是一種(zhǒng)磁(cí)性樹脂(zhī)，用於製備定(dìng)製(zhì)的磁性親和層析(xī)介質。在磁鐵的幫助下，可以很容易地(dì)控製(zhì)和分離生物(wù)原(yuán)料中的(dí)磁性(xìng)顆(kē)粒。將(jiāng)生物特(tè)異性(xìng)配(pèi)體與醛(quán)活化(huà)瓊脂(zhī)糖偶(ǒu)聯是一項(xiàng)成功(gōng)且(qiě)有(yǒu)據(jù)可查的(dí)技術(shù)。

通(tōng)過還原(yuán)胺化反(fǎn)應(yīng)與(yǔ)含有伯胺(àn)基團的配(pèi)體形成化(huà)學(xué)穩定(dìng)的仲(zhòng)胺鍵(jiàn)。這(zhè)種(zhǒng)預活化(huà)的(dí)瓊(qióng)脂糖基(jī)質可(kě)以很容(róng)易(yì)地用於製(zhì)作(zuò)各(gè)種定製(zhì)的(dí)親和層(céng)析(xī)介(jiè)質，適用於(yú)小規(guī)模和(hé)大(dà)規模純(chún)化應用。

1. 屬性(xìng)

有2種不同(tóng)的(dí)基礎基質(zhì)可(kě)供(gōng)選(xuǎn)擇，適(shì)合各(gè)種待偶聯或純化(huà)的分(fēn)子。

• Aldehyde-activated SepFast MAG 4 HF由高度(dù)交聯(lián)的(dí)4%磁(cí)性瓊脂(zhī)糖製成。其大(dà)孔徑適(shì)用於偶聯或純化(huà)大(dà)分子。它具有高(gāo)機械(xiè)剛(gāng)度(dù)，可在更(gēng)嚴苛(kē)的條件下(xià)操(cāo)作使用。

• Aldehyde-activated SepFast MAG 6 HF由(yóu)高(gāo)度交聯(lián)的(dí)6%磁性(xìng)瓊脂糖(táng)製(zhì)成。其(qí)適(shì)中(zhōng)的孔(kǒng)徑適用於偶聯較(jiào)小(xiǎo)的分子。它(tā)也具(jù)有(yǒu)高(gāo)機械剛度，可在更嚴苛的條件(jiàn)下(xià)操(cāo)作(zuò)使(shǐ)用(yòng)。

由(yóu)於(yú)瓊脂(zhī)糖具有出(chū)色(sè)的親水性(xìng)和低非特(tè)異性結合(hé)特(tè)性(xìng)，長期以來(lái)一直用(yòng)於(yú)色譜分離。這些(xiē)顆(kē)粒具有(yǒu)開孔(kǒng)結(jié)構，對(duì)各種分子(zǐ)具有出色(sè)的傳質(zhì)性能(néng)。基礎(chǔ)基質通過(guò)氧化被(bèi)激(jī)活以產生(shēng)醛(quán)基(jī)。它(tā)直(zhí)接(jiē)與分(fēn)子(zǐ)中(zhōng)的伯胺基反(fǎn)應，在還原(yuán)劑存在的情(qíng)況(kuàng)下(xià)被固定化(huà)。

Aldehyde-activated SepFast MAG以(yǐ)20%乙(yǐ)醇(chún)中的水(shuǐ)懸浮(fú)液形式提供。

表(biǎo)1  Aldehyde-activated SepFast MAG的(dí)特(tè)性

2. 配(pèi)體(tǐ)固定化

以下(xià)是(shì)一(yī)般的(dí)配體偶(ǒu)聯(lián)程(chéng)序。

2.1  將目(mù)標(biāo)配(pèi)體溶(róng)解(jiě)在(zài)偶聯緩衝(chōng)液中(zhōng)，0.1 M磷(lín)酸鈉(nà)，pH 7.0。一(yī)般(bān)對於蛋(dàn)白質配(pèi)體，凝(níng)膠(jiāo)的製備(bèi)濃(nóng)度為5 - 20 mg/ml。對於小(xiǎo)配(pèi)體，凝膠的製備(bèi)濃(nóng)度(dù)為10 - 100  µmol/ml。偶聯緩衝(chōng)液(yè)的體(tǐ)積可以(yǐ)是固(gù)定凝膠(jiāo)體(tǐ)積的(dí)一半(bàn)或相同(tóng)。

