polyplus轉(zhuǎn)染(rǎn)試(shì)劑(jì)INTERFERin®在(zài)1nM siRNA下已經提(tí)供了(liǎo)非常高(gāo)的(dí)沉默(mò)效(xiào)率，並(bìng)且可(kě)以用(yòng)於多(duō)種粘(nián)附細胞和(hé)懸(xuán)浮細(xì)胞。使用低(dī)濃度(dù)的siRNA可(kě)以避免脫(tuō)靶效應，其溫(wēn)和的(dí)作(zuò)用(yòng)模式確(què)保了(liǎo)更可靠的(dí)數據和(hé)優異的細胞活力。由於與血清和抗生素的(dí)兼容性(xìng)，INTERFERin®易於使(shǐ)用，也非(fēi)常(cháng)適(shì)合(hé)轉染(rǎn)miRNA和其他(tā)寡(guǎ)核苷(gān)酸(suān)，如(rú)pre-miRNA，mimic miRNA等。

產(chǎn)品優勢(shì)
：

一(yī)，更少的siRNA，更少的(dí)脫靶(bǎ)效應

一(yī)些出版(bǎn)物(wù)表明，轉(zhuǎn)染低濃度的(dí)siRNA可(kě)以(yǐ)避(bì)免(miǎn)脫靶(bǎ)效(xiào)應。事(shì)實(shí)上(shàng)，當(dāng)以高濃(nóng)度轉(zhuǎn)染(rǎn)siRNA時(shí)，可(kě)以(yǐ)觀(guān)察(chá)到這些不想(xiǎng)要的非(fēi)特異

性(xìng)副作(zuò)用。因此(cǐ)，可以通過使用盡(jìn)可能(néng)少(shǎo)的(dí)siRNA來(lái)提高實(shí)驗數(shù)據的(dí)可靠(kào)性(xìng)。這就是(shì)為(wéi)什(shí)麼(mó)INTERFERin®被專(zhuān)門設(shè)計為(wéi)使用(yòng)

低siRNA濃度(dù)提(tí)供高沉默效(xiào)率的原因。

INTERFERin®介(jiè)導的1 nM特異(yì)性siRNA的遞送(sòng)顯(xiǎn)示出對(duì)基因表達(dá)的(dí)選(xuǎn)擇性(xìng)和(hé)高效敲(qiāo)低，而競爭(zhēng)對手（L2K）至(zhì)少需要(yào)

10 nM siRNA才能(néng)達(dá)到50%的(dí)沉默效(xiào)率(shuài)（圖1）。

圖1:INTERFERin®隻(zhī)需要(yào)1 nM siRNA即(jí)可實現有效的基因沉(chén)默。根據製(zhì)造(zào)商的建議，使(shǐ)用(yòng)INTERFERin®或競爭(zhēng)對手(shǒu)L2K用(yòng)抗-Luc siRNA轉染(rǎn)穩(wěn)定表達螢火蟲螢光(guāng)素(sù)酶(méi)的3LL細胞。48小(xiǎo)時後使用常(cháng)規(guī)測定法(fǎ)測量(liáng)螢光素酶的表(biǎo)達。對照siRNA未觀察(chá)到抑(yì)製(zhì)作(zuò)用(yòng)。

令(líng)人(rén)驚訝(yà)的(dí)是，在(zài)10pM的(dí)siRNA下仍(réng)然實現(xiàn)了50%的沉默(mò)（圖2）。

圖2
：即使在極(jí)低的(dí)siRNA濃(nóng)度(dù)下(xià)，INTERFERin®也(yě)是高(gāo)效的。A549-GL3Luc細胞在(zài)血(xiě)清存(cún)在下使(shǐ)用(yòng)INTERFERin®轉染，並降(jiàng)低(dī)抗-Luc siRNA的濃度(dù)。48小(xiǎo)時後使用常(cháng)規(guī)測定法(fǎ)測量螢光素酶的表達。對(duì)照(zhào)siRNA未(wèi)觀察到抑製(zhì)作用。

用(yòng)INTERFERin®轉染(rǎn)靶向(xiàng)內源性層粘(nián)連蛋白A/C的1nM siRNA可將層粘連(lián)蛋(dàn)白基(jī)因(yīn)表(biǎo)達顯著(zhù)降低至幾(jī)乎無(wú)法檢測(cè)的(dí)水平（圖3）。

圖3
：用(yòng)INTERFERin®轉染1nM siRNA導(dǎo)致有效(xiào)和特異的(dí)基因沉(chén)默。使用INTERFERin®用(yòng)1nM層粘(nián)連(lián)蛋(dàn)白(bái)A/C siRNA轉(zhuǎn)染(rǎn)CaSki細胞。48小時(shí)後(hòu)，通過免疫熒光顯微鏡測定(dìng)層粘連(lián)蛋白A/C沉(chén)默效率(shuài)。

二，適用於(yú)miRNA轉染microRNA（miRNA）寡(guǎ)核苷酸(suān)的轉染越來越多地被(bèi)用於(yú)分(fēn)析(xī)特定miRNA對(duì)細胞(bāo)功能的(dí)生物學影響。INTERFERin®是(shì)遞送(sòng)

miRNA，miRNA模擬物或(huò)前miRNA的首(shǒu)xuan試(shì)劑(jì)。

INTERFERin®是最(zuì)新一(yī)代siRNA和miRNA轉染(rǎn)試劑，特(tè)別(bié)設(shè)計用(yòng)於在多(duō)種細胞(bāo)中實現(xiàn)高(gāo)轉(zhuǎn)染效(xiào)率，從而(ér)實現高(gāo)基因沉(chén)默(mò)或刺(cì)激

