引言(yán)
CD8 T細(xì)胞(bāo)在免疫應答(dá)中(zhōng)扮演(yǎn)核心角色(sè)
，其分(fēn)離純度直(zhí)接(jiē)影響下遊實驗的可靠性(xìng)
。然而
，傳統分離方法(fǎ)常麵臨操(cāo)作復雜，細(xì)胞活性受(shòu)損等問題(tí)
。英(yīng)諾(nuò)思推出的EasyIso™ 人類(lèi)CD8 T細胞(bāo)分離試(shì)劑盒(hé)（貨號(hào)SN3103）
，通過創新(xīn)的無柱磁(cí)極(jí)分離(lí)技術(shù)
，實現(xiàn)高(gāo)純(chún)度(dù)，快(kuài)速且(qiě)溫(wēn)和的CD8 T細(xì)胞(bāo)分(fēn)選(xuǎn)
，為(wéi)科研與臨床研究提(tí)供高效工(gōng)具(jù)
。上期介(jiè)紹了原(yuán)理《》
，這期(qī)介紹一(yī)下操(cāo)作步驟(zhòu)
。

一，操作(zuò)步驟：快速(sù)四步(bù)法

1. 樣本製備(bèi)：將PBMC單(dān)細胞(bāo)懸液濃度調(tiáo)整至1×10⁸ cells/mL；

2. 抗體孵育：按(àn)100 μL/mL加入(rù)EasyIso™ Human CD8 T Cell Isolation Cocktail
，常溫孵(fū)育10分鐘

3. 磁(cí)珠結合：加入鏈(liàn)黴親和(hé)素納米(mǐ)磁珠(zhū)（100 μL/mL）
，輕柔混(hùn)匀後孵(fū)育5分鐘；

4. 磁(cí)極(jí)分(fēn)離：

使用磁力(lì)架吸(xī)附(fù)3-5分鐘（單(dān)孔/聯排架(jià)）；

傾斜磁力架(jià)
，將富(fù)含(hán)CD8 T細胞(bāo)的(dí)上(shàng)清(qīng)轉移至(zhì)新(xīn)管(guǎn)中(zhōng)
，即(jí)可(kě)獲得高(gāo)純度(dù)細胞
。

全(quán)程僅(jǐn)需(xū)20分(fēn)鐘(zhōng)
，顯(xiǎn)著提升(shēng)實驗(yàn)效率
。

二，關(guān)鍵(jiàn)試(shì)劑與(yǔ)設備(bèi)要求

緩衝液：推薦(jiàn)使(shǐ)用FACS Buffer（1×PBS + 0.02% EDTA + 2% FBS）
，提高(gāo)細胞得率；

耗材：70 μm無菌(jūn)濾(lǜ)網，無菌(jūn)離心(xīn)管；

儀器：離心(xīn)機(jī)，磁力架（兼(jiān)容單孔或聯排(pái)管(guǎn)）
。

三(sān)，使用建(jiàn)議與注(zhù)意事項(xiàng)

PBMC製備：推(tuī)薦(jiàn)采用淋(lín)巴(bā)細胞(bāo)分(fēn)離(lí)液(yè)進行密度梯(tī)度(dù)離心
，避免紅細(xì)胞裂解法；

無菌(jūn)操(cāo)作：全(quán)程(chéng)需(xū)在(zài)超(chāo)淨台中(zhōng)進行(háng)
，防(fáng)止(zhǐ)汙染(rǎn)；

滲(shèn)透(tòu)壓(yā)穩(wěn)定(dìng)：確(què)保FACS Buffer配製準(zhǔn)確
，保(bǎo)護敏感免疫細胞(bāo)；

磁珠處(chǔ)理：使用前(qián)充分(fēn)震蕩混(hùn)匀磁(cí)珠30秒
，確保結(jié)合效率(shuài)
。

四，數據(jù)驗證：純度高(gāo)達91.2%

實(shí)驗數據(jù)顯示
，使用SN3103試(shì)劑盒分(fēn)選後：

分選前(qián)：PBMC中CD8+ T細胞占(zhān)比14.3%；

分(fēn)選(xuǎn)後：CD3+CD8+ T細胞(bāo)純(chún)度(dù)提升至91.2%（圖B）
，滿足高(gāo)標準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)需求(qiú)
。

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