美(měi)天旎的磁珠分(fēn)選技(jì)術(shù)非(fēi)常成熟(shú)和高效。其(qí)核心(xīn)步驟標(biāo)準化(huà)程(chéng)度高(gāo)，主要分(fēn)為陽性分(fēn)選(xuǎn)和(hé)陰性(xìng)分選。以(yǐ)下為(wéi)您(nín)詳細解析 MACS® 技術操(cāo)作(zuò)步驟，以從單個細(xì)胞(bāo)懸液中陽(yáng)性分(fēn)選特(tè)定細(xì)胞類(lèi)型(xíng)為(wéi)例(lì)。整(zhěng)個(gè)過(guò)程(chéng)快速
，溫和，通(tōng)常(cháng)在1-2小(xiǎo)時內即(jí)可完成(chéng)。

一(yī)
，美(měi)天(tiān)旎磁(cí)珠分選(xuǎn)第(dì)一步：實(shí)驗(yàn)前(qián)準備(bèi)

1.  樣(yàng)本：製(zhì)備(bèi)好高(gāo)質量的單(dān)細胞(bāo)懸(xuán)液（如從血液
，脾髒
，腫(zhǒng)瘤組織中獲(huò)取(qǔ)，並經細胞篩(shāi)過濾去除團塊）。

2.  試(shì)劑：

       美天旎磁珠(zhū)：針對(duì)您目標(biāo)細胞表(biǎo)麵(miàn)標(biāo)誌(zhì)物的熒光抗(kàng)體-磁(cí)珠(zhū)復合物。

       MACS® 分選緩衝液(yè)：通(tōng)常(cháng)是含(hán)EDTA的(dí)PBS+胎牛血(xiě)清。至關(guān)重(zhòng)要，用於(yú)洗滌
，重懸和(hé)上(shàng)樣。

       預(yù)冷(lěng)的(dí)洗脫/收集管(guǎn)。

3.  儀器與耗(hào)材(cái)：

       MACS® 分(fēn)選架 和(hé) MACS® 分選(xuǎn)柱（根(gēn)據(jù)細胞(bāo)數量選擇(zé)，如(rú) LS柱(zhù) 用(yòng)於最(zuì)多 2x10^9 總細(xì)胞，MS柱 用(yòng)於最多 10^7 總細胞(bāo)）。

       移液器(qì)
，冰盒(hé)等(děng)。

二
，美天旎(nǐ)磁(cí)珠分選(xuǎn)第二(èr)步：細(xì)胞(bāo)標記

1.  計數與(yǔ)離心(xīn)：對(duì)單(dān)細(xì)胞(bāo)懸液進(jìn)行計(jì)數，然後離心（如300-400g，5分鐘）棄(qì)去上(shàng)清(qīng)。

2.  重懸(xuán)：用(yòng)適量(liáng)預冷(lěng)的MACS®緩(huǎn)衝液重懸細胞(bāo)沉澱。建(jiàn)議用(yòng)量：每10^7 個細胞使用(yòng)80-100 μL緩(huǎn)衝液。

3.  加(jiā)入磁(cí)珠(zhū)：向(xiàng)細(xì)胞懸(xuán)液中(zhōng)加入推薦(jiàn)量(liáng)的美(měi)天旎(nǐ)磁珠(zhū)（具(jù)體體(tǐ)積參(cān)考產(chǎn)品說明書）。

4.  混匀與孵(fū)育(yù)：輕輕(qīng)吹(chuī)打(dǎ)混匀，在2-8°C冰箱（或冰(bīng)上）中(zhōng)避光(guāng)孵(fū)育 15-20分(fēn)鐘(zhōng)。

       關(guān)鍵點：低溫(wēn)孵(fū)育可減(jiǎn)少非特異性(xìng)結(jié)合和細胞吞噬，保持細胞(bāo)活性(xìng)。

三
，美(měi)天旎磁(cí)珠分選第(dì)三步：洗滌與重懸

1.  向(xiàng)試管中加(jiā)入10-20倍標(biāo)記體(tǐ)積的(dí)MACS®緩衝(chōng)液(yè)。

2.  離(lí)心(xīn)，棄(qì)去上(shàng)清(qīng)，以(yǐ)去(qù)除(chú)未結合的(dí)遊(yóu)離(lí)磁珠(zhū)。

3.  用(yòng)適(shì)量(liáng)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)重懸細胞。上樣(yàng)體積取(qǔ)決於(yú)分(fēn)選柱的容(róng)量(liáng)（例如(rú)，對於LS柱，用(yòng)500 μL至3 mL重(zhòng)懸(xuán)）。

四(sì)
，美(měi)天旎(nǐ)磁珠(zhū)分(fēn)選(xuǎn)第四(sì)步(bù)：準(zhǔn)備分(fēn)選(xuǎn)柱(zhù)

1.  將(jiāng)MACS®分(fēn)選(xuǎn)柱固(gù)定(dìng)在強磁(cí)場中(zhōng)。

2.  用(yòng)緩衝液潤洗分(fēn)選(xuǎn)柱(zhù)（例如(rú)，LS柱(zhù)用3 mL緩(huǎn)衝液(yè)）。讓液體自然(rán)流盡，此(cǐ)步驟為(wéi)分選柱“預濕(shī)"。

五
，美天(tiān)旎(nǐ)磁珠分選第(dì)五步：上樣與(yǔ)分選

1.  上樣：將細胞懸液小心(xīn)地加到分選柱中(zhōng)。讓細(xì)胞懸(xuán)液(yè)依(yī)靠(kào)重(zhòng)力(lì)自然流下(xià)。不要(yào)用活塞(sāi)或(huò)助推(tuī)器(qì)。