2.2  在過濾(lǜ)裝(zhuāng)置中用至(zhì)少5 倍體(tǐ)積的(dí)偶聯(lián)緩衝(chōng)液(yè)清(qīng)洗醛活化凝(níng)膠(jiāo)。

2.3  將洗(xǐ)淨(jìng)並吸幹的(dí)凝(níng)膠（來自(zì)步驟(zhòu)  2.2）轉(zhuǎn)移(yí)到步驟(zhòu)  2.1 製(zhì)備(bèi)的溶液中。

如(rú)果(guǒ)發生變(biàn)化，請調(tiáo)整 pH 值(zhí)。

2.4  將(jiāng)漿液在通(tōng)風(fēng)良(liáng)好(hǎo)的通(tōng)風(fēng)櫥中在(zài)室溫下混(hùn)合(hé) 2‑4 小時(shí)。

2.5  將(jiāng)氰(qíng)基硼QING化鈉（0.5 g/100 ml  活(huó)性(xìng)凝(níng)膠）加入(rù)漿(jiāng)液中(zhōng)，過(guò)夜(yè)。注(zhù)意：氰(qíng)基硼(péng)QING化鈉(nà)有毒(dú)，應格(gé)外(wài)小(xiǎo)心(xīn)處理。

2.6  用至少(shǎo) 5 倍凝膠(jiāo)體(tǐ)積(jī)的偶(ǒu)聯緩(huǎn)衝液(yè)清(qīng)洗(xǐ)凝(níng)膠。

2.7 在氰基(jī)硼QING化鈉存(cún)在(zài)下，將凝膠重(zhòng)新懸浮到(dào)相同(tóng)體積(jī)的封(fēng)閉(bì)溶(róng)液，0.1 M Tris/HCl，pH 8.0或1 M乙(yǐ)醇胺(àn)，pH 8.0中2-3 小時。

2.8 用5倍體積的(dí)0.1 M Tris/HCl + 1 M NaCl，pH 8.0 洗(xǐ)滌(dí)凝(níng)膠(jiāo)，然後用5倍體積的0.1 M醋酸鹽緩衝液 + 1 M NaCl，pH 4.0洗(xǐ)滌(dí)凝膠。

2.9 使用(yòng)前用(yòng)工作/平(píng)衡緩(huǎn)衝(chōng)液清洗(xǐ)凝膠(jiāo)。

3. 固(gù)定(dìng)化(huà)效率的一般考慮

3.1 pH

還(huán)原胺(àn)化可以在(zài)pH 4 - 10之(zhī)間(jiān)非(fēi)常(cháng)有(yǒu)效(xiào)地(dì)進行(háng)。但是可以優(yōu)化偶聯pH以(yǐ)獲得最(zuì)佳結(jié)果（例如(rú)，高偶(ǒu)聯(lián)產率和(hé)高(gāo)配(pèi)體活性）。

在(zài)配(pèi)體(tǐ)溶解(jiě)後要注意(yì)調整(zhěng)偶聯pH 值。

3.2 偶聯(lián)方(fāng)案

應避免(miǎn)使用含有氨(ān)基(jī)的溶液(yè)。

可以引(yǐn)入(rù)稀釋的(dí)某些有(yǒu)機溶劑以提(tí)高配體的溶解度。應事先測試此類溶(róng)劑的(dí)適用性(xìng)。

耦(ǒu)合(hé)溶(róng)液的體積與活化凝膠的(dí)體積保持(chí)一致。建議(yì)使用0.5-1 : 1 v/v的(dí)理想比例。

3.3 鹽(yán)

偶聯緩衝(chōng)液中(zhōng)鹽(yán)的(dí)存在(zài)（例如(rú)0.5  M 或飽和(hé)）可以提高(gāo)固定(dìng)效率(shuài)。