基因表(biǎo)達(dá)。事(shì)實(shí)上，一些(xiē)miRNA也已(yǐ)知(zhī)通過與感興趣(qù)基因的啟動子結合(hé)來誘導(dǎo)基因(yīn)表達(dá)。例如，INTERFERin®介導(dǎo)的miR-373

的遞送導(dǎo)致E-鈣粘(nián)蛋(dàn)白表達增加(jiā)3倍（圖4）。

圖(tú)4
：用(yòng)INTERFERin®轉染miR-373增強(qiáng)E-鈣(gài)粘蛋白的表(biǎo)達。將PC-3細(xì)胞接種在6孔(kǒng)板中，並用miR-373（25 nM）轉染，每孔使用8µl的(dí)INTERFERin®。轉(zhuǎn)染(rǎn)後72小(xiǎo)時(shí)，通(tōng)過(guò)RT-qPCR測定(dìng)E-鈣(gài)粘蛋白mRNA的(dí)表達(dá)水(shuǐ)平(píng)。用(yòng)HPRT-1基因表達(dá)對(duì)測(cè)定(dìng)進(jìn)行標準(zhǔn)化(huà)。

INTERFERin®的陽離子組(zǔ)分隻(zhī)需要(yào)很(hěn)少的寡核(hé)苷酸(suān)量(liáng)，從而實(shí)現(xiàn)溫(wēn)和(hé)的轉染(rǎn)過程(chéng)。此(cǐ)外，簡單(dān)而穩(wěn)健的協議確(què)保了(liǎo)可重(zhòng)復的(dí)結(jié)果。像(xiàng)miRNA這樣的寡核苷(gān)酸(suān)可以(yǐ)用少量的INTERFERin®轉(zhuǎn)染，從(cóng)而導(dǎo)致強(qiáng)烈的(dí)基因沉默(mò)或刺激基因表(biǎo)達。無論(lùn)使(shǐ)用何種濃度的INTERFERin®，效果都(dū)大致相同，使INTERFERin®成為(wéi)一(yī)種經濟(jì)的試劑。例(lì)如，使(shǐ)用(yòng)不同(tóng)體積的(dí)INTERFERin®的(dí)折疊變化始終在1.5和(hé)1.8之(zhī)間(jiān)（圖(tú)5）。

圖5:INTERFERin®在(zài)非常低(dī)的(dí)量(liáng)下(xià)已經很有效。將(jiāng)PC-3細(xì)胞(bāo)接(jiē)種(zhǒng)在6孔板(bǎn)中(zhōng)，並使用4，6或(huò)8µl/孔的INTERFERin®用(yòng)miR-373（10nM）轉染。轉(zhuǎn)染後(hòu)72小(xiǎo)時，通過(guò)Western印跡分(fēn)析E-鈣粘蛋(dàn)白(bái)的表達。使(shǐ)用β-肌(jī)動蛋白表達(dá)對(duì)測(cè)定進(jìn)行標(biāo)準化。以對(duì)照(zhào)情況為參考來表示(shì)量化。

與高細胞活力相(xiāng)關的(dí)高轉染(rǎn)效(xiào)率(shuài)使(shǐ)INTERFERin®成(chéng)為(wéi)為(wéi)科(kē)學(xué)出版物(wù)生成(chéng)相關數據(jù)的首(shǒu)xuan試劑。事實上，自推出以來(lái)，使(shǐ)用INTERFERin®研(yán)究miRNA和(hé)miRNA相(xiāng)關分子(zǐ)的出(chū)版物數(shù)量(liáng)呈(chéng)指數(shù)級增(zēng)長（圖6）。

圖(tú)6:INTERFERin®參與了(liǎo)越來(lái)越多關於miRNA轉染的(dí)出版(bǎn)物(wù)。

三，超(chāo)過90%的基因沉(chén)默

對(duì)於許多(duō)貼(tiē)壁細(xì)胞(bāo)係(xì)或原(yuán)代細胞，1nM的(dí)siRNA足以(yǐ)獲得(dé)90%以上的基因(yīn)沉默。對於懸浮細(xì)胞(bāo)係(xì)，使(shǐ)用5nM siRNA的(dí)INTERFERin®仍然(rán)可(kě)以達到(dào)80%的沉默（表1）。

表1
：用INTERFERin®成(chéng)功(gōng)轉(zhuǎn)染的(dí)細胞(bāo)係(xì)和獲得(dé)的沉(chén)默(mò)效率。

四(sì)，卓yue的細胞活(huó)力(lì)

在細胞(bāo)活力(lì)方麵(miàn)，INTERFERin®優於(yú)其(qí)他轉染(rǎn)試(shì)劑(jì)。用1nM siRNA轉染48小時(shí)後(hòu)，用(yòng)INTERFERin®轉(zhuǎn)染的(dí)細胞看(kàn)起(qǐ)來是健(jiàn)康的(dí)，而用(yòng)試(shì)劑可(kě)以(yǐ)清(qīng)楚地觀(guān)察(chá)到(dào)毒性（圖7）。

圖7:INTERFERin®對(duì)細胞(bāo)極(jí)為(wéi)溫和(hé)，如(rú)使(shǐ)用INTERFERin®或競(jìng)爭試(shì)劑轉染siRNA 48小時(shí)後細胞形(xíng)態的比較所示。A549-GL3Luc細胞在血(xiě)清存在(zài)下，使用(yòng)INTERFERin®或競(jìng)爭對手(shǒu)S或H，根據製(zhì)造商的方案，用(yòng)1nM螢(yíng)光(guāng)素酶(méi)siRNA轉染(rǎn)。

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