2.  收集流(liú)穿液(yè)：流下(xià)來的液(yè)體即為(wéi)未(wèi)標記的陰性細胞（非目標細(xì)胞(bāo)），可用收集管接收。

3.  洗(xǐ)滌：待(dài)細胞懸(xuán)液wanquan進入柱(zhù)床後，分(fēn)多次加(jiā)入(rù)緩衝液洗滌(dí)（如(rú)LS柱：3次(cì)，每次3 mL）。收集所有(yǒu)的流穿(chuān)液(yè)，這部分也是(shì)陰(yīn)性(xìng)細胞(bāo)。

六
，美天(tiān)旎(nǐ)磁(cí)珠分(fēn)選第(dì)六步(bù)：洗(xǐ)脫目標細胞

1.  將(jiāng)分(fēn)選(xuǎn)柱移出磁(cí)場，放在一個新(xīn)的收(shōu)集管上(shàng)。

2.  加入適量(liáng)的(dí)緩(huǎn)衝液（如(rú)LS柱(zhù)用(yòng)5 mL）。

3.  立即用柱塞 迅速
，有力地將(jiāng)緩衝液推(tuī)過(guò)分選柱(zhù)。這一步是將被磁場吸(xī)附(fù)的(dí)磁性標記(jì)細(xì)胞（目(mù)標(biāo)細胞(bāo)） 衝(chōng)洗(xǐ)下來。

4.  收集(jí)到(dào)的液(yè)體(tǐ)就是您(nín)需(xū)要的高(gāo)純(chún)度目標(biāo)細胞。

七(qī)
，美天(tiān)旎磁珠分(fēn)選(xuǎn)第七(qī)步：分(fēn)析與後(hòu)續(xù)使用

1.  可對分選得到(dào)的陽性細(xì)胞和陰性細胞進(jìn)行(háng)細(xì)胞計(jì)數和(hé)活力檢測(cè)（如台盼(pàn)藍染色）。

2.  通過(guò)流式(shì)細胞術(shù) 檢(jiǎn)測(cè)分選(xuǎn)純度。

3.  細胞(bāo)可直接用於(yú)下(xià)遊(yóu)實驗(yàn)：如(rú)細胞培養(yǎng)
，功能實(shí)驗
，分子(zǐ)生物學(xué)分析(xī)或單(dān)細(xì)胞測(cè)序。

關(guān)鍵注(zhù)意事項

1.  保(bǎo)持低溫(wēn)：整(zhěng)個(gè)操作(zuò)過程盡(jìn)可能在(zài)2-8°C或(huò)冰上進行，以(yǐ)維(wéi)持細胞活性(xìng)和減少(shǎo)非(fēi)特(tè)異(yì)性結(jié)合。

2.  避免氣(qì)泡：上樣(yàng)和加(jiā)緩(huǎn)衝液時(shí)，盡(jìn)量(liáng)避(bì)免產生(shēng)氣(qì)泡，以(yǐ)免(miǎn)影(yǐng)響分選(xuǎn)柱內(nèi)的流(liú)體動(dòng)力學(xué)。

3.  不要堵(dǔ)塞柱子：細胞懸液必(bì)須無(wú)團(tuán)塊(kuài)，否(fǒu)則會堵塞分選(xuǎn)柱。

4.  選(xuǎn)擇(zé)合(hé)適(shì)的柱子：根據起始細(xì)胞總數和(hé)目標(biāo)細胞的預(yù)期頻率選(xuǎn)擇合適(shì)型號的分(fēn)選柱(zhù)。寧(níng)大勿小(xiǎo)。

5.  快速操作：洗脫(tuō)步驟(zhòu)要迅(xùn)速(sù)，一旦(dàn)分選(xuǎn)柱離開磁(cí)場(cháng)，就(jiù)應立即洗脫(tuō)，防(fáng)止(zhǐ)磁珠標記(jì)的(dí)細胞因磁(cí)場消失而重(zhòng)新(xīn)混(hùn)入柱床。

6.  緩衝(chōng)液：務必(bì)使(shǐ)用推薦(jiàn)的MACS®緩衝液，其他緩衝液中的(dí)Ca2+/Mg2+可能影(yǐng)響分(fēn)選(xuǎn)效(xiào)果。

分選策(cè)略(lüè)選擇

   陽(yáng)性分選：直接
，快速(sù)地獲取目(mù)標(biāo)細胞(bāo)。如上文所述(shù)。

   陰性分選(xuǎn)：通過去(qù)除(chú)所(suǒ)有(yǒu)不想要(yào)的細(xì)胞，間接富(fù)集(jí)目(mù)標(biāo)細(xì)胞。適用於目(mù)標細胞(bāo)沒有特(tè)異(yì)性表(biǎo)麵(miàn)標(biāo)誌物(wù)，或(huò)標(biāo)誌(zhì)物未知的(dí)情況(kuàng)，也適(shì)用(yòng)於(yú)不希(xī)望抗體(tǐ)與(yǔ)細(xì)胞(bāo)表(biǎo)麵受體結(jié)合(hé)影(yǐng)響(xiǎng)後(hòu)續功能實(shí)驗(yàn)的情況。

   去(qù)除(chú)死(sǐ)細胞：可(kě)以(yǐ)使用(yòng)特定的死(sǐ)細(xì)胞去除(chú)試劑盒(hé)，在分選前先去除死(sǐ)細胞(bāo)，能極(jí)大(dà)提高分選(xuǎn)效(xiào)率和(hé)純度。

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