康(kāng)寧(níng)基質膠(jiāo)說明書(shū) 指出，該(gāi)產品(pǐn)是一種從(cóng) Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠(shǔ)肉(ròu)瘤(liú)中提取的可(kě)溶性基(jī)底(dǐ)膜提取物。其主(zhǔ)要成(chéng)分包括：

   層粘(nián)連蛋白（Laminin）： 基質(zhì)膠(jiāo)的核(hé)心(xīn)成(chéng)分，約(yuē)占 60%，是細(xì)胞貼附(fù)和(hé)分(fēn)化的(dí)關鍵信(xìn)號(hào)分子。

   IV 型(xíng)膠原(yuán)蛋白： 提(tí)供結構支(zhī)架，約(yuē)占(zhān) 30%。

   巢(cháo)蛋白： 一(yī)種硫酸(suān)肝(gān)素蛋白聚糖，有助於(yú)生(shēng)長因子(zǐ)的結(jié)合(hé)與信(xìn)號(hào)傳(chuán)遞(dì)。

   生(shēng)長因(yīn)子： 如 TGF-β，FGF，EGF 等（注(zhù)：康(kāng)寧(níng)亦提供(gōng)生長因(yīn)子減少型基質膠，適用於對背景(jǐng)生長(cháng)因子敏感的實驗(yàn)）。

這(zhè)種復(fù)雜(zá)的(dí)成(chéng)分(fēn)組(zǔ)合使(shǐ)得康寧(níng)基質(zhì)膠(jiāo)在室(shì)溫下(xià)呈(chéng)液態(tài)，而在 37°C 生理溫(wēn)度下(xià)能迅速(sù)聚(jù)合形成(chéng)具有生物活性(xìng)的三(sān)維水(shuǐ)凝膠，從(cóng)而(ér)在體外高度模(mó)擬體內的(dí)細胞外基質(zhì)（ECM）環(huán)境。

二(èr)， 關鍵(jiàn)操(cāo)作步驟與使用規範(fàn)

依據 康(kāng)寧(níng)基(jī)質膠說(shuō)明書 的(dí)嚴格指(zhǐ)引，正(zhèng)確的操作流程(chéng)是實驗成功的基石。由(yóu)於基質(zhì)膠(jiāo)對溫度極其(qí)敏(mǐn)感，全(quán)程需在低溫環(huán)境下進行。

1.  解凍與預處理(lǐ)：

    基(jī)質膠(jiāo)應置於(yú) 4°C 冰箱過夜緩慢解凍，切(qiē)勿使用 37°C 水浴(yù)或(huò)微波爐快速(sù)解(jiě)凍，否(fǒu)則會導(dǎo)致膠體提前成膠(jiāo)，產生不(bù)可(kě)逆的(dí)絮(xù)狀(zhuàng)沉澱，破壞(huài)其均(jūn)一(yī)性(xìng)。解凍過程中(zhōng)應(yīng)每 10 分(fēn)鐘(zhōng)輕(qīng)輕顛倒混(hùn)匀，確保濃度一致。

2.  工作液(yè)製(zhì)備與鋪(pū)板(bǎn)：

    所(suǒ)有移液吸頭(tóu)，試管及培(péi)養板均(jūn)需(xū)預冷(lěng)。操(cāo)作應在(zài)冰上(shàng)或(huò) 4°C 冷庫(kù)中進行。將細胞(bāo)懸液與基質膠按(àn)所(suǒ)需比(bǐ)例混(hùn)合（通(tōng)常為 1:1 至(zhì) 1:3 體(tǐ)積比(bǐ)），迅(xùn)速(sù)滴加至預冷(lěng)的培(péi)養(yǎng)板中。此(cǐ)時動(dòng)作需(xū)迅速(sù)，防止液體(tǐ)在移(yí)液(yè)過程中變稠(chóu)。

3.  聚(jù)合(hé)與培(péi)養：

    鋪(pū)板(bǎn)完成後，應立即將培(péi)養(yǎng)板轉移至 37°C CO2 培養箱中(zhōng)，靜置(zhì)孵育 15-30 分(fēn)鐘(zhōng)。待基質膠由澄(chéng)清透(tòu)明變(biàn)為不(bù)透(tòu)明的(dí)乳白色固態(tài)凝膠後(hòu)，方可(kě)緩慢(màn)加入預溫的完(wán)全培養(yǎng)基。加液(yè)時應(yīng)沿孔壁(bì)緩慢(màn)滴加，避免(miǎn)衝(chōng)散(sàn)已形(xíng)成(chéng)的凝膠結構。

