抗(kàng)體如(rú)何(hé)保存合(hé)適？

更新時間：2023-08-28

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抗體保存(cún)好(hǎo)，實驗失敗(bài)少(shǎo)。那(nà)抗體如何保存合(hé)適(shì)？讓我們一起(qǐ)來(lái)看看吧！

一(yī)，保存溫(wēn)度和條(tiáo)件

很(hěn)多(duō)抗(kàng)體(tǐ)的最佳保存條件是分裝(zhuāng)成(chéng)小包(bāo)裝凍(dòng)存於-20°C或(huò)-80°C。分(fēn)裝(zhuāng)能使凍(dòng)融(róng)引(yǐn)起的(dí)損失(shī)減到最小，同(tóng)時(shí)可避(bì)免多(duō)次在(zài)一(yī)個管(guǎn)內(nèi)取(qǔ)樣(yàng)而(ér)由槍頭引入(rù)的汙(wū)染。分(fēn)裝凍存(cún)的抗(kàng)體，融(róng)解一次(cì)後(hòu)剩(shèng)餘抗體(tǐ)應(yīng)保(bǎo)存於(yú)4°C。收(shōu)到抗體(tǐ)後，應(yīng)10,000 x g 離(lí)心(xīn)20秒(miǎo)，使管(guǎn)口螺紋內(nèi)的抗(kàng)體(tǐ)溶液(yè)全部離心(xīn)至管(guǎn)底，用低(dī)蛋(dàn)白吸(xī)附(fù)性的微(wēi)量(liáng)離(lí)心管分裝。分裝(zhuāng)量(liáng)的多少(shǎo)取決(jué)於每(měi)次試驗的使(shǐ)用(yòng)量(liáng)。分裝(zhuāng)量(liáng)不能(néng)少於(yú)10μl；分(fēn)裝量(liáng)越(yuè)少，由(yóu)於蒸發和吸附於管(guǎn)內壁而引起的損失會(huì)越(yuè)大。

除了腹水(shuǐ)液(yè)含蛋(dàn)白酶應立即(jí)凍(dòng)存(cún)外，大多(duō)數(shù)抗體接收後可(kě)在(zài)4°C保存(cún)一至(zhì)兩周(zhōu)，隨後可凍存(cún)以(yǐ)長期(qī)保存。同(tóng)樣(yàng)，應按照說(shuō)明書(shū)推薦的條件進行保(bǎo)存。

二(èr)，特殊情況(kuàng)

1，酶聯(lián)抗(kàng)體，不應(yīng)凍存(cún)，4°C可(kě)保(bǎo)證穩定。凍(dòng)融(róng)會(huì)降低(dī)酶的活性，同(tóng)時影響抗體的(dí)吸附能(néng)力。

2，偶聯標(biāo)記(jì)的抗(kàng)體(tǐ)，無論是標(biāo)記的熒光染(rǎn)料(liào)，酶(méi)還是生(shēng)物(wù)素(sù)，都應保存於深(shēn)色的管內(nèi)並包裹上(shàng)鋁箔。如果暴(bào)露在(zài)光(guāng)綫下可能會(huì)減弱偶聯(lián)標(biāo)記(jì)物的活性(xìng)。熒光標(biāo)記物尤(yóu)其容易受到光(guāng)漂白(bái)作用，整個(gè)實(shí)驗過程(chéng)中均應(yīng)避光(guāng)。

3，免疫(yì)球(qiú)蛋白G3同(tóng)種型(xíng)抗(kàng)體凍融後易(yì)形(xíng)成(chéng)聚合物，因此應(yīng)一直(zhí)保(bǎo)存於(yú)4°C。

4，用疊(dié)氮hua鈉(nà)防(fáng)止汙(wū)染

為防(fáng)止微(wēi)生物汙染，在抗體溶液中(zhōng)應(yīng)加入疊氮(dàn)hua鈉，終(zhōng)濃(nóng)度為0.02%（質量(liáng)百分比）。

5，什麼(mó)時(shí)候不(bù)能用疊氮hua鈉

如(rú)果用(yòng)抗體標記(jì)活細胞(bāo)，或(huò)用於(yú)體(tǐ)內實(shí)驗(yàn)，確保(bǎo)所(suǒ)用(yòng)製劑中(zhōng)不含疊氮(dàn)hua鈉。這種(zhǒng)抗生素對大(dà)多數(shù)有機(jī)體(tǐ)都有毒(dú)性(xìng)：會阻斷細胞色素電子傳遞(dì)係(xì)統(tǒng)的信號。

