一，Zymo  DNA甲(jiǎ)基化檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑(jì)盒核(hé)心原(yuán)理
：重(zhòng)亞(yà)硫(liú)酸鹽(yán)轉(zhuǎn)化

幾乎所有(yǒu)Zymo的都基於(yú)同一個金(jīn)標準(zhǔn)技術
：重亞硫(liú)酸鹽(yán)處理。

   原理(lǐ)
：在重亞硫酸鹽作用下(xià)，DNA中未甲(jiǎ)基(jī)化的(dí)胞(bāo)嘧啶 會被(bèi)脫(tuō)氨基並轉化(huà)為尿(niào)嘧啶(dìng)，而在PCR過程(chéng)中尿嘧啶會被(bèi)當作胸腺(xiàn)嘧啶進行(háng)擴(kuò)增。

   而甲基化的胞(bāo)嘧(mì)啶(dìng) 則(zé)不(bù)受影(yǐng)響，保持不(bù)變(biàn)。

   結(jié)果(guǒ)
：經(jīng)過處(chǔ)理(lǐ)後的(dí)DNA，通過測序(xù)或特(tè)異性PCR等方法進行分析，原本甲基化（CmC）和未(wèi)甲(jiǎ)基(jī)化(huà)（C→U→T）的(dí)位點就(jiù)會產(chǎn)生序列差(chà)異，從而(ér)被精(jīng)準(zhǔn)地(dì)檢測出來(lái)。

二， 主(zhǔ)要(yào)的Zymo DNA甲基(jī)化(huà)試劑盒係列

Zymo提供(gōng)了(liǎo)多種試劑盒以(yǐ)滿足不(bù)同的(dí)實驗需(xū)求(qiú)，其中(zhōng)zui經(jīng)典和常用的是 EZ係列。

 1. EZ DNA Methylation係列 - 用於DNA的重亞硫酸鹽轉化(huà)

這(zhè)是(shì)最(zuì)基礎(chǔ)也是(shì)最核心(xīn)的(dí)係(xì)列(liè)，目(mù)的(dí)是(shì)將(jiāng)基因組DNA轉(zhuǎn)化為可(kě)用於下遊分(fēn)析(xī)的DNA。

   EZ DNA Methylation-Lightning Kit

       特(tè)點
：速(sù)度最(zuì)快。將傳統的(dí)重亞(yà)硫(liú)酸(suān)鹽(yán)處(chǔ)理時(shí)間從數小時(shí)（如16-18小(xiǎo)時）大幅縮(suō)短(duǎn)到約(yuē)90分鐘。

       優勢
：極(jí)大減(jiǎn)少(shǎo)了(liǎo)DNA在高溫處理過(guò)程(chéng)中的(dí)降解，特別適用於微量DNA和(hé)FFPE樣本(běn)。

       下(xià)遊應(yīng)用
：全基(jī)因組(zǔ)甲(jiǎ)基化測序，焦(jiāo)磷酸測(cè)序(xù)，甲(jiǎ)基化(huà)特異(yì)性PCR等(děng)。

   EZ DNA Methylation-Direct Kit

       特點
：無需事先提取DNA，可以(yǐ)直(zhí)接從(cóng)細(xì)胞(bāo)，血(xiě)液，組織(zhī)甚至(zhì)FFPE樣本(běn)中進行(háng)重(zhòng)亞(yà)硫(liú)酸(suān)鹽(yán)轉(zhuǎn)化(huà)。

       優勢(shì)
：簡化了(liǎo)流(liú)程，減少了(liǎo)DNA損失，非常(cháng)適合(hé)珍貴(guì)樣本(běn)或高通量(liáng)篩查(chá)。

   EZ DNA Methylation-Gold Kit

       特(tè)點
：Zymo的經(jīng)典產品(pǐn)，使用經過優化的傳統重(zhòng)亞硫(liú)酸(suān)鹽處理方法，轉(zhuǎn)化效(xiào)率和DNA回(huí)收率都非常高。

       優(yōu)勢
：性能(néng)穩(wěn)定可靠(kào)，是經過(guò)大(dà)量(liáng)文獻驗(yàn)證的“金(jīn)標準"之一(yī)。

   EZ-96 DNA Methylation Kit

       特點
：基於96孔板(bǎn)格(gé)式(shì)的(dí)試劑盒，專為(wéi)高通(tōng)量樣本(běn)設(shè)計。

       優勢(shì)
：適(shì)合(hé)自動(dòng)化工作站，可(kě)以實現(xiàn)大批量(liáng)樣本(běn)的(dí)並(bìng)行處(chǔ)理，保證(zhèng)批(pī)次(cì)間一致(zhì)性(xìng)。

 2. MagaZyme係列 - 基於(yú)磁(cí)珠的快速(sù)純化

   MagaZyme DNA Methylation Kit

       特(tè)點
：利(lì)用(yòng)磁(cí)珠(zhū)技(jì)術(shù)進行純(chún)化，進一步(bù)加快(kuài)了洗滌(dí)和(hé)純化步(bù)驟。

       優勢
：操作非常迅速和簡便，無離心(xīn)步驟(zhòu)，易於(yú)實現自動化和(hé)規模(mó)化(huà)。

 3. 下(xià)遊分析專(zhuān)用試劑(jì)盒

Zymo還提供將重亞(yà)硫酸鹽轉化與(yǔ)下(xià)遊分(fēn)析技術(shù)整合(hé)的(dí)“一體化"試劑(jì)盒。

   MethylEdge試劑盒
：為(wéi)下一(yī)代測序(xù)文庫構建(jiàn)而(ér)優(yōu)化。

   MethylLight & MethylPyrom序列試劑盒(hé)
：為(wéi)特(tè)定的實時(shí)熒光定(dìng)量(liáng)PCR和焦(jiāo)磷(lín)酸(suān)測序(xù)平(píng)台優(yōu)化。