三(sān)， 技術(shù)參(cān)數與(yǔ)規(guī)格(gé)選(xuǎn)擇(zé)

在(zài)查閱(yuè) 康寧(níng)基質(zhì)膠說明(míng)書 時，用戶(hù)需根據實驗(yàn)目的選(xuǎn)擇不(bù)同(tóng)規(guī)格的(dí)產品，主要依據蛋(dàn)白濃度和生長因子(zǐ)含量(liáng)：

   高濃度型（HC）： 蛋白(bái)濃(nóng)度較(jiào)高(gāo)（通(tōng)常 > 9 mg/mL），成膠(jiāo)後(hòu)硬(yìng)度(dù)大，適(shì)用(yòng)於(yú)需要較(jiào)強(qiáng)機(jī)械(xiè)支持的實驗(yàn)，如體(tǐ)內(nèi)成瘤(liú)，器(qì)官(guān)型培(péi)養。

   標準(zhǔn)濃(nóng)度(dù)型： 蛋白濃(nóng)度(dù)適中(zhōng)（約(yuē) 8-9 mg/mL），適(shì)用(yòng)於(yú)常規(guī) 3D 培(péi)養(yǎng)和血(xiě)管生成(chéng)實(shí)驗(yàn)。

   生(shēng)長(cháng)因子(zǐ)減少型（GFR）： 經過(guò)特殊(shū)工(gōng)藝(yì)處(chǔ)理(lǐ)，去除了大部分內(nèi)源(yuán)性生長(cháng)因子(zǐ)，適(shì)用於研(yán)究特定(dìng)外(wài)源性(xìng)生(shēng)長(cháng)因子(zǐ)對細胞(bāo)分化(huà)的影(yǐng)響(xiǎng)，或(huò)用(yòng)於幹細(xì)胞定(dìng)向(xiàng)分(fēn)化(huà)研(yán)究(jiū)，以(yǐ)降(jiàng)低(dī)背(bèi)景(jǐng)幹(gān)擾(rǎo)。

此外，說明書(shū)中強(qiáng)調的(dí)批間一(yī)致性測試(shì)數(shù)據（如 Laminin 含量(liáng)，內毒素水平）是評估(gū)試劑質(zhì)量(liáng)的重要(yào)指(zhǐ)標(biāo)，康(kāng)寧嚴格的質(zhì)控體係(xì)確保了不同批號(hào)間實驗(yàn)數(shù)據的可(kě)重(zhòng)復性。

四(sì)， 廣泛應(yīng)用(yòng)與常(cháng)見問題排(pái)查(chá)

   類器(qì)官與(yǔ)球(qiú)體培養： 維(wéi)持(chí) PSCs（多(duō)能幹(gān)細胞(bāo)）或成(chéng)體幹(gān)細胞(bāo)的自我(wǒ)更新與定(dìng)向分化(huà)。

   血管生成(chéng) assay： 評(píng)估促(cù)血管生成(chéng)因(yīn)子(zǐ)的活性。

   腫(zhǒng)瘤(liú)侵(qīn)襲模(mó)型： 模擬(nǐ)腫(zhǒng)瘤細(xì)胞在基質中(zhōng)的遷(qiān)移與侵襲(xí)行為(wéi)。

在使(shǐ)用過(guò)程中(zhōng)，若發(fā)現凝(níng)膠(jiāo)不(bù)均匀或細(xì)胞狀(zhuàng)態不佳(jiā)，通(tōng)常是由於(yú)操(cāo)作(zuò)溫(wēn)度過高導致(zhì)局(jú)部(bù)成膠所致。此(cǐ)時，務(wù)必(bì)檢查所有接(jiē)觸耗材(cái)是否(fǒu)預(yù)冷，並確(què)保操作(zuò)全程在(zài)冰(bīng)上(shàng)完(wán)成(chéng)。同(tóng)時，需注意(yì)基質(zhì)膠不支(zhī)持反復凍融，建議(yì)分(fēn)裝後(hòu)避光保(bǎo)存於 -20°C。

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