為什麼要用內(nèi)參抗體？

更(gēng)新時間(jiān)：2025-12-02

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一，內參(cān)抗體簡介(jiè)

內(nèi)參(cān)抗(kàng)體，就(jiù)是用(yòng)來檢(jiǎn)測(cè)內(nèi)參蛋(dàn)白(bái)的抗(kàng)體(tǐ) 。它的唯1使命(mìng)，是作為(wéi)一個“標尺"或“參照(zhào)物"，來校(xiào)正你(nǐ)實驗(yàn)中(zhōng)的各(gè)種誤(wù)差。

在Western Blot等實(shí)驗中(zhōng)，你的(dí)最終目的是比較不同樣本中目標蛋白(bái)的表(biǎo)達(dá)量差異。但(dàn)很多(duō)操(cāo)作環節(jié)都會引(yǐn)入(rù)變(biàn)量，導(dǎo)致比較失真，例如(rú)：

細胞裂解程度(dù)不(bù)同 ➜ 上樣蛋(dàn)白(bái)總量不同。

上(shàng)樣操(cāo)作誤(wù)差 ➜ 每個(gè)孔(kǒng)實際加載的(dí)蛋白(bái)量(liáng)不同。

轉(zhuǎn)膜(mó)效率(shuài)不均 ➜ 轉移到膜上的蛋(dàn)白量不(bù)同(tóng)。

顯色時(shí)間波(bō)動 ➜ 信號強度不穩定(dìng)。

如何解決(jué)？引入一個(gè)在樣(yàng)本中(zhōng)恒定表達的蛋白質(zhì)作為參(cān)照，這就是(shì)內參蛋(dàn)白。而(ér)檢(jiǎn)測它(tā)的抗(kàng)體，就(jiù)是內(nèi)參抗體。

二，內參(cān)抗體工作原理(lǐ)

1. 前(qián)提(tí)假(jiǎ)設(shè)：內參蛋白（如(rú)GAPDH，β-Actin）在所(suǒ)有(yǒu)樣本，所(suǒ)有(yǒu)處理(lǐ)組中(zhōng)的(dí)表達(dá)量是(shì)基(jī)本恒(héng)定的。

2. 同(tóng)步(bù)檢(jiǎn)測：在檢測你的目標蛋白（一抗孵育）之後或同(tóng)時(shí)，用內(nèi)參抗(kàng)體去(qù)檢測同一(yī)張(zhāng)膜上(shàng)的(dí)內(nèi)參蛋白。

3. 數(shù)據校(xiào)正(zhèng)：

如(rú)果A樣本的目(mù)標(biāo)蛋(dàn)白(bái)信(xìn)號(hào)很強，但(dàn)它(tā)的(dí)內(nèi)參信(xìn)號也(yě)很強(qiáng)，說(shuō)明可(kě)能是(shì)A樣(yàng)本(běn)上(shàng)樣量(liáng)偏(piān)多(duō)。

如(rú)果B樣本的目(mù)標蛋(dàn)白信號(hào)弱，但(dàn)它(tā)的內(nèi)參(cān)信號也(yě)弱，說明可(kě)能(néng)是(shì)B樣本上(shàng)樣量偏少。

最終(zhōng)，你需要用(yòng)【目標蛋(dàn)白(bái)的(dí)信(xìn)號強(qiáng)度】除以【內參(cān)蛋白的信號(hào)強度】，得到一個(gè)相對(duì)表(biǎo)達(dá)量。用(yòng)這(zhè)個(gè)校(xiào)正後(hòu)的值在不同(tóng)樣本間(jiān)進(jìn)行比(bǐ)較(jiào)，才(cái)是準(zhǔn)確(què)可靠的(dí)。

