隨(suí)著(zhuó)基因(yīn)和(hé)蛋(dàn)白(bái)功能(néng)的深入研(yán)究(jiū)，轉(zhuǎn)染已(yǐ)經成為(wéi)科研實驗(yàn)中最(zuì)chang用的(dí)技(jì)術(shù)手(shǒu)段之(zhī)一(yī)。那麼在細胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中需要(yào)注意(yì)什(shí)麼(mó)呢(ní)？讓我(wǒ)們(mén)一起(qǐ)來(lái)看看(kàn)吧！

一，轉染(rǎn)試劑

不同(tóng)細胞係轉(zhuǎn)染效(xiào)率通常(cháng)不(bù)同(tóng)，但細胞係(xì)的選擇通常(cháng)是根(gēn)據實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉染實驗(yàn)前應根(gēn)據實驗要求(qiú)和細胞特(tè)性選(xuǎn)擇適合的(dí)轉染試劑(jì)。

每(měi)種(zhǒng)轉(zhuǎn)染試(shì)劑都會(huì)提供一(yī)些已(yǐ)經(jīng)成功轉染(rǎn)的(dí)細(xì)胞株列表和文獻，通過這(zhè)些(xiē)資料可選擇(zé)最shi合(hé)實驗設計的轉染試劑。

不同(tóng)轉染試劑(jì)有不同的轉染方法(fǎ)，但大多大同小異。轉染(rǎn)時(shí)應(yīng)跟據(jù)具(jù)體轉(zhuǎn)染(rǎn)試劑推薦(jiàn)的方法(fǎ)，但也要(yào)注(zhù)意，因(yīn)不同實驗室培養(yǎng)的(dí)細(xì)胞性質不同，質粒(lì)定量差異，操(cāo)作手(shǒu)法上的差(chà)異等，其(qí)轉染效果(guǒ)可(kě)能不(bù)同，應根據(jù)實(shí)驗室的具(jù)體條(tiáo)件來確定最佳轉(zhuǎn)染條件。

二(èr)，細胞狀態(tài)和(hé)密(mì)度

轉(zhuǎn)染前細(xì)胞的狀態和密(mì)度(dù)都非(fēi)常影響轉染效率(shuài)和(hé)後期的實驗(yàn)結果(guǒ)。最shi合轉(zhuǎn)染的(dí)細胞(bāo)是(shì)經過幾(jī)次傳(chuán)代(dài)後(hòu)達到(dào)指數生長(cháng)期的細(xì)胞，細(xì)胞生(shēng)長旺(wàng)盛(shèng)，最(zuì)容易(yì)轉染。

細胞(bāo)狀態不好，會(huì)導致轉(zhuǎn)染效率(shuài)低(dī)下，為(wéi)確(què)保良(liáng)好的(dí)細胞狀態需注意以下幾(jī)點(diǎn)：

1.選(xuǎn)擇傳代(dài)次數(shù)較(jiào)低並(bìng)處於對數生長期(qī)的(dí)細(xì)胞(bāo)進行轉染(rǎn)。

2.細(xì)胞(bāo)密(mì)度（%匯合度）達到60%-80%時，再進行轉染(rǎn)，此(cǐ)時(shí)轉(zhuǎn)染效(xiào)率較高(gāo)。切勿讓細胞(bāo)長到匯合狀態或過度生(shēng)長(cháng)。

3.同時注(zhù)意(yì)在轉染(rǎn)後收細(xì)胞(bāo)時的(dí)密度不(bù)要(yào)過(guò)爆。因(yīn)為(wéi)細胞長的(dí)過爆嚴重(zhòng)影(yǐng)響(xiǎng)細胞的(dí)狀(zhuàng)態(tài)（周期進(jìn)程(chéng)阻(zǔ)滯(zhì)，凋亡增加等）從而影響實驗(yàn)結(jié)果(guǒ)。一般為前(qián)一(yī)天下(xià)午鋪(pū)板，第二天上午進(jìn)行轉染，48小時(shí)候收細胞進(jìn)行(háng)功(gōng)能(néng)檢測。

三(sān)，使用優(yōu)質DNA

DNA的(dí)質量影(yǐng)響轉染效率：

1.脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)轉染基於(yú)電(diàn)荷(hé)吸引原理，如果(guǒ)DNA的純度(dù)差，則(zé)其攜(xié)帶(dài)的少(shǎo)量的(dí)鹽離子，蛋白，代(dài)謝物(wù)汙(wū)染都會(huì)顯(xiǎn)著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物(wù)的有效形成(chéng)及轉染的效率。

2.含有內(nèi)毒素的質粒對細胞(bāo)有(yǒu)很大的(dí)毒性(xìng)作(zuò)用(yòng)。

3.為實現高效(xiào)率，低(dī)毒性的轉染，應(yīng)使(shǐ)用高質量(liáng)的DNA（高純度，無(wú)菌(jūn)，無內毒素）。

4.使(shǐ)用無(wú)內毒(dú)素的試劑盒(hé)和實驗(yàn)方案製(zhì)備(bèi)DNA；

5.通(tōng)過測量OD值來確(què)定DNA純度(dù)和濃度，OD 260/280 值應介(jiè)於(yú)1.7-1.9之間，越接近1.8越(yuè)好。讀數(shù)小於1.8，表明(míng)樣品(pǐn)可(kě)能(néng)被芳香族產物(wù)（即苯酚）或(huò)蛋白質汙(wū)染；讀數大(dà)於2.0，則表(biǎo)明樣品(pǐn)被RNA汙(wū)染(rǎn)。

6.當轉(zhuǎn)染的DNA會(huì)編(biān)碼對細(xì)胞有(yǒu)毒害作用(yòng)的(dí)產物時(shí)，可使用弱(ruò)啟動子或可誘(yòu)導的(dí)啟動(dòng)子(zǐ)限(xiàn)zhi毒性基因產物表達對細胞造成(chéng)的(dí)損害。

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