Zymo質(zhì)粒中提(tí)/大(dà)提(tí)試劑盒(hé)是常(cháng)用的(dí)實驗(yàn)試(shì)劑(jì)盒(hé)，用(yòng)於(yú)從(cóng)細菌中提(tí)取和純化質(zhì)粒(lì)DNA。在分(fēn)子生物(wù)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，質粒(lì)是(shì)一(yī)種(zhǒng)重要(yào)的(dí)工具，可以用於(yú)構(gòu)建重(zhòng)組DNA，克(kè)隆基(jī)因等(děng)。原理(lǐ)基(jī)於鹼裂(liè)解(jiě)和酒精(jīng)沉澱。首(shǒu)先，實驗者(zhě)需要(yào)將含(hán)有質(zhì)粒(lì)DNA的細(xì)菌培(péi)養物(wù)進(jìn)行離心，將菌體沉澱下(xià)來。然後，用鹼(jiǎn)溶(róng)液來裂(liè)解細菌(jūn)細胞，釋(shì)放(fàng)出質(zhì)粒(lì)DNA。接下來，通過添加中和(hé)緩衝液，使鹼(jiǎn)性溶液變為(wéi)中性(xìng)。此時，質粒(lì)DNA會以(yǐ)高分子(zǐ)量的(dí)形(xíng)式存在，可以通(tōng)過(guò)離心將(jiāng)其沉澱(diàn)下來。將質(zhì)粒(lì)DNA用(yòng)乙醇(chún)洗滌去除雜質，在(zài)高溫下幹燥，即可得到純(chún)淨的(dí)質粒(lì)DNA。
 

　　這個試(shì)劑盒具(jù)有(yǒu)幾個優點。首(shǒu)先，操作(zuò)簡單，適用(yòng)於(yú)初學(xué)者和有經(jīng)驗的(dí)實(shí)驗(yàn)者。其次，提取的質(zhì)粒(lì)DNA質量高，不含有(yǒu)汙染物質。此外，該試(shì)劑(jì)盒的(dí)試劑(jì)含量(liáng)和比例經過調控，可(kě)以(yǐ)提(tí)供重(zhòng)復性(xìng)好的結果。提供了(liǎo)高通(tōng)量(liáng)和(hé)低(dī)通量(liáng)兩(liǎng)種規格，適(shì)用(yòng)於(yú)不同實驗需(xū)求。除了(liǎo)提取質(zhì)粒DNA，Zymo質(zhì)粒(lì)中提/大提試(shì)劑(jì)盒還(huán)可以(yǐ)用於(yú)提取環境(jìng)樣品中的質粒(lì)DNA。環境樣(yàng)品通常(cháng)含有(yǒu)豐(fēng)富(fù)的(dí)微生(shēng)物群落(là)，質粒(lì)DNA是其(qí)中的重(zhòng)要(yào)組分。通過(guò)使(shǐ)用這個(gè)試(shì)劑(jì)盒(hé)，可以從環境(jìng)樣(yàng)品中(zhōng)提取(qǔ)質(zhì)粒DNA，進一(yī)步研(yán)究微(wēi)生(shēng)物(wù)群落(là)的功(gōng)能和多樣(yàng)性。

 

　　Zymo質(zhì)粒中(zhōng)提(tí)/大提試(shì)劑盒(hé)的操作使(shǐ)用(yòng)步驟(zhòu)：
 

　　1.將需提(tí)取質粒DNA的樣(yàng)品轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞(通常(cháng)為大(dà)腸杆(gān)菌)，在LB培(péi)養基中培(péi)養(yǎng)至含(hán)有(yǒu)較(jiào)高的質粒DNA濃(nóng)度。
 

　　2.將培養基(jī)中的大(dà)腸(cháng)杆(gān)菌細(xì)胞(bāo)進(jìn)行離心來收(shōu)獲(huò)。
 

　　3.使(shǐ)用試(shì)劑盒(hé)中提供(gōng)的(dí)細(xì)胞(bāo)裂(liè)解(jiě)緩(huǎn)衝液(yè)對(duì)收獲的(dí)細(xì)胞進行(háng)裂解(jiě)，釋(shì)放細(xì)胞(bāo)內的質(zhì)粒DNA。
 

　　4.根(gēn)據所(suǒ)用(yòng)試劑盒(hé)的不同(tóng)，可(kě)以(yǐ)選(xuǎn)擇(zé)中提(tí)或大(dà)提(tí)的方(fāng)法(fǎ)來提(tí)取質粒DNA。將(jiāng)樣(yàng)品與試(shì)劑盒(hé)中的其他試劑(jì)按比(bǐ)例混合(hé)，離(lí)心(xīn)來分離質粒DNA。
 

　　5.使用(yòng)試(shì)劑盒(hé)中(zhōng)提供的洗(xǐ)滌(dí)緩衝(chōng)液(yè)進行(háng)洗滌(dí)步驟(zhòu)，以(yǐ)去除雜質。
 

　　6.可(kě)以使(shǐ)用試(shì)劑盒(hé)中(zhōng)提(tí)供的DNaseI酶處理(lǐ)液進行(háng)DNaseI消(xiāo)化，以去除殘(cán)餘的(dí)基(jī)因(yīn)組(zǔ)DNA。
 

　　7.將(jiāng)質(zhì)粒DNA吸(xī)附(fù)到(dào)柱子上，洗滌(dí)以去除(chú)雜質。
 

　　8.通過加入(rù)洗脫緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)，使質(zhì)粒DNA從柱子上(shàng)洗脫下來。
 

　　9.使(shǐ)用適(shì)當(dāng)的方法(fǎ)(如(rú)凝膠(jiāo)電(diàn)泳，PCR等)檢測(cè)提取(qǔ)的質粒(lì)DNA的純(chún)度(dù)和(hé)濃度。