三(sān)， Zymo試(shì)劑盒的(dí)通用(yòng)工作(zuò)流程（以EZ Lightning Kit為例）

1.  DNA準(zhǔn)備
：獲(huò)取純化的DNA（或(huò)直接使用(yòng)細胞(bāo)/組(zǔ)織）。

2.  重(zhòng)亞(yà)硫(liú)酸(suān)鹽轉(zhuǎn)化
：將(jiāng)DNA與重亞(yà)硫(liú)酸鹽(yán)反應混合，在(zài)特(tè)定(dìng)的熱(rè)循環程序(xù)（如98°C變(biàn)性(xìng)，54°C轉(zhuǎn)化）下進行約90分(fēn)鐘(zhōng)的(dí)反(fǎn)應。

3.  純(chún)化(huà)結(jié)合
：將(jiāng)反應(yīng)液(yè)轉移到提(tí)供(gōng)的旋轉(zhuǎn)柱(zhù)上(shàng)，在結(jié)合(hé)緩(huǎn)衝液作用(yòng)下(xià)，轉(zhuǎn)化(huà)後的(dí)DNA被特異(yì)性地吸(xī)附到(dào)柱(zhù)膜(mó)上(shàng)。

4.  脫(tuō)硫反(fǎn)應(yīng)
：這(zhè)是(shì)一個(gè)關鍵(jiàn)步驟(zhòu)，柱(zhù)上的DNA經(jīng)過(guò)特(tè)殊的(dí)“Desulphonation Buffer"處理，以去除(chú)由重(zhòng)亞硫酸(suān)鹽反應(yīng)引起的副產物，確(què)保(bǎo)下遊(yóu)應用的兼容性。

5.  洗滌
：用洗滌液(yè)清洗(xǐ)柱子(zǐ)，去(qù)除雜(zá)質。

6.  洗(xǐ)脫
：用(yòng)低鹽緩衝液(yè)或水將純淨(jìng)的，轉化後的DNA從柱子(zǐ)上洗脫下(xià)來(lái)。

7.  下(xià)遊分(fēn)析(xī)
：獲得(dé)的DNA即(jí)可用於(yú)
：

       焦(jiāo)磷(lín)酸(suān)測(cè)序

       全基(jī)因(yīn)組甲(jiǎ)基(jī)化測序

       簡化(huà)代表(biǎo)性(xìng)亞硫(liú)酸(suān)氫(qīng)鹽測(cè)序

       甲(jiǎ)基化(huà)特異性PCR/定量(liáng)PCR

四(sì)，Zymo DNA甲(jiǎ)基化檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑盒(hé)主(zhǔ)要(yào)優勢(shì)總(zǒng)結

1.  高(gāo)效(xiào)率與(yǔ)高(gāo)回收率(shuài)
：zhuanli的(dí)柱純化技術能(néng)有效(xiào)回收轉(zhuǎn)化(huà)後的(dí)DNA，即使(shǐ)是微量(liáng)的起(qǐ)始(shǐ)材(cái)料也能獲(huò)得(dé)理想結果(guǒ)。

2.  zuo越(yuè)的轉化效率(shuài)
：>99%的轉(zhuǎn)化率，確(què)保數(shù)據(jù)的準確性，避免(miǎn)假陽性(xìng)或(huò)假陰性。

3.  快速省時(shí)
：特別是Lightning係列(liè)，極大地(dì)縮短了實驗周期(qī)。

4.  操(cāo)作簡(jiǎn)便(biàn)
：所(suǒ)有(yǒu)步驟（轉化，脫硫(liú)，純化(huà)）在(zài)一(yī)個(gè)試管和(hé)柱(zhù)子(zǐ)中(zhōng)完成，流程(chéng)標準化(huà)。

5.  靈活性與(yǔ)高通量兼容
：提(tí)供(gōng)從(cóng)單(dān)個樣(yàng)本到(dào)96孔板(bǎn)的不同規格(gé)，滿足各(gè)種(zhǒng)通量需求。

6.  廣泛的(dí)樣本兼容性(xìng)
：適(shì)用於(yú)血液，細胞(bāo)，組(zǔ)織，FFPE樣(yàng)本，體液等(děng)多種(zhǒng)來(lái)源的DNA。

五，如何選(xuǎn)擇Zymo 甲基化檢測(cè)試劑盒
？

   追(zhuī)求(qiú)速(sù)度，樣本易(yì)降(jiàng)解(jiě)
：選(xuǎn) Lightning Kit。

   處(chǔ)理(lǐ)大(dà)量FFPE或珍貴樣(yàng)本，想省去(qù)DNA提(tí)取步(bù)驟
：選 Direct Kit。

   需(xū)要處理96個或更(gēng)多樣(yàng)本(běn)，追求(qiú)高通量(liáng)和一致(zhì)性
：選(xuǎn) EZ-96 Kit。

   習慣傳(chuán)統(tǒng)可(kě)靠方法(fǎ)，樣本量充(chōng)足
：選 Gold Kit。

   實(shí)驗室有磁力(lì)架，希望(wàng)流(liú)程(chéng)更快捷
：選 MagaZyme Kit。

總(zǒng)之(zhī)，Zymo DNA甲基(jī)化試劑盒(hé)是表觀遺傳學(xué)研(yán)究(jiū)中(zhōng)一個(gè)非(fēi)常(cháng)*和可(kě)信賴的工(gōng)具平台。在選擇時，請(qǐng)根(gēn)據您(nín)的樣本類型，通(tōng)量需求和(hé)對(duì)時間的要求(qiú)來選(xuǎn)擇(zé)最(zuì)合(hé)適(shì)的型號。

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