ELISA酶(méi)聯免(miǎn)疫吸(xī)附試(shì)驗是(shì)目前(qián)臨床上(shàng)zui常(cháng)用(yòng)的(dí)免疫(yì)學檢驗(yàn)方(fāng)法，由於其(qí)試(shì)劑穩定(dìng)，易保存(cún)，操(cāo)作簡(jiǎn)便(biàn)，結果判斷較客觀，既適(shì)宜(yí)於大規模(mó)篩(shāi)查試(shì)驗，又(yòu)可(kě)用於少量(liáng)標(biāo)本(běn)的(dí)檢(jiǎn)測(cè)，既(jì)可以做定(dìng)性(xìng)試(shì)驗(yàn)也可(kě)以做定量分(fēn)析(xī)，目前(qián)已廣(guǎng)泛用(yòng)於(yú)微(wēi)生(shēng)物學，寄生蟲(chóng)學，腫(zhǒng)瘤學和細胞因子(zǐ)檢測等領域。那麼(mó)你知(zhī)道(dào)影響ELISA結果(guǒ)的因素(sù)有哪些嗎？讓我們一(yī)起(qǐ)來看(kàn)看(kàn)吧！

一(yī)，樣(yàng)品(pǐn)

樣品是檢(jiǎn)測的(dí)前提(tí)，樣品質量(liáng)會(huì)直接影(yǐng)響實驗(yàn)結果(guǒ)。可以(yǐ)用ELISA來(lái)檢(jiǎn)測(cè)的樣(yàng)品很(hěn)多，根(gēn)據檢測(cè)項目不(bù)同可以是血(xiě)清，血漿(jiāng)，唾液(yè)，尿液(yè)等(děng)，但大部分(fēn)還是以血(xiě)清(qīng)為(wéi)樣(yàng)品。作為血(xiě)清(qīng)樣(yàng)品(pǐn)，應避免溶血(xiě)，溶血(xiě)可(kě)能會增加非特(tè)異(yì)性顯色(sè)，導(dǎo)致(zhì)結果(guǒ)出(chū)現誤(wù)差(chà)。

血清(qīng)樣品的反復凍融會使(shǐ)血清中(zhōng)的(dí)抗體效價下降，所以需要(yào)多(duō)次檢測的血清(qīng)樣品，如在5d內檢(jiǎn)測完，可4℃保存，如需長(cháng)時間檢(jiǎn)測，可(kě)進行分裝(zhuāng)凍存。樣(yàng)品如被細菌汙染(rǎn)腐敗，可能會導致(zhì)假陽性(xìng)。

二(èr)，溫度

溫度主(zhǔ)要影(yǐng)響(xiǎng)抗原(yuán)抗體反應(yīng)，酶(méi)促反應速度及非特(tè)異性吸附(fù)，溫度升高可使抗原(yuán)抗體(tǐ)結(jié)合反應(yīng)加(jiā)速(sù)，但也易引起(qǐ)抗原(yuán)抗(kàng)體(tǐ)復合(hé)物的(dí)解離。酶促(cù)反(fǎn)應速(sù)度(dù)同樣隨溫度(dù)升(shēng)高而(ér)增快(kuài)，但是酶(méi)蛋白變性(xìng)也(yě)加快(kuài)，喪失酶(méi)學(xué)活性(xìng)，降(jiàng)低酶的有效(xiào)濃(nóng)度(dù)而(ér)減慢(màn)反應速度(dù)，溫度(dù)低時以(yǐ)前者(zhě)為主(zhǔ)，高時以後者為主(zhǔ)。

溫度(dù)是質量(liáng)控製的一(yī)個重要方麵，一般(bān)允(yǔn)許(xǔ)±1℃的(dí)誤(wù)差。最(zuì)好水(shuǐ)浴(yù)，微(wēi)孔板浮在(zài)水麵，使(shǐ)溫(wēn)度迅(xùn)速(sù)平衡(héng)。如放(fàng)溫箱內(nèi)溫育(yù)，微(wēi)孔(kǒng)板(bǎn)不(bù)應疊(dié)置(zhì)，為(wéi)避(bì)免蒸(zhēng)發，板上(shàng)應加(jiā)蓋，盛(shèng)放(fàng)微孔板(bǎn)的濕盒(hé)應是(shì)金(jīn)屬(shǔ)的(dí)，傳熱(rè)容(róng)易。空(kōng)濕(shī)盒(hé)應預先(xiān)放(fàng)在溫箱(xiāng)中，以(yǐ)平衡溫度，在室(shì)溫較低(dī)時(shí)更需(xū)要。

