PEI聚(jù)乙(yǐ)烯(xī)亞胺綫性(xìng)轉(zhuǎn)染試劑是(shì)由乙烯亞胺組(zǔ)成(chéng)的聚合物(wù),在(zài)生物醫學(xué)研(yán)究中被(bèi)廣(guǎng)泛(fàn)應(yīng)用於(yú)基因轉(zhuǎn)染實驗中。綫(xiàn)性PEI轉(zhuǎn)染(rǎn)試劑(jì)由(yóu)經過修飾(shì)的綫性(xìng)PEI聚(jù)合(hé)物構(gòu)成(chéng),其(qí)結(jié)構(gòu)使其能夠(gòu)與(yǔ)DNA或RNA形成(chéng)復(fù)合物,並將其(qí)導入細胞內(nèi)。其(qí)工作原理(lǐ)是通(tōng)過靜(jìng)電(diàn)相互(hù)作用(yòng),將負電荷的(dí)DNA或RNA與(yǔ)正(zhèng)電荷(hé)的PEI形(xíng)成復(fù)合物。這種復合(hé)物(wù)帶(dài)正電(diàn)荷(hé),可(kě)以與細(xì)胞負電荷(hé)的(dí)磷(lín)脂雙(shuāng)層(céng)相(xiāng)互作(zuò)用,從(cóng)而實(shí)現DNA或RNA的載(zǎi)體(tǐ)轉(zhuǎn)染(rǎn)。
PEI聚乙(yǐ)烯亞胺綫(xiàn)性轉(zhuǎn)染試(shì)劑具(jù)有許多優(yōu)勢(shì):
1.具有較(jiào)高的轉染(rǎn)效(xiào)率,能(néng)夠在短(duǎn)時(shí)間內(nèi)將DNA或RNA導入到細胞內(nèi)。
2.在體外和體內(nèi)都(dū)能夠有(yǒu)效(xiào)地(dì)轉染(rǎn)多種不同類型(xíng)的細胞。
3.具有較低的細(xì)胞(bāo)毒(dú)性,不會對細胞造成明顯(xiǎn)的(dí)傷(shāng)害。
PEI聚(jù)乙烯亞胺綫(xiàn)性轉染(rǎn)試(shì)劑的使用步驟:
1.根據實驗需要,培養(yǎng)並準(zhǔn)備需要轉(zhuǎn)染(rǎn)的細(xì)胞。
2.將所需(xū)DNA溶(róng)解(jiě)至(zhì)適當濃度(dù),並與PEI按照適當比例(lì)混(hùn)合(hé)。注意(yì)避(bì)免DNA/PEI混(hùn)合物與金屬離子(zǐ)接(jiē)觸,以防止(zhǐ)PEI沉澱。
3.將DNA/PEI混合(hé)物(wù)加入(rù)細(xì)胞(bāo)培(péi)養基中(zhōng),充分混(hùn)合(hé)。
4.將(jiāng)DNA/PEI混(hùn)合物加入已培(péi)養(yǎng)的細胞培養皿(mǐn)中,輕(qīng)輕搖晃培(péi)養皿使(shǐ)混(hùn)合(hé)物(wù)均匀覆(fù)蓋(gài)細(xì)胞(bāo)。
5.將(jiāng)細胞培(péi)養(yǎng)皿(mǐn)放回(huí)恒溫培養箱(xiāng)中,孵育(yù)適當時(shí)間使(shǐ)細胞攝取DNA。
PEI聚(jù)乙(yǐ)烯(xī)亞胺(àn)綫(xiàn)性(xìng)轉染試(shì)劑的(dí)維護保養(yǎng)方法:
1.PEI綫性轉染(rǎn)試(shì)劑(jì)應存放在幹(gān)燥,避(bì)光的環(huán)境中,避免(miǎn)與(yǔ)水分接觸(chù),冷藏(cáng)保存。
2.注意避免PEI與(yǔ)金屬離子(zǐ)的接(jiē)觸(chù),以防止PEI沉澱,影響轉染(rǎn)效果。
3.PEI轉(zhuǎn)染(rǎn)試劑使用後(hòu)應盡快密(mì)封保存(cún),避免(miǎn)受到空氣中的濕(shī)氣和(hé)雜(zá)質汙染(rǎn)。
4.在(zài)轉染操作中(zhōng),應盡量避(bì)免(miǎn)PEI與生物材(cái)料(liào)接觸過(guò)久(jiǔ),以(yǐ)減(jiǎn)少(shǎo)細胞毒(dú)性。
5.轉(zhuǎn)染(rǎn)後的細胞(bāo)應及(jí)時(shí)進行(háng)後續(xù)的實驗操作(zuò),避(bì)免(miǎn)長(cháng)時(shí)間(jiān)存放在(zài)試劑中。