是(shì)一種磁(cí)性(xìng)瓊脂糖(táng)樹(shù)脂(zhī)，可(kě)以用於(yú)製造(zào)各種磁性親和色譜(pǔ)介質(zhì)，適用(yòng)於小規模和(hé)大規(guī)模純(chún)化應用(yòng)
。

在(zài)製(zhì)備和使(shǐ)用(yòng)定製親和層析(xī)介質方(fāng)麵(miàn)具(jù)有良好的記(jì)錄
。將(jiāng)生物特異(yì)性配體與(yǔ)CNBr 活化(huà)的(dí)瓊脂(zhī)糖偶(ǒu)聯(lián)是(shì)一種(zhǒng)廣泛使用，成(chéng)功且(qiě)有據(jù)可查的(dí)技術
。偶(ǒu)聯反應(yīng)是(shì)自發(fā)的，快速(sù)的並(bìng)且易於(yú)進(jìn)行
。不需要有(yǒu)毒(dú)化(huà)學品或(huò)特殊(shū)設(shè)備(bèi)
。

應用(yòng)領域包(bāo)括(kuò)蛋白質(zhì)，多肽(tài)和(hé)核酸的固定化(huà)
。

1. 屬(shǔ)性

CNBr-activated SepFast MAG 4 HF由高度交(jiāo)聯(lián)的(dí)4%磁性(xìng)瓊脂糖(táng)製成
。它可以在更(gēng)嚴(yán)苛的條(tiáo)件(jiàn)下(xià)操作使用，因(yīn)此(cǐ)可以應用(yòng)低pH值(zhí)和某(mǒu)些高(gāo)濃度有機(jī)溶劑
。

由(yóu)於瓊脂(zhī)糖(táng)具有出色(sè)的親水性(xìng)和(hé)低(dī)非特異性結合(hé)特性，長(cháng)期以(yǐ)來(lái)一直用於色譜分離
。這些(xiē)顆粒具(jù)有開孔結構(gòu)，對(duì)大(dà)蛋白(bái)質(zhì)分子具有出色的傳質性(xìng)能(néng)
。

基礎基質與溴(xiù)化氫(qīng)（CNBr）反(fǎn)應生成活(huó)性基(jī)團，這些活(huó)性基團(tuán)與待(dài)固(gù)定(dìng)分子中(zhōng)的伯胺基團反應(yīng)
。以含有(yǒu)添加(jiā)劑(jì)的凍幹粉形(xíng)式提(tí)供
。

表(biǎo)1  CNBr-activated SepFast MAG 4HF的特(tè)性

2. 配體固(gù)定(dìng)化

2.1 培養(yǎng)基(jī)的預(yù)處理

以含(hán)有(yǒu)添加劑(jì)的凍幹粉(fěn)末(mò)形式(shì)提(tí)供
。這些(xiē)添(tiān)加劑(jì)必(bì)須在偶聯反(fǎn)應前洗掉(diào)
。使用(yòng)足(zú)夠量的低(dī) pH 洗滌液(yè)以保(bǎo)持反(fǎn)應基團的活(huó)性(xìng)
。

2.1.1 稱取所需(xū)的(dí)粉末（1 g幹(gān)粉提供(gōng)約(yuē)3 ‑ 5 ml固(gù)定(dìng)體(tǐ)積(jī)的介質(zhì)）並將其懸浮(fú)在預冷的 1 mM  HCl中(zhōng)（1 g 幹粉(fěn)使(shǐ)用(yòng)10  mL 1 mM  HCl）
。讓(ràng)介質在(zài)低(dī)溫(wēn)下(xià)膨(péng)脹30分鐘(zhōng)
。

2.1.2  在重(zhòng)力流或(huò)受控慢(màn)流(liú)下(xià)，在(zài)過(guò)濾裝(zhuāng)置(zhì)中用冷(lěng)的1  mM  HCl 清(qīng)洗凝(níng)膠
。所需酸的總(zǒng)體積為(wéi)15到(dào) 20 個(gè)凝膠體積
。洗滌後(hòu)的介(jiè)質(zhì)應(yīng)立即(jí)用於(yú)以下(xià)偶聯(lián)步(bù)驟(zhòu)
。

2.2配(pèi)體偶(ǒu)合(hé)

以下(xià)是一般的配體偶聯(lián)程(chéng)序(xù)
。

2.2.1  將目標(biāo)配體(tǐ)溶(róng)解在含有(yǒu)0.5 M NaCl的0.1 M NaHCO₃，pH 8.3的(dí)偶(ǒu)聯(lián)緩衝液(yè)中
。對於蛋白質配體(tǐ)，凝膠濃度為5-20 mg/ml
。對(duì)於小(xiǎo)配體，凝(níng)膠(jiāo)濃(nóng)度為1-10 µmol/ml 
。偶聯(lián)緩(huǎn)衝(chōng)液的體積(jī)應與固定(dìng)凝膠的體(tǐ)積(jī)相同
。