三，常用內(nèi)參抗(kàng)體(tǐ)選(xuǎn)擇（取決於(yú)樣本(běn)和研(yán)究(jiū)係(xì)統）

內參蛋(dàn)白(bái)	常用抗體克(kè)隆(lóng)/類型(xíng)	主要適用範(fàn)圍	注意事項(xiàng)
GAPDH	小(xiǎo)鼠單抗（如(rú)6C5）	zui常(cháng)用，適用(yòng)於大多(duō)數(shù)細(xì)胞和組(zǔ)織(zhī)樣(yàng)本(běn)。	在某些(xiē)代謝研究中或(huò)特殊處理下，其表(biǎo)達可(kě)能發生(shēng)變化。
β-Actin	小鼠單(dān)抗（如8H10D10）	細(xì)胞質蛋白，適(shì)用(yòng)於細胞和組(zǔ)織，非(fēi)常常用。	在肌肉(ròu)細胞或某(mǒu)些癌(ái)細胞中(zhōng)表(biǎo)達(dá)可(kě)能不(bù)穩定(dìng)，分子(zǐ)量（~42 kDa）與(yǔ)常見(jiàn)蛋(dàn)白(bái)接近，需(xū)注意區分。
β-Tubulin	小鼠單(dān)抗(kàng)（如9F3）	細胞(bāo)骨架蛋白，作為細胞質內參。	與(yǔ)β-Actin類(lèi)似(sì)。
Histone H3	兔(tù)多(duō)抗(kàng)或單抗	細(xì)胞(bāo)核蛋(dàn)白內(nèi)參。專門(mén)用(yòng)於(yú)核蛋白(bái)提(tí)取物(wù)或研(yán)究(jiū)核內事件(jiàn)。	不(bù)適(shì)用(yòng)於全細(xì)胞裂解液。
Lamin B1	兔(tù)多(duō)抗或(huò)單(dān)抗(kàng)	核(hé)膜蛋(dàn)白內(nèi)參，比(bǐ)H3更穩定(dìng)，是優質(zhì)的核(hé)內(nèi)參。	不適用於(yú)全細(xì)胞(bāo)裂解液。
Vinculin	小鼠單抗(kàng)（如(rú)7F9）	細(xì)胞骨架蛋白，分子(zǐ)量(liáng)較大(dà)（~124 kDa），可(kě)作(zuò)為高分子(zǐ)量內參。	在某(mǒu)些細(xì)胞粘(nián)附(fù)和(hé)遷移研究中可能(néng)變(biàn)化。
COX IV	兔多抗或(huò)單(dān)抗	綫粒(lì)體內(nèi)參。用(yòng)於(yú)綫粒(lì)體(tǐ)蛋白提取(qǔ)物(wù)。	僅用(yòng)於細胞(bāo)器(qì)級(jí)別研究(jiū)。

四，關鍵注意(yì)事(shì)項(xiàng)

根據樣本和研究目的(dí)選(xuǎn)擇：這(zhè)是最(zuì)重(zhòng)要的(dí)原則。研究核蛋白就用核(hé)內參，研(yán)究(jiū)全細(xì)胞(bāo)蛋白就用(yòng)GAPDH或β-Actin。

分(fēn)子量(liáng)錯開(kāi)：內(nèi)參蛋(dàn)白的(dí)分子(zǐ)量(liáng)應與你的(dí)目(mù)標(biāo)蛋(dàn)白有明(míng)顯(xiǎn)差異，方(fāng)便在同(tóng)一(yī)張(zhāng)膜上(shàng)同(tóng)時或先後檢測。

驗證表達穩定(dìng)性：在(zài)進(jìn)行(háng)正式(shì)實驗前，先用內(nèi)參抗(kàng)體檢測一下(xià)你的實驗樣本(běn)（特別是(shì)經(jīng)過藥物處(chǔ)理(lǐ)，基因(yīn)敲除(chú)等操(cāo)作(zuò)後），確認所(suǒ)選內參(cān)的(dí)表(biǎo)達確實(shí)穩定(dìng)不變(biàn)。

同(tóng)源物種(zhǒng)反應(yīng)性：確(què)保你(nǐ)購買的(dí)內(nèi)參抗體能識別你實(shí)驗樣本(běn)的物種(zhǒng)（如人(rén)，小(xiǎo)鼠，大(dà)鼠）。

一句話總結，

內參(cān)抗體(tǐ)是實驗的“糾錯(cuò)官(guān)"，通過檢測(cè)恒定(dìng)表(biǎo)達(dá)的內參(cān)蛋(dàn)白，來(lái)校正上(shàng)樣量(liáng)和其他(tā)技(jì)術誤差，確保你觀察(chá)到的目標(biāo)蛋白差(chà)異(yì)是真實(shí)的生(shēng)物學(xué)變化，而非(fēi)操作失(shī)誤(wù)。沒有它(tā)，Western Blot的定(dìng)量比較(jiào)就(jiù)失(shī)去了(liǎo)根基。

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