qPCR擴(kuò)增(zēng)過程(chéng)中(zhōng)，擴增產物的(dí)熒光(guāng)信(xìn)號達到(dào)設定的(dí)熒光閾值時(shí)的所對應(yīng)的(dí)擴增循環(huán)數（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。簡(jiǎn)單講，Ct值(zhí)就是(shì)qPCR中起(qǐ)始模板擴增達(dá)到一定產物(wù)量時(shí)，所對(duì)應(yīng)的循環數。那麼(mó)你知道qPCR實驗中的Ct值有什麼作用嗎？讓(ràng)我(wǒ)們一(yī)起來看看吧！

一(yī)，指數擴增(zēng)，模板量與Ct值(zhí)的關係

理想情況下，qPCR中(zhōng)的基因(yīn)經過一定的循(xún)環(huán)數被(bèi)指(zhǐ)數(shù)擴(kuò)增(zēng)而(ér)積累(léi)，擴(kuò)增(zēng)循環數和產物(wù)量之間(jiān)的關係(xì)是：擴增(zēng)產物量=起始模板量×（1+En）循環個數(shù)。然而qPCR反(fǎn)應並不是一(yī)直(zhí)處於(yú)理(lǐ)想(xiǎng)情況(kuàng)下，當擴增產(chǎn)物量(liáng)達到“一定產(chǎn)物量(liáng)"時(shí)，此時循環(huán)個(gè)數(shù)為(wéi)Ct值，處於(yú)指數(shù)擴(kuò)增時(shí)期(qī)。Ct值與起始(shǐ)模(mó)板量的關係(xì)：模板的Ct值與該(gāi)模板的(dí)起始拷(kǎo)貝數(shù)的(dí)對(duì)數存在(zài)綫性關(guān)係。起(qǐ)始模板量(liáng)濃度越(yuè)高，Ct值越(yuè)小；起(qǐ)始模板量濃(nóng)度(dù)越(yuè)低，Ct值越(yuè)大。

二(èr)，擴(kuò)增曲綫，熒光(guāng)閾值與一(yī)定(dìng)產(chǎn)物量

qPCR擴增(zēng)產物量是以熒光信號(hào)的形式直接(jiē)呈(chéng)現，也(yě)就是擴(kuò)增(zēng)曲(qū)綫(xiàn)。在(zài)PCR早期，擴增(zēng)處於(yú)理(lǐ)想情況(kuàng)下，循環數較少(shǎo)，產(chǎn)物(wù)積(jī)累少，產(chǎn)生熒光(guāng)的水平不能與熒光(guāng)本底背(bèi)景明(míng)顯地(dì)區別，之(zhī)後(hòu)熒(yíng)光的產(chǎn)生(shēng)增(zēng)加進入指(zhǐ)數期。可以在PCR反應(yīng)剛處於(yú)指(zhǐ)數期的(dí)某一(yī)點上來檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量，以此(cǐ)作為“一定產(chǎn)物量(liáng)"，並且由此來推(tuī)斷模板(bǎn)最初的含(hán)量。因此(cǐ)，一定(dìng)產物(wù)量對應(yīng)的熒光(guāng)信號(hào)強(qiáng)度，也就是(shì)熒(yíng)光閾值(zhí)。

在(zài)PCR的後期，擴增(zēng)曲(qū)綫(xiàn)不(bù)再(zài)呈現(xiàn)指數擴(kuò)增，進入綫性期和平(píng)台期。

三(sān)，Ct值的重現性(xìng)

PCR循(xún)環(huán)在到達(dá)Ct值所在的(dí)循環數(shù)時，剛剛(gāng)進(jìn)入(rù)真(zhēn)正的指(zhǐ)數擴增(zēng)期，此時微(wēi)小誤差尚(shàng)未(wèi)放(fàng)大，因此(cǐ)Ct值的(dí)重現(xiàn)性(xìng)極hao，即同(tóng)一(yī)模板(bǎn)不(bù)同時(shí)間擴增(zēng)或同一(yī)時間不(bù)同管(guǎn)內擴增(zēng)，得(dé)到的(dí)Ct值(zhí)是(shì)恒定的。

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