胺基(jī)活(huó)化(huà)的瓊脂糖可以(yǐ)用(yòng)於(yú)含(hán)羧(suō)基或(huò)含(hán)醛(quán)的分(fēn)子(zǐ)。耦合(hé)化學(xué)是基於碳(tàn)二(èr)亞胺(àn)的(dí)，是(shì)一項成功且(qiě)有據(jù)可查(chá)的技術。

Amine-activated SepFast與(yǔ)含有羧(suō)基的配體(tǐ)形成化學穩定的酰胺(àn)鍵(jiàn)，他有一(yī)個(gè)長(cháng)間隔(gé)區（9個原子(zǐ)）。預(yù)活(huó)化的瓊(qióng)脂糖基質可以用(yòng)於(yú)製造各(gè)種(zhǒng)定製(zhì)的親和(hé)層(céng)析(xī)吸(xī)附劑，適用(yòng)於小(xiǎo)規模(mó)和大規模純(chún)化應用(yòng)。

1. 屬(shǔ)性(xìng)

Amine-activated SepFast 4 High Flow（HF）由(yóu)高(gāo)度交(jiāo)聯的4%珠狀(zhuàng)瓊脂(zhī)糖(táng)製成(chéng)。它具有高(gāo)機械(xiè)剛(gāng)度，可在(zài)降(jiàng)低背壓(yā)的情況下實現高(gāo)流量。

由於瓊脂(zhī)糖具有(yǒu)出(chū)色的(dí)親(qīn)水(shuǐ)性和低非(fēi)特異性結合特性(xìng)，長期(qī)以來一直(zhí)用於色譜分(fēn)離(lí)。這些(xiē)顆粒具有(yǒu)開孔結構，對大蛋(dàn)白質(zhì)分子(zǐ)具有出(chū)色的(dí)傳質性(xìng)能(néng)。

通(tōng)過在末端連接帶有(yǒu)胺基(jī)的(dí)長(cháng)親水鏈來激(jī)活(huó)基(jī)礎基質(zhì)。在碳二亞(yà)胺試劑(jì)存(cún)在下(xià)與含(hán)羧基(jī)配(pèi)體反應，或在(zài)還原(yuán)劑(jì)存(cún)在下與(yǔ)含醛(quán)配體反應(yīng)。Amine-activated SepFast以(yǐ)20%乙醇中的水(shuǐ)懸浮液形(xíng)式提供。

表(biǎo)1  Amine-activated SepFast 的(dí)特性(xìng)

2. 配(pèi)體(tǐ)固定(dìng)化

以下是含羧(suō)基配(pèi)體一般的(dí)偶聯流程。

2.1  將目(mù)標配體(tǐ)溶(róng)解在偶聯(lián)緩衝(chōng)液(yè)中(zhōng)，將pH值調整為4.5。偶聯緩衝液(yè)的(dí)體(tǐ)積可以(yǐ)是固定(dìng)凝(níng)膠體積的一半(bàn)或相(xiāng)同(tóng)。

2.2  在(zài)過(guò)濾裝置(zhì)中(zhōng)用至(zhì)少5 倍(bèi)體積(jī)的(dí)偶(ǒu)聯緩衝液(yè)清(qīng)洗(xǐ)胺活化(huà)凝(níng)膠(jiāo)。

2.3  將洗淨並吸(xī)幹(gān)的(dí)凝膠（來自步驟(zhòu) 2.2）轉移到步(bù)驟2.1 製備(bèi)的(dí)溶(róng)液(yè)中。

2.4  將碳二亞胺(àn)作為幹(gān)粉(fěn)或(huò)預(yù)先溶解的(dí)溶液添(tiān)加到漿(jiāng)液中，最(zuì)終(zhōng)濃度為(wéi)0.1 M。如(rú)果(guǒ)碳二(èr)亞胺預先溶(róng)解在水(shuǐ)中(zhōng)，則(zé)將(jiāng)pH值調整(zhěng)為4.5。

2.5  在室(shì)溫或4-8℃下混合(hé)漿料。

2.6   在第1個(gè)小時內通(tōng)過(guò)添加 0.1  M NaOH調(tiáo)節反(fǎn)應(yīng)pH值(zhí)至4.5。

2.7 將偶(ǒu)聯反應放(fàng)置2-24小(xiǎo)時(shí)。

2.8 用5倍體積的0.1 M 醋(cù)酸(suān)鹽緩(huǎn)衝(chōng)液 + 0.5 M NaCl，pH 4.0洗滌凝膠，然後用5倍體積的0.1 M Tris/HCl + 0.5 M NaCl，pH 8.0洗滌凝膠。重復上(shàng)述(shù)洗滌(dí)2次(cì)以(yǐ)上。

2.9 使用前(qián)用工作/平(píng)衡(héng)緩衝(chōng)液(yè)清(qīng)洗(xǐ)凝(níng)膠。

3. 固定化效(xiào)率的一(yī)般考(kǎo)慮(lǜ)

