原理(lǐ)

Trizol 試(shì)劑(jì)是一個包含酚(fēn)，異硫(liú)氰(qíng)酸胍和 SDS 的單相(xiāng)酸(suān)性溶液，其在裂解(jiě)細(xì)胞的(dí)同時抑(yì)製(zhì) RNase 的(dí)活(huó)性，隨後加入(rù)氯仿(fǎng)，酚(fēn)會大量的溶(róng)解(jiě)在氯(lǜ)仿(fǎng)中(zhōng)
。由(yóu)於(yú) DNA 和 RNA 在(zài)酸(suān)性酚(fēn)中的溶(róng)解(jiě)性(xìng)不(bù)同，造成 DNA 分(fēn)布在下層的(dí)氯仿酚溶液中，RNA 則分(fēn)布在上層的(dí)水(shuǐ)相中，最後(hòu)用(yòng)異丙醇(chún)沉澱水(shuǐ)相(xiāng)中的 RNA，並用 70% 乙(yǐ)醇(chún)洗滌(dí)沉(chén)澱，這樣就可以(yǐ)得到(dào)比(bǐ)較純淨的(dí)總 RNA
。

材(cái)料與(yǔ)儀(yí)器

動物組(zǔ)織，液氮(dàn)，Trizol 試(shì)劑；

步驟

1， 先在研缽中(zhōng)加入(rù)液氮，再(zài)將組(zǔ)織剪成(chéng)小塊在液氮(dàn)中磨(mó)成(chéng)粉末，用(yòng)液(yè)氮(dàn)預冷的(dí)藥(yào)匙取 50-100 mg 組織粉(fěn)末(mò)加入已(yǐ)盛有(yǒu) 1 ml 的 Trizol 液的(dí) EP 管(guǎn)中(zhōng)（注(zhù)意組織粉末(mò)總體積不(bù)能超過(guò)所用(yòng) Trizol 體積的 10%），充(chōng)分混合均(jūn)匀(yún)
。

2，室溫放(fàng)置 5 min，然後(hòu)加入 200 μl 的(dí)氯仿(fǎng)，蓋(gài)緊(jǐn) EP 管(guǎn)並劇(jù)烈(liè)搖(yáo)蕩 15 秒(miǎo)鐘(zhōng)
。

3，12, 000 rpm 離心(xīn) 10 min，取上層水相(xiāng)於一新的 EP 管中（千萬不要將中間的(dí)沉澱層(céng)和(hé)下層液混(hùn)入，否則重新離心分離），加入 500 ul 異(yì)丙(bǐng)醇(chún)，溫和(hé)顛倒混(hùn)匀(yún)
。室溫(wēn)放(fàng)置 10 min，12, 000 rpm 離心 10 min
。

4，小心(xīn)地(dì)棄去上清液，加(jiā)入 1 ml 的 75% 乙醇(chún)，渦旋混(hùn)匀，4℃ 下(xià) 12, 000 rpm 離心 5 min
。重復(fù)操作(zuò)一次
。

5，棄去上清液（盡量(liáng)將(jiāng)殘(cán)餘液體(tǐ)除去），室溫或真(zhēn)空幹燥 5-10 min（注(zhù)意不(bù)要幹(gān)燥(zào)過(guò)分，否(fǒu)則(zé)會(huì)降低 RNA 的溶(róng)解度(dù)）
。用 30 ul DEPC 處理過的水將(jiāng) RNA 溶(róng)解(jiě)，必要時(shí)可(kě) 55℃-60℃ 水(shuǐ)浴(yù) 10 min
。RNA 可(kě)進(jìn)行(háng) mRNA 分離，或(huò)貯存(cún)於(yú) 70% 乙醇(chún)並(bìng)保(bǎo)存(cún)於 -70℃
。

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