3.4 基(jī)礎(chǔ)基質(zhì)中(zhōng)的活(huó)化基團

對(duì)於(yú)某些(xiē)配體或(huò)應(yīng)用，基礎基質(zhì)中(zhōng)的活化(huà)水平(píng)可(kě)能過高(gāo)，偶聯配(pèi)體(tǐ)的(dí)活性(xìng)可能會(huì)降(jiàng)低。

在(zài)降低(dī)的(dí) pH 值下偶聯可能(néng)會(huì)減(jiǎn)少(shǎo)配體分子的(dí)連(lián)接(jiē)點。它可以提高(gāo)偶(ǒu)聯(lián)配體的(dí)活(huó)性。活化基(jī)團的受控封閉(bì)，例(lì)如在添加(jiā)配體(tǐ)前(qián)幾個(gè)小時(shí)用(yòng) 5‑10  mM 封(fēng)閉(bì)緩衝液孵(fū)育(yù)凝(níng)膠(jiāo)，也可(kě)以(yǐ)減(jiǎn)少過(guò)度(dù)偶(ǒu)聯(lián)問題。

3.5 反應(yīng)時間(jiān)

可(kě)以優化(huà)偶聯過程中配(pèi)體(tǐ)和活化介質(zhì)之(zhī)間的(dí)接觸時(shí)間(jiān)以保(bǎo)持(chí)配體(tǐ)的(dí)生物活性(xìng)。

3.6 還(huán)原(yuán)劑的(dí)選擇

其(qí)他還原劑(jì)如(rú)硼QING化(huà)鈉可用於偶聯反應(yīng)。氰基硼(péng)氫(qīng)化物是一種(zhǒng)較溫(wēn)和的還原(yuán)劑，它(tā)隻還原(yuán)醛基和(hé)伯胺基之間(jiān)形成(chéng)的中(zhōng)間(jiān)席夫鹼，得到穩定的仲(zhòng)胺鍵(jiàn)。硼氫化(huà)物是(shì)一(yī)種(zhǒng)更(gēng)強(qiáng)的還(huán)原劑，可還原席夫鹼和(hé)未偶聯(lián)的醛(quán)基。

3.7 屏(píng)蔽剩(shèng)餘的(dí)活化配體(tǐ)

未(wèi)與配體(tǐ)反(fǎn)應(yīng)的(dí)活化(huà)基團(tuán)應通過添(tiān)加含(hán)有pH 8 - 9伯(bó)胺的額(é)外(wài)小分子（例(lì)如(rú) Tris 或乙醇胺）來封(fēng)端。

3.8 最終(zhōng)介質的(dí)洗滌(dí)

偶(ǒu)聯(lián)反應後需(xū)要(yào)將未(wèi)連接或(huò)弱(ruò)連接(jiē)的(dí)配體WAN全(quán)洗掉。采(cǎi)用高(gāo)pH值和低pH值交(jiāo)替的(dí)洗滌(dí)方(fāng)法可(kě)以(yǐ)確(què)保有(yǒu)效(xiào)去除(chú)不(bù)需(xū)要(yào)的(dí)物質。

4. 固定(dìng)化(huà)親(qīn)和(hé)介質(zhì)的使用(yòng)

配體(tǐ)偶聯(lián)介質可(kě)用於(yú)使用間歇攪(jiǎo)拌(bàn)罐模式或填充柱(zhù)模式(shì)的純化。處理這種材(cái)料遵循與(yǔ)處理其他(tā)基(jī)於瓊脂糖(táng)基(jī)質(zhì)相同(tóng)的原則。

5. 儲存(cún)

應(yīng)在(zài)8℃下儲存。偶(ǒu)聯的濕介(jiè)質應在防菌(jūn)劑（例(lì)如(rú)20%乙(yǐ)醇(chún)）存(cún)在(zài)的(dí)情(qíng)況(kuàng)下(xià)於4-8℃儲存(cún)。切(qiē)勿凍(dòng)存(cún)耦合介(jiè)質。

6. 更多信(xìn)息

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