3.1 pH

偶聯反(fǎn)應在(zài)pH 4.5 - 7.5之(zhī)間(jiān)非常有效地進(jìn)行。但(dàn)是(shì)可以優化偶聯pH以(yǐ)獲(huò)得最佳結(jié)果（例如(rú)，高偶聯產率和高(gāo)配(pèi)體活性）。

在(zài)偶聯(lián)反應的(dí)第1個(gè)小(xiǎo)時內，pH值會(huì)降低(dī)。要(yào)記得通(tōng)過(guò)添(tiān)加(jiā)0.1 M NaOH來(lái)調節(jié)偶聯pH值(zhí)。之(zhī)後pH值(zhí)會趨於(yú)穩定。

3.2 偶聯(lián)方(fāng)案

去離子(zǐ)水可(kě)直接用作偶(ǒu)聯(lián)溶(róng)液。應避免使用含有(yǒu)氨(ān)基，巰(qiú)基或(huò)羧基(jī)的(dí)緩衝溶液(yè)，因(yīn)為它們會與(yǔ)配體偶(ǒu)聯(lián)發生(shēng)競爭(zhēng)。

可以引入(rù)稀(xī)釋(shì)的(dí)某些(xiē)有(yǒu)機(jī)溶劑以提(tí)高配體(tǐ)的溶解(jiě)度。應事先測(cè)試此(cǐ)類溶劑的(dí)適(shì)用性。

3.3 碳二(èr)亞(yà)胺的選擇

應使(shǐ)用水(shuǐ)溶性碳(tàn)二亞胺，例(lì)如1‑乙(yǐ)基‑3‑(3‑二甲基氨基丙(bǐng)基(jī))碳二(èr)亞胺(àn)  (EDC)  或1‑環己基‑3‑(2‑嗎(má)啉代乙基) 碳(tàn)二亞胺(àn)  (CMC)（通常(cháng)合成(chéng)為 metho‑p‑甲(jiǎ)苯磺(huáng)酸(suān)鹽）。EDC是常用(yòng)的碳二(èr)亞(yà)胺試劑。

3.4 碳(tàn)二亞胺的(dí)濃度

添加(jiā)的碳(tàn)二(èr)亞胺(àn)的量應(yīng)以化(huà)學(xué)計(jì)量的方式超(chāo)過(guò)活化(huà)的(dí)胺基。建(jiàn)議以(yǐ)最終反應漿料中(zhōng)的0.1  M作(zuò)為(wéi)起點(diǎn)。

3.5 反(fǎn)應(yīng)時間(jiān)和(hé)溫度

可(kě)以(yǐ)優化(huà)偶聯(lián)過程中(zhōng)配(pèi)體(tǐ)和活(huó)化介質之(zhī)間(jiān)的(dí)接觸時間以保(bǎo)持配體的生物(wù)活性。

典(diǎn)型的反(fǎn)應時間(jiān)是(shì)在室溫(wēn)或(huò)冷藏室(shì)中(zhōng)過(guò)夜(yè)。

3.6 屏(píng)蔽(bì)剩餘(yú)的活(huó)化配(pèi)體(tǐ)

如(rú)果(guǒ)加(jiā)入過(guò)量的配體，則(zé)可能不需要封(fēng)閉殘(cán)留的(dí)活化基(jī)團。

未與配(pèi)體反(fǎn)應的(dí)活化基團應(yīng)在(zài)碳二亞(yà)胺存在下通過添加含有(yǒu)pH 8 - 9伯胺(àn)的(dí)額外小分子(zǐ)（例如1 M乙醇(chún)胺）來封(fēng)端。

3.7 最終介質的洗(xǐ)滌(dí)

偶(ǒu)聯(lián)反應後需要(yào)將(jiāng)未(wèi)連(lián)接(jiē)或弱連(lián)接的(dí)配體(tǐ)WAN全(quán)洗(xǐ)掉(diào)。采用高(gāo)pH值和(hé)低(dī)pH值(zhí)交(jiāo)替的洗滌(dí)方法(fǎ)可以確(què)保有(yǒu)效(xiào)去除(chú)不需要的物質。

4. 固定化親和介質的使(shǐ)用

配體偶聯介(jiè)質(zhì)可用於使(shǐ)用(yòng)間歇攪(jiǎo)拌(bàn)罐(guàn)模式(shì)或(huò)填(tián)充(chōng)柱(zhù)模式的純(chún)化。處理這(zhè)種(zhǒng)材料遵(zūn)循與(yǔ)處理其(qí)他基於瓊脂(zhī)糖基質(zhì)相(xiāng)同(tóng)的(dí)原(yuán)則。

5. 儲存

Amine-activated SepFast應(yīng)在8℃下儲存。偶聯的濕介(jiè)質(zhì)應(yīng)在防(fáng)菌(jūn)劑（例(lì)如(rú)20%乙醇）存(cún)在的情況下(xià)於4-8℃儲存(cún)。切(qiē)勿凍(dòng)存(cún)耦合介質(zhì)。

6. 更(gēng)多信息

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7. 訂購信息(xī)