用(yòng)於製備(bèi)磁(cí)性(xìng)色譜(pǔ)吸(xī)附劑(jì)。它(tā)與含(hán)有(yǒu)羧基的配(pèi)體形(xíng)成(chéng)化學穩(wěn)定(dìng)的酰(xiān)胺鍵，他有一(yī)個(gè)長間(jiān)隔區(qū)（9個原子(zǐ)）。與(yǔ)目標分子結(jié)合後(hòu)，磁(cí)性樹脂可(kě)以很容(róng)易地在磁(cí)鐵的(dí)幫(bāng)助(zhù)下從生(shēng)物原料中分(fēn)離(lí)出來(lái)。

胺(àn)基活化的(dí)瓊脂(zhī)糖(táng)可用於固定(dìng)含羧(suō)基或(huò)含醛的分(fēn)子。耦合化學(xué)是基(jī)於(yú)碳二(èr)亞(yà)胺(àn)或(huò)還原胺化的，是(shì)一(yī)項(xiàng)成(chéng)功且有據可查(chá)的(dí)技(jì)術(shù)。

1. 屬(shǔ)性

Amine-activated SepFast MAG 4 HF由(yóu)高度交聯的4%磁(cí)性瓊脂糖製成(chéng)。它(tā)可(kě)以在嚴(yán)苛的條(tiáo)件(jiàn)下操(cāo)作(zuò)使用(yòng)，因(yīn)此(cǐ)可以應用(yòng)於低(dī)pH值和某些高濃(nóng)度(dù)有(yǒu)機(jī)溶劑。

由(yóu)於瓊(qióng)脂(zhī)糖(táng)具(jù)有出(chū)色的親水性(xìng)和(hé)低非(fēi)特異性結合特(tè)性(xìng)，長(cháng)期以來一直用(yòng)於(yú)色譜分(fēn)離(lí)。這(zhè)些顆粒具(jù)有開孔結(jié)構，對大(dà)蛋(dàn)白(bái)質分(fēn)子(zǐ)具有出色的傳質性(xìng)能(néng)。

通(tōng)過(guò)在(zài)末(mò)端連接(jiē)帶(dài)有(yǒu)胺基的長親水(shuǐ)鏈來激(jī)活基(jī)礎基(jī)質(zhì)。在(zài)碳二亞胺(àn)試(shì)劑(jì)存在(zài)下(xià)與含(hán)羧基(jī)配體反應，或(huò)在還原(yuán)劑(jì)存(cún)在(zài)下(xià)與含醛(quán)配體(tǐ)反應。以(yǐ)20%乙醇中(zhōng)的水(shuǐ)懸浮(fú)液(yè)形(xíng)式(shì)提(tí)供。

表(biǎo)1  Amine-activated SepFast MAG的特(tè)性

*可根據要求提供其他粒(lì)徑

2. 配(pèi)體(tǐ)固(gù)定化

以(yǐ)下是(shì)含羧(suō)基(jī)配(pèi)體一(yī)般(bān)的偶聯流程。

2.1  將目(mù)標(biāo)配(pèi)體溶解在偶(ǒu)聯(lián)緩衝(chōng)液(yè)中，將(jiāng)pH值(zhí)調整為(wéi)4.5。偶(ǒu)聯(lián)緩衝(chōng)液(yè)的體積可(kě)以(yǐ)是固(gù)定(dìng)凝(níng)膠(jiāo)體積的(dí)一半或相同。

2.2  在過濾(lǜ)裝(zhuāng)置中用(yòng)至(zhì)少5 倍體積(jī)的(dí)偶(ǒu)聯緩衝(chōng)液清洗(xǐ)胺(àn)活化凝膠。

2.3  將(jiāng)洗淨並吸幹的凝膠(jiāo)（來(lái)自步驟(zhòu) 2.2）轉(zhuǎn)移到步(bù)驟2.1 製備的溶液中。

2.4  將碳(tàn)二(èr)亞胺作為幹粉(fěn)或(huò)預先溶解的(dí)溶液添加(jiā)到(dào)漿(jiāng)液(yè)中，最終(zhōng)濃度為(wéi)0.1 M。如果(guǒ)碳二亞胺(àn)預(yù)先溶解在(zài)水中，則(zé)將pH值(zhí)調整為4.5。

2.5  在室(shì)溫或4-8℃下(xià)混(hùn)合(hé)漿料。

2.6   在第1個(gè)小時內通(tōng)過添加 0.1  M NaOH調(tiáo)節反應(yīng)pH值至(zhì)4.5。

2.7 將偶(ǒu)聯(lián)反應放(fàng)置(zhì)2-24小(xiǎo)時。

2.8 用5倍體積(jī)的0.1 M 醋(cù)酸鹽緩(huǎn)衝(chōng)液 + 0.5 M NaCl，pH 4.0洗滌凝膠(jiāo)，然(rán)後用(yòng)5倍(bèi)體積(jī)的0.1 M Tris/HCl + 0.5 M NaCl，pH 8.0洗滌(dí)凝膠(jiāo)。重復(fù)上(shàng)述洗滌2次以上。