2.2.2  將洗淨並吸(xī)幹的凝膠（來自(zì)步(bù)驟  2.1.2）轉移(yí)到上述(shù)溶液(yè)中
。

2.2.3 漿液在4℃下混合(hé)過夜或(huò)在(zài)室(shì)溫下混合(hé)3-4小時(shí)
。

2.2.4  用至少5 倍凝膠(jiāo)體積的偶(ǒu)聯緩衝液清洗(xǐ)凝(níng)膠(jiāo)
。

2.2.5 將(jiāng)凝膠重新懸浮到(dào)相同(tóng)體積的封閉(bì)溶(róng)液(yè)中，0.1 M Tris/HCl，pH  8.0 或1  M乙(yǐ)醇(chún)胺 pH  8.0，持續2 - 3小時
。

2.8 用(yòng)5倍(bèi)體積(jī)的0.1 M Tris/HCl + 1 M NaCl，pH 8.0洗滌(dí)凝膠(jiāo)，然後用5倍體(tǐ)積的0.1 M醋(cù)酸(suān)鹽緩(huǎn)衝(chōng)液(yè) + 1 M NaCl，pH 4.0洗滌(dí)凝膠
。

2.9 使用前(qián)用工作(zuò)/平(píng)衡緩衝(chōng)液(yè)清洗(xǐ)凝膠
。

3. 固定化(huà)效(xiào)率的一般(bān)考慮

3.1 pH

pH 8.3的緩衝液常(cháng)用(yòng)於蛋白質固定
。然(rán)而(ér)偶聯pH值可(kě)在(zài)6-10之間進(jìn)行(háng)優化以獲(huò)得最佳結果(guǒ)（例(lì)如，高(gāo)偶(ǒu)聯產率(shuài)和高配體活(huó)性(xìng)）
。

注意：配體(tǐ)溶解後要(yào)調節偶聯pH值(zhí)
。

3.2 偶(ǒu)聯方(fāng)案

應避(bì)免使用含有(yǒu)氨基(jī)的(dí)溶液(yè)
。

可以引(yǐn)入稀釋的(dí)某些(xiē)有(yǒu)機(jī)溶(róng)劑(jì)以提(tí)高配體的溶(róng)解(jiě)度
。應事(shì)先(xiān)測試此類溶劑(jì)的適(shì)用(yòng)性
。

3.3 鹽

偶聯緩衝液(yè)加(jiā)入鹽可以(yǐ)提(tí)高固定效率
。

3.4 基(jī)礎(chǔ)基質中的活(huó)化基(jī)團(tuán)

對(duì)於某些配體或(huò)應(yīng)用，基礎基質(zhì)中(zhōng)的活化水平(píng)可(kě)能過(guò)高，偶聯(lián)配(pèi)體的活性可(kě)能(néng)會(huì)降(jiàng)低
。

在降(jiàng)低(dī)的pH值下(xià)偶(ǒu)聯可能會減少(shǎo)配(pèi)體(tǐ)分(fēn)子的連(lián)接點
。它可(kě)以提(tí)高偶(ǒu)聯(lián)配體(tǐ)的(dí)活性
。活(huó)化基團的受控水(shuǐ)解，例如在(zài)添加(jiā)配體前(qián)幾個小時用(yòng)偶聯緩衝(chōng)液(yè)孵(fū)育凝膠，也可(kě)以(yǐ)減少過(guò)度(dù)偶聯問題(tí)
。

3.5 屏蔽剩(shèng)餘的(dí)活化(huà)配體

未與(yǔ)配(pèi)體(tǐ)反(fǎn)應(yīng)的活化基團應(yīng)通(tōng)過添加額外的含有(yǒu)pH 8 - 9伯(bó)胺的小(xiǎo)分子（例(lì)如Tris或乙(yǐ)醇胺(àn)）來(lái)封端
。

3.6 最終介質(zhì)的洗滌

偶聯(lián)反應後(hòu)需要將(jiāng)未連(lián)接或弱(ruò)連接的配體WAN全洗掉
。采用(yòng)高pH值和(hé)低pH值(zhí)交(jiāo)替的洗滌方(fāng)法可(kě)以(yǐ)確(què)保有效(xiào)去除不(bù)需要(yào)的(dí)物(wù)質
。

4. 固定化親(qīn)和介質(zhì)的(dí)使(shǐ)用(yòng)

配體(tǐ)偶聯介質(zhì)可(kě)用於(yú)使用間(jiān)歇攪拌罐模(mó)式或(huò)填充柱(zhù)模(mó)式(shì)的純化(huà)
。處理這種(zhǒng)材(cái)料遵(zūn)循(xún)與處理其(qí)他(tā)瓊脂糖(táng)基質相(xiāng)同的(dí)原則
。

5. 儲存(cún)

凍幹(gān)的應(yīng)在8℃下儲(chǔ)存
。偶(ǒu)聯(lián)的濕介(jiè)質(zhì)應(yīng)在(zài)防菌劑（例如(rú)20%乙醇）存在的情(qíng)況下(xià)於4-8℃儲存(cún)
。切(qiē)勿(wù)凍(dòng)存耦合(hé)介(jiè)質
。

6. 更(gēng)多信(xìn)息

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