疊(dié)氮hua鈉會(huì)幹擾胺基的(dí)偶聯標(biāo)記，應(yīng)在進(jìn)行標(biāo)記之前將其(qí)除去(qù)。標(biāo)記(jì)後抗(kàng)體可保(bǎo)存(cún)於疊氮hua鈉，也(yě)可用(yòng)不含胺基(jī)的硫柳汞替(tì)代。疊氮hua鈉可用透析或凝膠過濾法從抗(kàng)體溶液中(zhōng)除(chú)去。免(miǎn)疫球蛋白 G的分(fēn)子量是150,000 kDa（免(miǎn)疫(yì)球(qiú)蛋白M的分子(zǐ)量是(shì)600,000 kDa），疊(dié)氮hua鈉(nà)的分(fēn)子量(liáng)是(shì)65道(dào)爾頓(dùn)。使用(yòng)14,000 kDa的(dí)微量(liáng)透析(xī)裝(zhuāng)置，隨(suí)著疊氮hua鈉的擴散(sàn)，抗體(tǐ)將保留。將帶有(yǒu)燒杯的磁力攪(jiǎo)拌器置(zhì)於4°C攪(jiǎo)拌(bàn)透(tòu)析裝(zhuāng)置6小時 , 每毫升(shēng)抗體溶液要(yào)用至少(shǎo)1升的(dí)磷(lín)酸鹽(yán)緩(huǎn)衝液。更換(huàn)2次(cì)lin酸鹽緩衝液，每次均(jūn)攪拌至少6小時。如果(guǒ)可(kě)以(yǐ)的話(huà)，所(suǒ)有(yǒu)材料(liào)均要(yào)求(qiú)無(wú)菌，所有溶液(yè)都(dū)應(yīng)無菌(jūn)配(pèi)製。

三，凍存/復蘇(sū)的(dí)損(sǔn)失

反(fǎn)復(fù)凍融可(kě)使抗體變(biàn)性，使其形成聚合(hé)物而降低了(liǎo)抗(kàng)體(tǐ)結(jié)合(hé)能(néng)力。

大多(duō)數(shù)抗體(tǐ)在-20°C保(bǎo)存就足(zú)夠(gòu)了，沒有必(bì)要(yào)置於(yú)-80°C保存。千萬(wàn)不要使用無(wú)霜的冰(bīng)箱(xiāng)。反復凍(dòng)融能(néng)減少霜(shuāng)的形成，但這正(zhèng)是應該避(bì)免的(dí)。同理，抗體(tǐ)應該放(fàng)置於(yú)冰箱中溫度(dù)變化(huà)最小的部位，如應(yīng)放(fàng)置於冰箱格裏(lǐ)，而不應放(fàng)置於冰(bīng)箱門上(shàng)。

稀(xī)釋(shì)至工(gōng)作濃度(dù)的抗(kàng)體(tǐ)最好不要(yào)在(zài)4°C保(bǎo)存超(chāo)過(guò)一(yī)天時間。通常(cháng)蛋白質在較高濃(nóng)度保(bǎo)存時(shí)不(bù)易發生降(jiàng)解(jiě)，理(lǐ)想(xiǎng)濃度(dù)為1mg/ml或更(gēng)高(gāo)，因為抗(kàng)體溶(róng)液中包含了(liǎo)如牛(niú)血(xiě)清白蛋白(bái)等蛋(dàn)白質穩定(dìng)劑(jì)。加(jiā)入(rù)的蛋白可(kě)吸(xī)附於管(guǎn)壁從而使(shǐ)抗體(tǐ)的(dí)損(sǔn)失減(jiǎn)到(dào)最小。對(duì)用於(yú)聚合的(dí)抗(kàng)體(tǐ)，不應加入(rù)蛋白(bái)穩(wěn)定(dìng)劑(jì)，因(yīn)為(wéi)其可能會與(yǔ)抗(kàng)體(tǐ)競爭而降低(dī)抗體(tǐ)的聚合(hé)活(huó)性。

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