2.9 使(shǐ)用前用(yòng)工作(zuò)/平衡(héng)緩衝(chōng)液(yè)清洗凝(níng)膠。

3. 固定化(huà)效(xiào)率(shuài)的一般考慮

3.1 pH

偶(ǒu)聯反(fǎn)應在pH 4.5 - 7.5之間非常(cháng)有效地進(jìn)行(háng)。但是可以(yǐ)優(yōu)化偶(ǒu)聯pH以獲(huò)得(dé)最(zuì)佳結果（例如，高偶(ǒu)聯(lián)產率和(hé)高配體活性(xìng)）。

在(zài)偶聯反應的第1個小時(shí)內，pH值會降低(dī)。要記(jì)得通(tōng)過(guò)添加(jiā)0.1 M NaOH來(lái)調節(jié)偶聯(lián)pH值。之後pH值會(huì)趨於穩定。

3.2 偶聯(lián)方(fāng)案

去(qù)離子水(shuǐ)可(kě)直接用作(zuò)偶聯溶液(yè)。應避(bì)免(miǎn)使(shǐ)用(yòng)含(hán)有氨(ān)基(jī)
，巰(qiú)基或(huò)羧基(jī)的(dí)緩衝溶(róng)液(yè)，因(yīn)為(wéi)它(tā)們會與配體(tǐ)偶(ǒu)聯發生競爭。

可(kě)以引入稀(xī)釋(shì)的(dí)某些有(yǒu)機溶劑以提高配體的溶(róng)解度。應事(shì)先測試(shì)此類(lèi)溶劑的(dí)適用(yòng)性。

3.3 碳(tàn)二(èr)亞胺的(dí)選擇

應使用水溶性碳二亞胺，例如1‑乙基(jī)‑3‑(3‑二甲(jiǎ)基(jī)氨基丙(bǐng)基)碳二(èr)亞(yà)胺  (EDC)  或(huò)1‑環己(jǐ)基(jī)‑3‑(2‑嗎啉代乙(yǐ)基) 碳(tàn)二亞(yà)胺  (CMC)（通常合(hé)成為 metho‑p‑甲(jiǎ)苯磺(huáng)酸鹽）。EDC是(shì)常用的碳二(èr)亞胺試劑。

3.4 碳二亞胺的(dí)濃度

添(tiān)加(jiā)的(dí)碳二(èr)亞(yà)胺的(dí)量應(yīng)以化學(xué)計量(liáng)的(dí)方(fāng)式(shì)超(chāo)過(guò)活(huó)化的胺基(jī)。建議以最(zuì)終反應漿(jiāng)料中的0.1  M作(zuò)為(wéi)起點(diǎn)。

3.5 反應時(shí)間和(hé)溫(wēn)度(dù)

可(kě)以優(yōu)化(huà)偶(ǒu)聯過(guò)程中(zhōng)配體(tǐ)和活化(huà)介(jiè)質之間的接觸(chù)時(shí)間以(yǐ)保持配體(tǐ)的生物活性。

典型(xíng)的(dí)反(fǎn)應時間是在室溫(wēn)或(huò)冷藏室中(zhōng)過夜。

3.6 屏蔽(bì)剩餘的活化(huà)配(pèi)體(tǐ)

如(rú)果加入過(guò)量的(dí)配體，則可能不需要(yào)封閉(bì)殘留的活(huó)化基團。

未(wèi)與(yǔ)配(pèi)體(tǐ)反(fǎn)應(yīng)的活化基團應(yīng)在碳二亞(yà)胺存(cún)在(zài)下(xià)通過(guò)添加(jiā)含有pH 8 - 9伯胺的(dí)額外(wài)小分子(zǐ)（例如1 M乙醇胺）來(lái)封端。

3.7 最(zuì)終介質(zhì)的洗(xǐ)滌

偶(ǒu)聯(lián)反應(yīng)後需要將未(wèi)連(lián)接(jiē)或(huò)弱連接的配體WAN全洗(xǐ)掉。采用(yòng)高(gāo)pH值(zhí)和低pH值交(jiāo)替的洗滌方法可(kě)以(yǐ)確保有效去除(chú)不需要的物質(zhì)。

4. 固(gù)定(dìng)化親和介質的使(shǐ)用(yòng)

配(pèi)體偶聯(lián)介(jiè)質可用(yòng)於(yú)使(shǐ)用(yòng)間(jiān)歇攪(jiǎo)拌(bàn)罐模式(shì)或(huò)填(tián)充(chōng)柱(zhù)模式的純(chún)化(huà)。處理這種材料遵(zūn)循與處(chǔ)理其他基於瓊(qióng)脂糖基(jī)質相(xiāng)同的(dí)原則。

5. 儲(chǔ)存

應在8℃下(xià)儲(chǔ)存。偶聯(lián)的濕(shī)介(jiè)質應在防菌劑（例(lì)如(rú)20%乙(yǐ)醇(chún)）存在的情(qíng)況下於4-8℃儲存。切(qiē)勿凍存耦合介質(zhì)。

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