三(sān)，時(shí)間

在(zài)溫度(dù)保證(zhèng)的前提下(xià)，時間(jiān)的控製至(zhì)關重(zhòng)要，尤其是底(dǐ)物(wù)顯色的時間(jiān)控製(zhì)，顯色時間(jiān)不(bù)足或(huò)過長會(huì)導(dǎo)致(zhì)實驗(yàn)不(bù)成(chéng)立，無(wú)法(fǎ)對(duì)檢測(cè)結果(guǒ)進行(háng)判斷(duàn)。

加(jiā)人(rén)標本(běn)，試(shì)劑(jì)及(jí)混(hùn)合的時(shí)間(jiān)稱(chēng)為操作時差。操(cāo)作(zuò)時(shí)差在(zài)每個試驗中(zhōng)都存(cún)在(zài)，對(duì)結果(guǒ)或(huò)多或少(shǎo)有(yǒu)影(yǐng)響(xiǎng)。對手(shǒu)工(gōng)操(cāo)作，尤(yóu)其(qí)是樣(yàng)品量(liáng)大(dà)的項目(mù)，從加(jiā)人第一個標本到最後一個(gè)標本，需幾(jī)十(shí)分(fēn)鐘，加人試(shì)劑及混匀存(cún)在很(hěn)大的時間差異，使抗原(yuán)抗體和酶促(cù)反應時間(jiān)不一(yī)致，易產生假(jiǎ)陽(yáng)性(xìng)，假(jiǎ)陰性結果。

因(yīn)此，樣(yàng)品過(guò)多時，請(qǐng)選(xuǎn)擇分批(pī)操(cāo)作，對(duì)勿須(xū)更換(huàn)移液(yè)口吸嘴的(dí)酶(méi)結合物，底物的加(jiā)樣可(kě)選擇(zé)8聯(lián)或(huò)12聯專用(yòng)的(dí)多道加液(yè)器(qì)。亦可避免單孔滴加(jiā)底物(wù)時遺(yí)漏多(duō)加。

四，試(shì)劑

試劑盒(hé)要根(gēn)據(jù)要求進(jìn)行保存(cún)，並保證(zhèng)在有(yǒu)效期(qī)內(nèi)使用(yòng)，使用(yòng)前應(yīng)平衡(héng)到(dào)室(shì)溫(wēn)。新(xīn)購(gòu)入(rù)的試(shì)劑盒要進(jìn)行(háng)校(xiào)驗，檢查(chá)實(shí)驗是否(fǒu)成(chéng)立(lì)，不同(tóng)的(dí)試(shì)劑(jì)盒或不(bù)同(tóng)批(pī)號(hào)的試(shì)劑不(bù)可(kě)混(hùn)用。

五，其他(tā)

封(fēng)板膜封(fēng)閉不嚴(yán)或開(kāi)啟(qǐ)時(shí)孔內(nèi)液體(tǐ)蒸(zhēng)發，震(zhèn)出可導致各(gè)孔相互(hù)汙染；操(cāo)作時接(jiē)觸到(dào)ELISA板底導(dǎo)致透光(guāng)度改變(biàn)，影響酶標儀(yí)測量結(jié)果(guǒ)；

加樣圖(tú)省(shěng)事(shì)，未(wèi)認(rèn)真(zhēn)更換(huàn)移液器吸頭(tóu)，認(rèn)為其(qí)帶入(rù)標本(běn)殘留量小，不(bù)易(yì)影(yǐng)響(xiǎng)結(jié)果(guǒ)，是部(bù)分檢測人員(yuán)常有的心理。因(yīn)此加(jiā)標本(běn)時必須認真更(gēng)換移移(yí)液器吸(xī)頭，防止移(yí)液(yè)器(qì)吸頭殘留痕量產生假(jiǎ)陽性結果。加(jiā)樣(yàng)時應防止(zhǐ)濺出(chū)汙染其它標本(běn)。

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