǎng)基。

6.直接將(jiāng)復(fù)合物(wù)加入到(dào)每(měi)孔(kǒng)中，搖動培(péi)養板，輕輕(qīng)混匀。

7.在37℃，5%CO2中保溫(wēn)24-48小(xiǎo)時(shí)。無需去掉(diào)復合(hé)物(wù)或(huò)更換(huàn)培(péi)養基。或(huò)者(zhě)在4-5小時後(hòu)更(gēng)換培(péi)養生長(cháng)基也不會降(jiàng)低(dī)轉染活性。

8.在細胞(bāo)中加入復合物24-72小(xiǎo)時(shí)後，分析(xī)細胞(bāo)抽(chōu)提(tí)物或(huò)進行(háng)原位細(xì)胞染色(sè)，檢測報告基因活(huó)性。這依(yī)賴於細(xì)胞(bāo)類型(xíng)和啟動子活性(xìng)。對穩定表(biǎo)達(dá)，在開始轉(zhuǎn)染一天後將細胞(bāo)傳(chuán)代(dài)至新(xīn)鮮培(péi)養(yǎng)基中(zhōng)，兩天(tiān)後(hòu)加(jiā)入篩選抗生素(sù)。進行穩(wěn)定表達需(xū)要數天(tiān)或(huò)數(shù)周。貼壁細胞的穩定轉(zhuǎn)染:

轉染(rǎn)後24小時，將細(xì)胞以>1:10的比例(lì)傳代至新(xīn)鮮(xiān)培(péi)養基中，次日加入選擇性培(péi)養(yǎng)基。

三
，Lipo2000購買(mǎi)渠道

賽默飛(fēi)代(dài)理——天(tiān)津益(yì)元利康生(shēng)物科(kē)技有限公(gōng)司，公(gōng)司產(chǎn)品(pǐn)綫涉(shè)及(jí)細胞與基(jī)因治療(liáo)
，免疫學
，分子生(shēng)物學(xué)
，細(xì)胞生物(wù)學等多個方(fāng)向，專注於生命科(kē)學試(shì)劑(jì)
，耗(hào)材(cái)
，細(xì)胞(bāo)
，儀(yí)器(qì)等產品(pǐn)銷(xiāo)售(shòu)。